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空肠弯曲菌FlhF单克隆抗体的制备与鉴定被引量：1: 2013年; 目的原核表达空肠弯曲菌FlhF蛋白,并制备其单克隆抗体(mAb)。方法扩增空肠弯曲菌flhF基因并将其插入到pET-30a(+)和pGEX-6p-1表达载体,分别以亲和纯化柱纯化后的蛋白rHis-FlhF和rGST-FlhF为免疫原和检测原进行杂交瘤细胞的筛选。采用间接ELISA测定mAb腹水效价,Dot-ELISA、Western blot分析mAb特异性。结果成功构建重组原核表达质粒pET-30a(+)-flhF和pGEX-6p-1-flhF,并融合表达rHis-FlhF和rGST-FlhF蛋白。筛选获得2株稳定分泌抗FlhF的单克隆杂交瘤细胞株,分别命名为2C12和7A9,其Ig亚类均为IgG1,腹水效价分别为1×109和2×107,Western blot法分析表明2株mAb均能与纯化蛋白rHis-FlhF有良好的反应性,Dot-ELISA试验表明2株mAb均能与空肠弯曲菌标准株发生特异性反应。结论成功制备了具有较高特异性的空肠弯曲菌FlhF蛋白的mAb。; 任方哲王楠商宇伟焦新安黄金林; 关键词：空肠弯曲菌单克隆抗体

空肠弯曲菌感染动物模型的研究进展被引量：3: 2013年; 空肠弯曲菌是一种全球关注的人兽共患病原菌,感染后可引起人和动物多种疾病。动物模型是开展致病机理、疫苗评价和药物开发等研究的基础。空肠弯曲菌由于培养条件苛刻以及感染实验动物的疾病相似性、经济性和重复性等因素,仍缺乏良好的感染动物模型,其致病机理迄今尚不清楚。本文对已报道的空肠弯曲菌感染实验动物模型进行综述。; 商宇伟王楠黄金林焦新安; 关键词：空肠弯曲菌动物

空肠弯曲菌生物膜研究进展被引量：3: 2011年; 空肠弯曲菌是全球范围内主要的人兽共患性、细菌性肠道病原菌之一[1],其感染率在世界各地普遍呈上升趋势,主要引起人体急性肠炎和食物中毒,并伴发反应性关节炎、肝炎、瑞特氏病和格林-巴利综合征等免疫性损伤性疾病[2]。; 张明黄金林焦新安; 关键词：空肠弯曲菌生物膜反应性关节炎肠道病原菌损伤性疾病急性肠炎

空肠弯曲菌鞭毛研究进展被引量：3: 2013年; 空肠弯曲菌是世界范围内广泛流行的一种食源性病原菌,鞭毛是其主要的毒力因子,在其致病过程中发挥重要作用。本文对空肠弯曲菌鞭毛结构,合成机制及其作用进行综述,以期为了解空肠弯曲菌鞭毛的基本信息及其致病机理提供参考。; 任方哲王楠商宇伟焦新安黄金林; 关键词：空肠弯曲菌鞭毛毒力

空肠弯曲菌NCTC11168基因组表达文库的构建及鉴定被引量：1: 2011年; 将空肠弯曲菌NCTC11168基因组用Sau3AⅠ部分酶切,回收400～3 000bp的片段。用BamHⅠ酶切原核表达载体pET30a(b,c),用SAP去磷酸化后,切胶回收线性载体片段。将基因组片段与载体按摩尔比例10∶1连接,转化DH5α感受态细胞,PCR分析插入片段大小的分布和插入的正确率。从转化的平板上提取质粒,转化表达宿主菌BL21(DE3),获得基因组表达文库。用IPTG诱导BL21(DE3),SDS-PAGE鉴定蛋白表达情况。提取基因组,以0.5U/μg Sau3AⅠ于37℃部分酶切基因组,回收400～3 000bp片段。载体用2.5U/μg BamHⅠ线性化后,用0.8U/μg SAP将其完全去磷酸化。基因组片段与载体连接转化DH5α感受态细胞,获得了基因组表达文库,库容达52 700个克隆,可以覆盖弯曲菌全基因组4次以上,片段插入正确率为83.3%～91.7%,片段大小为400～3 000bp,且均匀分布,IPTG诱导表达文库后蛋白呈现高效表达,表明成功构建了空肠弯曲菌的基因组表达文库。; 胡元庆黄金林李求春刘志成潘志明焦新安; 关键词：空肠弯曲菌毒力因子

空肠弯曲菌cjaA基因表达蛋白单克隆抗体的制备及其生物学特性鉴定被引量：1: 2011年; 目的:原核表达空肠弯曲菌CjaA蛋白,并制备其单克隆抗体(mAb)。方法:克隆目的基因并将其构建到pGEX-6p-1和pET30a(+)表达载体,分别以变复性纯化后的rGST-cjaA、rHis-cjaA蛋白为免疫原和检测原进行杂交瘤细胞的筛选。采用间接ELISA法测定细胞上清和mAb腹水效价,Dot-ELISA、Western blot分析mAb特异性。结果:成功构建pET30a(+)-cjaA和pGEX-6p-1-cjaA重组原核表达质粒,并融合表达rHis-cjaA和rGST-cjaA蛋白,Western blot试验显示全菌多抗血清能与体外表达的蛋白呈现特异性反应,表明表达蛋白具有免疫原性。筛选获得3株稳定分泌抗CjaA的单克隆杂交瘤细胞株,分别命名为2B6、3C2、4F11,其Ig亚类均为IgG1,腹水效价分别为1∶1×105、1∶2×105和1∶4×105;Western blot试验显示,3株mAb均能与表达rHis-CjaA重组蛋白的细菌发生特异性反应;Dot-ELISA试验表明,3株mAb均能与不同来源的空肠弯曲菌分离株发生特异性反应。结论:本研究制备的mAb有较高特异性,具有良好的应用价值。为进一步研究空肠弯曲菌CjaA蛋白的生物学特性、致病机制,以及建立快速检测技术奠定基础。; 黄金林尹衍新胡元庆张弓刘秀梵焦新安; 关键词：空肠弯曲菌单克隆抗体

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