浙江省科技攻关计划(2005C12019-02)
- 作品数：25 被引量：136H指数：7
- 相关作者：曹家树向珣刘乐承叶纨芝余小林更多>>
- 相关机构：浙江大学长江大学石河子大学更多>>
- 发文基金：浙江省科技攻关计划国家自然科学基金浙江省自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 一个白菜花粉发育相关的新基因BcMF7的鉴定被引量：3
- 2007年
- 利用cDNA-AFLP技术分析了白菜(Brassica campestris L. ssp. chinensis Makino,syn.B. rapa L.ssp. chinensis)雄配子减数分裂的胞质分裂突变体(male meiotic cytokinesis,mmc)和野生型植株花蕾基因表达的差异,克隆了其中一个在野生型花蕾中特异表达的基因BcMF7,序列分析发现该基因的最大开放阅读框为390bp,编码129个氨基酸,推测的蛋白质分子量为13.75kD,含有8个蛋白激酶C磷酸化位点,2个酪蛋白激酶II磷酸化位点,2个酪氨酸激酶磷酸化位点,2个N-糖基化位点以及2个N-豆蔻酰化位点等,这些位点均与细胞内信号传导、蛋白定位以及黏附等过程有关.时空表达特点分析发现BcMF7在花粉中特异表达,其转录本最早在花粉发育的四分体时期开始出现,在单核小孢子时期表达丰度达到最高,随后在成熟花粉粒形成时期表达量又有所下降.推测BcMF7可能在花粉发育的四分体时期到成熟花粉粒形成过程的信号传导中发挥重要作用.
- 黄鹂曹家树张豫超叶意群
- 关键词：花粉发育
- 芜菁霜霉病离体接种方法初报被引量：2
- 2006年
- 以对霜霉病特别敏感的品种白蔓菁和对霜霉病免疫的品种耐病98-1芜菁为材料,探讨芜菁霜霉病离体接种抗病鉴定的有效方法。结果表明,芜菁叶片离体接种与田间材料病害情况相符,对接种叶片和田间自然感病叶片病原菌进行形态特征观察,进一步证明同为寄生霜霉菌。
- 王神云曹家树陈能阜
- 关键词：芜菁霜霉病离体接种
- 白菜BcMF2基因在大肠杆菌中的高效表达被引量：2
- 2006年
- 通过PCR方法扩增BcMF2 cDNA完整的编码区序列,构建pET-BcMF2重组质粒,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导融合蛋白高效表达;SDS-PAGE电泳检测发现在70 kD处有一条蛋白质特异条带,与预期的目的产物蛋白带大小一致,同时发现,其阳性克隆在30℃和IPTG终浓度为0.4～1.0 mmol·L^(-1)时诱导6 h,均能获得较高的表达量。
- 张弢刘乐承曹家树
- 关键词：CAMPESTRIS多聚半乳糖醛酸酶原核表达
- 白菜雄性不育相关基因BcMF3功能的反义RNA验证被引量：3
- 2006年
- 为了研究白菜等十字花科植物花粉发育及雄性不育发生的机理,根据编码果胶甲酯酶的白菜雄性不育相关基因BcMF3的cDNA序列设计特异引物,从普通白菜(Brassica campestrisssp.chinensisvar.communis,syn.B.rapassp.chinensisvar.communis)花蕾cDNA中扩增出458 bp的片断,构建BcMF3的反义RNA植物表达栽体,然后转化菜心(B.campestrisssp.chinensisvar.parachinensis).研究发现,31.3%菜心转基因植株花粉表现出畸形,而且只有部分花粉具有活力,花粉离体萌发率降低为31.6%,其花药果胶甲酯酶活性降低了12.8%.上述结果表明BcMF3基因与普通白菜和菜心等白菜植物的花粉发育密切相关.
- 刘乐承余小林叶纨芝向珣曹家树
- 关键词：普通白菜BRASSICACAMPESTRISBRASSICARAPA果胶甲酯酶
- 白菜雄性不育相关新基因BcMF1的分离及特征分析被引量：9
- 2008年
- 【目的】筛选与白菜雄性不育性状相关的新基因,为研究植物雄性不育的分子机制提供依据。【方法】利用cDNA-AFLP技术分析白菜核雄性不育两用系‘ZUBajh97-01AB’的表达差异,在可育株群中扩增出1条特异条带BcMF-A15T17,通过RACE和PCR技术扩增得到该基因的cDNA和DNA全长序列,并用Northern杂交验证了该基因的表达特征。【结果】该基因被命名为BcMF1,它的cDNA全长为1684bp,基因全长为1985bp,BcMF1基因仅在两用系可育株群的中、大花蕾中特异表达。推测的BcMF1蛋白含有471个氨基酸,与拟南芥未知功能蛋白家族DUF1216成员的相似性较高,预测该蛋白是一个定位在胞外的分泌蛋白。【结论】BcMF1基因是一个与白菜细胞核雄性不育相关的新基因。
- 王华新王永勤曹家树向珣余小林叶纨芝
- 关键词：雄性不育基因克隆
- 白菜雄性不育相关基因BcMF4的反义RNA验证被引量：2
- 2007年
- 根据普通白菜(Brassica campestris ssp.chinensis var.communis)雄性不育相关基因BcMF4的cDNA序列设计特异引物,从普通白菜花蕾cDNA中扩增出607 bp的片断,然后将该片段连接至双元载体pBI12l中,得到反义RNA植物表达载体并导入农杆菌LBA4404菌株中;通过组织培养途径转化菜心(B.campestris ssp.chinensis var.parachinensis),得到了12株转基因植株,其中5株的43.7%的花粉为缩小空瘪畸形,29.6%的花粉缺乏生活力,而且其花粉离体萌发率降低至24.7%.结果表明,反义RNA技术沉默BcMF4基因导致了菜心转基因植株的部分花粉发育不良,BcMF4基因在普通白菜和菜心等花粉发育中起着重要作用.
- 刘乐承曹家树
- 关键词：普通白菜菜心雄性不育反义RNA花粉
- 榨菜胞质雄性不育分子标记orf324/orf305的分子鉴定
- 1.研究目的研究表明,植物胞质雄性不育与线粒体基因组的重组、插入以及重排产生新的序列等密切相关。本研究以雄蕊瓣化,败育彻底的榨菜胞质雄性不育系及其保持系为材料,通过对榨菜线粒体基因组中43个蛋白编码基因的筛选,得到新的与...
- 余小林肖秋滨陈竹君曹家树Hirata Yutakao
- 文献传递
- 紫菜薹快速碱化因子基因BcMF14p的序列与表达分析被引量：7
- 2008年
- 快速碱化因子是近年来新发现的一种植物多肽类信号分子。根据已知的普通白菜两用系中可育株系特异表达的快速碱化因子基因BcMF14序列,在其编码框两侧设计引物,从紫菜薹中克隆出该类信号分子基因,命名为BcMF14p(登陆号:EF523517),全长273 bp,不含内含子,编码框包含222个核苷酸,编码73个氨基酸。NCBI在线同源比对结果表明该基因属于快速碱化因子家族,与花椰菜、拟南芥等的快速碱化因子核苷酸序列相似性达到86%以上。对该信号分子的表达进行RT-PCR分析,结果显示BcMF14p只在紫菜薹花蕾、花、角果等生殖器管中表达,在茎、叶等营养器官中不表达,说明BcMF14p可能参与紫菜薹生殖发育过程中的信号传导。
- 李焰焰曹家树
- 关键词：紫菜薹
- BcA9启动子调控的反义BcMF12对白菜基因沉默的效果被引量：3
- 2008年
- 【目的】探讨花药绒毡层特异启动子BcA9调控的反义BcMF12基因对白菜(Brassica campestris L.ssp.chinensis,syn.B.rapaL.ssp.chinensis)基因沉默的效果,明确其对花粉发育的影响。【方法】在从白菜花蕾cDNA中克隆BcMF12基因的保守区段的基础上,将白菜花药特异表达启动子BcA9与反义BcMF12基因融合,构建反义表达载体,并经农杆菌介导导入到白菜基因组中,利用抗生素筛选和分子检测筛选出转基因植株。【结果】PCR和Southern检测结果表明,BcA9启动子驱动的反义BcMF12-GUS报告基因已整合到白菜基因组中;Northern杂交显示转基因植株花蕾和花中的BcMF12在mRNA水平的表达明显受到抑制,而且花粉萌发率显著下降。【结论】BcA9调控的反义BcMF12基因明显抑制了BcMF12的表达,从而影响白菜花粉的发育。
- 宋江华朱熠鹏余小林向珣曹家树
- 关键词：白菜反义RNAGUS活性
- 十字花科植物LTP基因BcMF15同源序列克隆与进化分析被引量：1
- 2008年
- 为获取LTP在物种间的演化和分类信息,并为验证该基因在花粉发育过程中的生物学功能提供前期证据,根据白菜雄性不育相关的LTP基因BcMF15全长序列设计引物,运用PCR技术分别从十字花科6属10种材料中克隆了LTP基因BcMF15的同源序列。经比较分析表明,这些同源序列的相似性达80%以上,所推导的氨基酸序列相似性达53%以上,且两者种间差异分别为0~1.1%、0~4.0%,除’圆白’萝卜和其他属的差异较大外,属间差异分别是0.1%~23.4%、0.9%~5.0%。LTP基因的氨基酸序列在N端的跨膜疏水结构域高度保守,而在C端则存在一定程度的变异。这些结果表明该基因具有较好的保守性,可能在十字花科植物的花粉发育中行使重要的功能。由核酸序列构建的分子系统树可知,在亲缘进化关系上芸薹属与萝卜属较近,其他依次为荠菜属、拟南芥属和山芥属,而与诸葛菜属最远,可见在十字花科BcMF15序列差异属间较种间大。
- 田爱梅曹家树
- 关键词：十字花科克隆系统发育
