南通市科技局社会发展科技计划项目(S7943)
- 作品数：4 被引量：13H指数：2
- 相关作者：倪润洲江枫周嘉伟肖明兵赵敏星更多>>
- 相关机构：南通大学中国科学院上海生命科学研究院更多>>
- 发文基金：南通市科技局社会发展科技计划项目更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- GST-Glypican 3 N端融合蛋白表达载体构建及表达纯化被引量：3
- 2010年
- 目的构建人磷酯酰肌醇蛋白聚糖3(Glypican3,GPC3)N端蛋白与谷胱甘肽-S-转移酶(GST)重组的融合蛋白原核表达载体并进行表达及纯化。方法以重组质粒pcDNA3.1-GPC3N为模板,扩增GPC3 N端基因,产物经纯化回收后与载体PGEX-4T-1连接并转化大肠埃希菌Rosetta,酶切鉴定序列完全正确者诱导表达GST-GPC3 N端融合蛋白,并以谷胱甘肽琼脂糖小珠亲和纯化。结果Glypican 3 N端基因片段成功插入载体PGEX-4T-1,插入位点及碱基序列完全正确,转化Rosetta后,经IPGT诱导成功表达分子质量为64 000的GST-GPC3 N端融合蛋白。结论成功建立了重组GST-GPC3 N端融合蛋白的原核表达载体、表达菌株及诱导表达和纯化的方法,为GPC3 N端融合蛋白的进一步应用打下基础。
- 肖明兵赵敏星倪润洲江枫周嘉伟
- 抗人Glypican3 N端融合蛋白单克隆抗体研制及特性鉴定
- 2011年
- 目的:制备抗人磷脂酰蛋白聚糖3(Glypican3,GPC3)N端蛋白的单克隆抗体(mAb),并进行特性鉴定。方法:以纯化的GPC3 N端融合蛋白免疫BALB/c小鼠,应用淋巴细胞杂交瘤技术制备抗人GPC3N端mAb并进行纯化。经Western blot和ELISA方法鉴定其特异性、Ig亚类和效价。结果:获得2株可稳定分泌抗人GPC3N端mAb的杂交瘤细胞株(Ⅲ4B,Ⅻ6C)。两株mAb均为Ig1亚类,其腹水mAb的效价分别为1∶9 600及1∶7 200,均可特异性地识别GPC3蛋白。结论:成功地建立可稳定分泌抗人GPC3N端mAb的杂交瘤细胞株,其分泌的mAb特异性强、效价高。
- 肖明兵江枫倪润洲朱净陆翠华周嘉伟
- 关键词：单克隆抗体
- 人磷酯酰蛋白聚糖3N端融合蛋白多克隆抗体制备及鉴定被引量：2
- 2010年
- 目的:制备人磷酯酰蛋白聚糖3(Glypican3,GPC3)N端蛋白的多克隆抗体。方法:在大肠埃希菌Rosetta中诱导表达磷酯酰蛋白聚糖3N端融合蛋白,从SDS-PAGE中切胶纯化,免疫新西兰兔,制备多克隆抗体。用辛酸-硫酸铵分步沉淀法初步纯化抗血清,并用ELISA、Westen-blot检测抗体的灵敏度和特异性。结果:成功制备了抗磷酯酰蛋白聚糖3N端的多克隆抗体,抗体滴度为1:64000,经Western blot检测特异性良好。结论:成功制备了抗人磷酯酰蛋白聚糖3N端融合蛋白多克隆抗体。
- 江枫肖明兵赵敏星倪润洲周嘉伟
- 关键词：融合蛋白多克隆抗体原发性肝细胞癌
- 血清glypican 3 ELISA检测法的建立及初步应用被引量：9
- 2011年
- 目的建立血清中磷酯酰肌醇蛋白聚糖3(glypican 3,GPC3)的双抗体夹心ELISA检测法,并探讨其应用价值。方法以本室自制抗GPC3单克隆抗体为包被抗体,以兔抗人GPC3抗体为检测抗体,建立检测GPC3的双抗体夹心ELISA法。对建立的方法进行线性范围、灵敏度、精密度、回收率等方法学评价,并用于测定原发性肝癌、肝炎后肝硬化、慢性肝炎患者及体检健康者血清标本。结果该法线性范围为0.2～12.5μg/L,灵敏度为0.101μg/L,批内CV≤5.99%,批间CV≤6.96%,平均回收率为99.9%。原发性肝癌患者血清GPC3浓度5.43(2.28～8.62)μg/L明显高于肝炎后肝硬化、慢性肝炎患者及健康对照组(P均<0.05)。以3.19μg/L为临界值时,诊断肝癌的敏感性和特异性分别为85.4%及98.9%。结论该法灵敏、特异和准确,可用于原发性肝癌的诊断。
- 江枫肖明兵倪润洲赵敏星朱净周嘉伟
- 关键词：磷脂酰肌醇蛋白聚糖3ELISA法原发性肝癌
