国家自然科学基金(31072158)
- 作品数：5 被引量：20H指数：3
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- 相关机构：贵州大学贵州省动物疫病研究室贵州省畜牧兽医研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金贵州省农业攻关项目贵州省农业科学院研究生科研创新基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 贵州省五个猪场蚊蝇携带PRRSV的调查被引量：2
- 2011年
- 为监测猪场内的蚊蝇是否能携带猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）,采集贵州省5个养猪场蚊蝇样本,采用RT-PCR方法引物蚊蝇样本进行PRRSV N基因检测,对检测为阳性样本的PRRSV-NSP2基因进行克隆并测序,最后对NSP2基因进行生物信息学分析。结果显示,从花溪、乌当、毕节3个地方猪场的蚊蝇样本中均扩增出372 bp左右的片段。贵州省蚊蝇样本的3株PRRSV-NSP2基因的核苷酸序列之间存在较高的同源性,可达97.9%~98.3%;蚊蝇样本的PRRSV-NSP2基因片段与贵州猪场猪源PRRSV流行株相比具有较高的核苷酸同源性,高达97.6%~100.0%,与国内最近流行变异毒株的核苷酸同源性为84.3%~98.8%,而与早期国内外分离经典毒株的核苷酸同源性为77.1%~97.7%。结果表明,从贵州省几个猪场内采集的蚊蝇携带PRRSV。
- 路宪礼周碧君王开功文明程振涛罗意江楠
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒蚊蝇克隆与序列分析
- 猪繁殖与呼吸综合征病毒JL株Nsp10的表达及鉴定
- 2012年
- 为获得猪繁殖与呼吸综合征病毒JL株非结构蛋白Nsp10,以克隆质粒pMD18-T-Nsp10/JL为模板,将Nsp10基因克隆至原核表达载体pET-32a,转化至大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达,对不同温度和IPTG浓度进行优化,以获得Nsp10蛋白表达的最佳条件,采用SDS-PAGE检测目的蛋白的表达情况,并通过Western blotting检测其免疫活性。结果表明,Nsp10基因成功克隆至pET-32a,有分子量约为43.4 kD的融合蛋白获得表达,重组蛋白于诱导4 h后达到高峰,IPTG浓度为0.2-1.2 mmol/L时,重组蛋白表达量无明显差异,Western blotting证实该表达蛋白具有反应原性。
- 周思旋徐健周碧君文明王开功
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒
- 家蝇体内猪繁殖与呼吸综合征病毒的初步分离与鉴定被引量：5
- 2012年
- 为调查养猪场环境中家蝇携带猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)情况,2010年采集贵州某猪场家蝇样本,采用RT-PCR方法筛选阳性样本,接种Marc-145细胞分离培养病毒,对分离获得的家蝇样本的PRRSV Nsp2基因进行克隆和序列分析。针对PRRSV N基因家蝇样本扩增出377bp的特异性片段,阳性家蝇样本接种的Marc-145细胞出现明显CPE现象,针对PRRSV Nsp2基因细胞培养物扩增出1064bp的特异性片段,测序结果显示,家蝇样本的细胞培养物的PRRSVNsp2基因片段与贵州猪场猪源PRRSV流行株相比具有较高的核苷酸同源性,高达97.1%～98.5%。从而初步推断家蝇也可能成为PRRSV携带者。
- 路宪礼王开功文明罗成波刘飞周碧君罗意姚瑶
- 关键词：家蝇猪繁殖与呼吸综合征病毒RT-PCR
- 猪繁殖与呼吸综合征综合防控技术的研究被引量：10
- 2012年
- 为探索猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)的综合防控技术,采用现场调查、血清学监测和病原学诊断等方法,对贵州省2007年3月至2009年10月采集的PRRS样本进行了血清学流行病学调查和病原学诊断,对比了不同疫苗免疫效果,测定了仔猪母源抗体的消长规律,确定了不同免疫/感染状态下仔猪首免日龄,结果表明,PRRS易于7～10月份流行;仔猪和能繁母猪的感染率较高,达到96.15%和74.73%;弱毒疫苗免疫效果优于灭活疫苗;哺乳仔猪母源抗体水平随着日龄增长逐渐降低,因此免疫PRRSV母猪所产仔猪的首免日龄定为17～20日龄;曾感染PRRSV母猪所产仔猪首免日龄定为30～34日龄。同时调查了猪场中蚊蝇携带PRRSV情况,初步证明猪场中的蚊蝇均可携带PRRSV;通过消毒试验对比进行了综合防治措施效果初探,取得理想结果。为贵州省PRRS综合防控措施的实施和推广提供了技术支撑。
- 崔亚兰周碧君文明王开功程振涛李敬丹隆华岳筠
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征综合防控技术
- 高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒JL株Nsp10基因生物信息学分析被引量：3
- 2012年
- 本研究旨在对高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)贵州JL株Nsp10基因(GenBank登录号:EU886322)进行生物信息学分析,了解其生物学特征,为下一步Nsp10的表达和ELISA检测方法的建立奠定基础。应用BioEdit、DNAStar、PsortⅡ、SignalP、TMHMM、ProtFun、Clustal_1.81、Mega等软件对Nsp10蛋白的理化参数、信号肽、跨膜区域、亲水性、表面可及性、抗原性、二级结构、亚细胞定位及与其他PRRSV毒株相应片段同源性等进行分析和预测。该蛋白理论分子质量为26.38ku,pI为8.93,为稳定蛋白,不含信号肽,无跨膜结构,具有良好的形成抗原表位的条件。亚细胞定位结果表明,该蛋白极有可能位于细胞质,其编码氨基酸序列与参考毒株同源性为97.4%～100%。该蛋白保守性较高,是可溶性蛋白,有良好的抗原性,具备作为靶蛋白建立免疫方法的条件。
- 周思旋徐健周碧君王开功
- 关键词：生物信息学分析
