博士科研启动基金(2013B06)
- 作品数：6 被引量：31H指数：3
- 相关作者：孙爱华李召东吴森林刘小香陈芳更多>>
- 相关机构：杭州医学院杭州市红十字会医院嘉兴市第一医院更多>>
- 发文基金：博士科研启动基金浙江省卫生高层次创新人才培养工程项目浙江省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 干扰素体外释放酶联免疫法在痰涂片和痰培养均阴性肺结核诊断中的应用被引量：9
- 2014年
- 目的探讨干扰素体外释放酶联免疫法(IFN-γrelease assay,IGRA)在痰涂片和痰培养均阴性肺结核快速诊断中的应用价值。方法用γ-干扰素检测试剂盒分别检测383例肺结核病患者(包括118例痰涂片或痰培养阳性肺结核患者和265例痰涂片和痰培养均阴性的肺结核患者)、75例其他肺部疾病患者和100例健康对照者结核感染情况并与结核抗体试验(Tuberculosis antibody,TB-AB)比较检测的灵敏度和特异性。结果 TB-IGRA法检测痰涂片和痰培养均阴性及痰涂片或痰培养阳性肺结核患者的阳性检出率分别为90.2%和90.7%,差异无统计学意义(P>0.05);TB-IGRA法和TB-AB试验检测肺结核病患者的灵敏度分别为90.3%和30.0%,TB-IGRA法的灵敏度明显高于TBAB试验(P<0.01)。TB-IGRA法和TB-AB试验的特异性分别为88.0%和89.7%,2种方法特异性差异无统计学意义(P>0.05)。结论 TB-IGRA法检测痰涂片和痰培养均阴性肺结核具有快速和较高的灵敏度和特异性,值得临床推广应用。
- 陈芳魏毅陈彬孙爱华
- 结核分枝杆菌rHpsX-MPT64融合蛋白的制备与临床应用被引量：5
- 2014年
- 目的构建结核分枝杆菌融合基因hpsX-mpt64原核表达系统,建立基于rHpsX-MPT64为包被抗原酶联免疫吸附测定法(Enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)并对其用于结核患者血清学诊断的敏感性和特异性进行评价。方法PCR扩增并克隆结核分枝杆菌hpsX和mpt64基因,以连接引物PCR构建hpsX-mpt64人工融合基因,建立上述目的基因原核表达系统。采用SDS-PAGE检测目的重组蛋白rHpsX、rMPT64和rHpsX-MPT64表达情况,Ni-NTA亲和层析法提纯上述目的重组蛋白,Western Blot检测其免疫性。分别以rHpsX、rMPT64和rHpsX-MPT64为包被抗原,建立相应ELISA检测150例健康人群、73例非结核肺部疾病患者和277例活动性肺结核患者血清标本中抗体。结果克隆的hpsX和mpt64及构建的hpsX-mpt64融合基因与GenBank中相关序列相似性为100%。rHpsX、rMPT64和rHpsX-MPT64表达量分别为细菌总蛋白的20.3%、28.5%和26.5%,其提纯物电泳后均显示单一条带。基于rHpsX、rMPT64和rHpsX-MPT64为包被抗原的ELISA对涂阳患者血清抗体检出率明显高于涂阴患者(P<0.01),检测活动性结核患者血清抗体的敏感性分别为59.2%、61.4%和74.4%,特异性分别为90.6%、83.9%和91.0%,rHpsX-MPT64为包被抗原敏感性明显高于rHpsX和rMPT64抗原(P<0.01)。结论基于rHpsX-MPT64为包被抗原的ELISA有较高的敏感性和特异性,重组融合蛋白为抗原有助于进一步提高检测结核病血清学诊断的敏感性。
- 张艳范大鹏岳永宁杜蓬孙爱华
- 关键词：结核分枝杆菌酶联免疫吸附试验
- 结核分枝杆菌临床菌株katG、inhA和ahpC基因突变与异烟肼耐药的相关性研究被引量：14
- 2013年
- 目的:阐明结核分支杆菌耐异烟肼临床分离株katG、inhA和ahpC基因突变特点。方法:对75株耐异烟肼临床分离株和45株异烟肼敏感临床分离株katG、inhA和ahpC基因PCR并测序。结果:45株异烟肼敏感菌株中除18株katG基因存在R463L突变外无其它突变。75株耐异烟肼菌株中未发现katG、inhA和ahpC基因完全缺失。分别有68株、17株和8株分别发生katG、inhA和ahpC基因突变,43株(57.3%)发生katG基因S315位突变,结合菌株耐药程度,异烟肼高度耐药株(INH≥10μg/ml)S315突变发生率显著高于低度耐药株(INH≥1μg/ml)。33株(44%)katG基因存在R463L突变。结论:katG基因存在R463L突变同时存在于异烟肼敏感菌株和耐药菌株,无差异(P>0.05)提示katG基因R463L突变与异烟肼耐药无关,本地异烟肼耐药株katG基因突变特别是S315突变发生率高,S315突变与异烟肼耐药耐药密切相关且与耐药程度相关。
- 蔡捷刘小香李召东吴森林
- 关键词：结核分枝杆菌异烟肼耐药
- 结核分枝杆菌CysA2抗原的基因克隆、表达及在血清诊断中的应用
- 2013年
- 目的克隆并构建结核分枝杆菌CysA2基因原核表达系统,建立基于rCysA2的ELISA并检测rCysA2-ELISA在肺结核患者血清学诊断中的敏感性和特异性。方法采用PCR扩增CysA2基因,构建CysA2基因原核表达系统。采用SDS-PAGE检测目的重组蛋白rCysA2表达情况,Ni-NTA亲和层析法提纯rCysA2,免疫印迹鉴定rCysA2的免疫反应性。以rCysA2为包被抗原,建立rCysA2-ELISA并用于检测132例血清抗体,其中涂片阳性和阴性肺结核患者血清分别占96例和36例,非肺结核肺部疾病病人血清抗体30例,健康对照血清50例。结果克隆的CysA2基因与GenBank中相关序列相似性为100%。rCysA2表达量为细菌总蛋白的25.4%。提纯的rCysA2在SDS-PAGE后显示为单一的蛋白条带。rCysA2-ELISA检测涂片阳性和涂片阴性的肺结核患者血清抗体检出率分别为63.5%和61.1%,50例健康对照全部阴性、30例非肺结核肺部疾病患者1例呈现阳性,此方法的灵敏度为62.9%(83/132),特异性为98.8%(79/80)。结论本研究成功地克隆并构建了结核分枝杆菌CysA2基因及其原核表达系统。以rCysA2为包被抗原的rCysA2-ELISA方法有较高的灵敏度和很好的特异性,能有效检测涂片阴性患者血清抗体,rCysA2有望成为结核病血清诊断的有效候选抗原之一。
- 吴华军张佳皱洪兴王宇军孙爱华
- 关键词：结核分枝杆菌酶联免疫吸附试验血清学检测
- PCR-SSCP检测结核分枝杆菌利福平耐药相关基因rpoB突变被引量：1
- 2013年
- 目的建立聚合酶链反应–单链构象多态性(PCR-SSCP)技术快速检测结核分枝杆菌利福平(RFP)耐药相关基因rpoB突变。方法设计结核分枝杆菌RFP耐药相关rpoB基因PCR引物,建立PCR-SSCP技术检测临床菌株rpoB基因的突变导致的运动变位,同时采用PCR直接测序(PCR-DS)技术检测rpoB基因突变,并对上述方法检测结果进行分析和比较。结果84株临床菌株均含有rpoB基因;PCR-SSCP和PCR-DS检测结果显示,56株RFP敏感菌株中rpoB基因分别有3株和2株检测出突变,检测特异性分别为94.6%(53/56)和96.4%(54/56);28株RFP耐药菌株中rpoB基因分别有27株和28株发生突变,检测灵敏度分别为96.4%和100%。结论本研究建立的PCR-SSCP技术能快速、简便、特异、敏感地检测结核分枝杆菌利福平耐药基因rpoB突变,具有临床应用前景。
- 邱媛陶峰孙爱华
- 关键词：结核分枝杆菌利福平
- 浙江省结核分枝杆菌临床分离株gyrA基因突变与氧氟沙星耐药的相关性被引量：2
- 2013年
- 目的分析浙江省结核杆菌临床分离株gyrA基因喹诺酮耐药决定区(QRDR)突变与氧氟沙星耐药的相关性。方法鉴定392株结核杆菌临床菌株并检测对利福平、异烟肼、链霉素、乙胺丁醇及氧氟沙星的药物敏感性,PCR法分别扩增30株氧氟沙星敏感株和52株氧氟沙星耐药株的gyrA基因片段并测序。结果临床菌株对氧氟沙星耐药率为13.3%(52/392)。39株氧氟沙星耐药株gyrA基因编码的90、91和94位氨基酸存在突变,有31株发生Asp94Gly/Asn/Ala/His/Tyr突变为最常见(59.6%),12株发生Ala90Val/Lys突变,3株发生Ser91Pro/Trp突变(其中Ser91Trp为首次报道),7株存在双突变。有1株敏感株gyrA基因扩增片段中存在Asp94Asn突变。所有测序菌株都存在Ser95Thr突变。结论结核杆菌gyrA基因QRDR突变与氧氟沙星耐药密切相关。
- 严蓉李召东黄海军周瑛王洪孙爱华
- 关键词：结核分枝杆菌GYRA基因突变
