广东省自然科学基金(07005147)
- 作品数：3 被引量：23H指数：1
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- 重组慢病毒载体建立稳定表达绿色荧光蛋白宫颈癌细胞系被引量：1
- 2010年
- 目的构建含绿色荧光蛋白(GFP)基因的重组慢病毒,导入宫颈癌细胞系,建立稳定表达GFP细胞系。方法 2007年9月至2010年6月将含GTP基因载体质粒pGC-FU、包装质粒pHelper1.0及包膜质粒pHelper2.0,用磷酸钙共沉淀法共转染包装细胞系293T,收集病毒颗粒感染人宫颈癌Siha细胞,以流式细胞仪筛选出荧光亮度较强GFP阳性的细胞继续培养。结果利用慢病毒载体可稳定转入GFP基因,获得稳定表达GFP的新宫颈癌细胞系S3,此细胞系中GFP阳性率达99%以上,比较Siha和S3两者生长曲线、细胞周期分布、HPV-16E7的表达量、裸鼠皮下成瘤能力差异均无统计学意义。结论慢病毒高效转入GFP基因,成功建立了表达GFP的S3细胞系,为宫颈癌基因研究提供了便利。
- 苏桂栋尹倩孙桂芹刘柯伶张燕钟梅
- 关键词：宫颈癌绿色荧光蛋白慢病毒
- 人乳头状瘤病毒16型E6基因短发夹结构RNA慢病毒载体的构建及鉴定
- 2011年
- 目的以人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)16型E6基因为靶点,构建小发夹状RNA(small hairpin RNA,shRNA)慢病毒载体.方法将HPV 16E6基因的特异性序列,应用基因重组技术插入到包含U6启动子及绿色荧光蛋白(GFP)报告基因的慢病毒载体pGCL-GFP中.重组质粒命名为pGCL-GFP-HPV16-E,测序鉴定后与慢病毒包装质粒pHelper 1.0及pHelper 2.0通过lipofectamine 2000共转染293T细胞,病毒液根据绿色荧光蛋白(GFP)表达水平测定滴度.结果 PCR扩增和测序结果证实HPV16 E6 shRNA核苷酸链序列插入正确,包装慢病毒产生病毒悬液,测定滴度为2×109 TU/mL.结论应用基因重组技术等方法,可成功构建HPV16 E6 shRNA慢病毒载体.
- 尹倩孙桂芹庄艳艳钟梅苏桂栋
- 关键词：人乳头瘤病毒E6慢病毒
- 广州地区3413例妇女TORCH感染情况的调查分析被引量：22
- 2011年
- 目的了解广州地区育龄妇女和妊娠妇女TORCH感染状况,探讨不良妊娠与TORCH感染的关系以及不同季节TORCH感染的流行情况。方法采用酶联免疫吸附试验对2009年6月至2010年6月的600例育龄妇女和2 813例妊娠妇女(包括2 677例健康妊娠和136例不良妊娠)进行TORCH-IgM抗体检测。结果妊娠妇女巨细胞病毒(CMV)-IgM的阳性率为5.76%,远远高于其他病原体的IgM阳性率,差异有统计学意义(P<0.05);妊娠妇女的TORCH-IgM总阳性率(11.13%)高于育龄妇女的总阳性率(6.50%),差异有统计学意义(P<0.05);不良妊娠妇女所有TORCH项目的 IgM阳性率均显著高于健康妊娠妇女,差异有统计学意义(P<0.05);春、夏季TORCH-IgM总阳性率和纯弓形体(TOX)、CMV、单纯疱疹病毒(HSV)Ⅰ及HSVⅡ的IgM阳性率明显高于秋、冬季,差异均有统计学意义(P<0.05),而风疹病毒(RUV)-IgM阳性率冬、春季显著高于夏、秋季,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论广州地区妊娠妇女CMV阳性率高于妊娠妇女其他病原体阳性率,也高于育龄妇女CMV阳性率;妊娠妇女TORCH总阳性率高于育龄妇女;TORCH系列病原体与不良妊娠及季节密切相关。
- 胡小佳王前周芳李强杨春莉苏桂栋
- 关键词：TORCH巨细胞病毒不良妊娠
