国家教育部博士点基金(20040422029)
- 作品数：3 被引量：3H指数：1
- 相关作者：刘贤锡刘斌徐春晓王伟辛佳璇更多>>
- 相关机构：山东大学山东中医药大学附属医院更多>>
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- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 人精脒/精胺N1乙酰基转移酶基因的克隆、表达和纯化
- 2008年
- 目的构建人精脒/精胺N1乙酰基转移酶基因的原核表达载体,诱导该质粒在大肠杆菌中表达并纯化其表达的重组蛋白。方法从大肠癌组织中提取总RNA,采用RT-PCR法扩增人SSAT基因的cDNA片段,经TA克隆及亚克隆方法构建原核表达载体pTriEx-4-SSAT。将重组表达质粒转化入E.coliJM109(DE3)中,经IPTG诱导表达,SDS-PAGE电泳和Western blot鉴定表达蛋白,并通过6His-tag,利用亲和层析法纯化表达的融合蛋白。结果酶切鉴定和DNA测序显示,人SSAT的cDNA片段成功插入表达载体pTriEx-4中,而且方向正确,SDS-PAGE电泳显示表达出20 kD的外源蛋白。Western blot检测结果显示,表达出的蛋白为6His-tag的融合蛋白,而且用Ni-NTA亲和层析法纯化了该重组蛋白。结论成功构建、表达和纯化了重组SSAT蛋白,为制备其抗体及研究该基因与结直肠肿瘤的关系提供了有力的工具。
- 孙慧龚磊刘斌杨亚培徐春晓刘贤锡
- 关键词：原核表达结直肠肿瘤
- 胃癌鸟氨酸脱羧酶基因表达及临床意义被引量：3
- 2009年
- 目的从mRNA和蛋白质水平研究鸟氨酸脱羧酶在胃癌中的表达,探讨其在胃癌形成中的作用。方法采用半定量RT-PCR技术检测胃癌及相应癌旁组织中ODC mRNA的表达量,采用Western-blot在蛋白质水平检测胃癌及相应癌旁组织中ODC的表达量,并做统计学分析。结果21例胃癌组织中ODC在mRNA和蛋白质水平的表达量均高于癌旁组织(P<0.01)。ODC的表达量低分化胃癌组织显著高于高中分化(P<0.01)。结论ODC表达增强在胃癌发生发展中起重要作用,提示ODC可作为胃癌的基因诊断与治疗的靶点。
- 阎云飞刘斌徐春晓辛佳璇王伟刘贤锡
- 关键词：胃肿瘤鸟氨酸脱羧酶基因表达
- 人鸟氨酸脱羧酶和S-腺苷甲硫氨酸脱羧酶双反义腺病毒载体的构建
- 2005年
- 目的:构建人鸟氨酸脱羧酶(ODC)第三外显子和S-腺苷甲硫氨酸脱羧酶(SAMDC)翻译起始位点双反义RNA腺病毒载体。方法:应用RT-PCR方法扩增出SAMDCmRNA翻译起始位点区205bp的基因片断。插入PMD-18T载体中,经XbaI、XhoI酶切回收,反向插入穿梭质粒pAdTrack-CMV-ODCr,形成重组质粒pAdTrack-ODC-SAMDCr。经PmeI酶切线性化后,转入Adeasy-1细菌与pAdeasy-1质粒发生同源重组。挑选阳性重组质粒pAdeasy-ODC-SAMDCr,经PacI酶切后,转染293细胞,包装出腺病毒颗粒,经荧光显微镜和PCR方法对重组腺病毒进行鉴定。结果:利用RT-PCR方法成功地从大肠癌细胞扩增出205bp的cDNA片断,经测序证实为SAMDC翻译起始位点序列。测序证实,重组质粒pAdTrack-ODC-SAMDCr两个基因插入方向和序列均正确,转入Adeasy-1细菌获得多个阳性重组克隆。pAdeasy-ODC-SAMDCr转染293细胞进行包装扩增,可见明显病毒空斑形成,荧光显微镜下可见绿色荧光蛋白在293细胞中表达,PCR法证实含有目的基因。结论:成功构建并扩增出ODC和SAMDC双反义RNA腺病毒载体,为以后肿瘤的基因治疗和预防研究提供了必要工具。
- 张冰刘贤锡姜春英张岩胡海燕耿昭
- 关键词：鸟氨酸脱羧酶S-腺苷甲硫氨酸脱羧酶腺病毒载体RNA反义
