国家科技重大专项(2009ZX09103-708)
- 作品数：10 被引量：47H指数：2
- 相关作者：黄树林邵红伟沈晗吴凤麟薄华本更多>>
- 相关机构：广东药学院南方医科大学暨南大学附属第一医院更多>>
- 发文基金：国家科技重大专项国家自然科学基金广东省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 人脐带间充质干细胞培养上清对正常人淋巴细胞各亚群比例的影响被引量：5
- 2014年
- 目的:研究人脐带间充质干细胞(hUC-MSCs)培养上清对正常人外周血单个核细胞(PBMC)活化、生存及其各淋巴细胞亚群比例的影响。方法:通过密度梯度离心法分离PBMC,加入OKT3刺激,用含有hUC-MSCs培养上清的条件培养基(MSC-CM)处理PBMC,流式细胞术分析比较处理组和对照组各淋巴细胞亚群比例的变化,ELISA法检测MSC-CM对PBMC分泌IFN-γ、IL-10的影响,Annexin V/PI双染确定活化PBMC的凋亡情况。结果:MSC-CM下调了CD4+/CD8+T细胞比值,上调了PBMC中CD4+CD25+CD127lowTreg细胞的含量,而对其他淋巴细胞亚群的比例无显著影响;MSC-CM抑制了PBMCs分泌IFN-γ的能力,但对IL-10的分泌有促进作用;此外,MSC-CM对PBMCs有保护作用,降低了PBMC在OKT3刺激下的凋亡程度。结论:人脐带间充质干细胞的免疫抑制功能可不依赖于与免疫细胞的直接或间接接触,并且与诱导免疫细胞凋亡无关,促进Treg细胞的增殖和活化可能是人脐带间充质干细胞发挥其免疫抑制功能的途径之一。
- 陈璇袁茵邵红伟卢志毅张柳华黄树林
- 关键词：人脐带间充质干细胞调节性T淋巴细胞免疫调节
- 稳定表达人CCL17基因的肝癌细胞系的建立及CCL17活化T淋巴细胞功能的初步鉴定
- 2012年
- 目的建立稳定表达人CCL17基因的肝癌细胞系并初步验证CCL17活化T淋巴细胞的抗肿瘤功能。方法分离肝癌患者腹腔液单个核细胞及淋巴细胞,提取单个核细胞总RNA,RT-PCR扩增CCL17基因,经克隆测序后将CCL17插入真核表达载体pCDNA3.1(-);将真核表达质粒转染肝癌细胞系BEL-7402细胞,利用G418筛选抗性单克隆细胞株,Western blot检测细胞培养上清中CCL17的表达水平;用含CCL17的培养上清液刺激腹腔液来源淋巴细胞后,再与BEL-7402细胞共孵育,利用Annexin V/PI凋亡检测试剂盒检测肿瘤细胞凋亡率,倒置相差显微镜观察肿瘤细胞形态学改变。结果成功克隆出CCL17基因全长序列,并构建了真核表达质粒pCDNA3.1(-)-CCL17;质粒转染BEL-7402细胞后经G418筛选获得5个抗性单克隆细胞株,Western blot结果显示5株细胞培养上清液中均有CCL17表达,其中克隆株F9、F11和G8表达量较高;与对照组比较,含CCL17培养上清液刺激后的腹腔液淋巴细胞,能诱导BEL-7402细胞发生显著凋亡样改变。结论成功构建了稳定表达人CCL17基因的肝癌细胞系,并初步证实含CCL17的细胞培养上清液有活化T淋巴细胞,促进杀伤肿瘤的作用。
- 沈晗聂建云邵红伟黄树林
- 关键词：肝癌细胞系稳定转染T淋巴细胞
- TCR BV12-3重组载体构建及其抗肿瘤作用的初步研究
- 2014年
- 目的:构建pEGFP-C3-TCR BV12-3表达载体并初步研究其抗肿瘤作用。方法:TCR BV12-3基因片段从pGEM-T-TCR BV12-3载体上酶切并克隆至pEGFP-C3载体中,通过脂质体将pEGFP-C3-TCR BV12-3表达载体转染外周血单个核细胞(PBMCs),48小时后荧光显微镜观察转染效率。PBMCs细胞、pEGFP-C3载体转染的PBMCs细胞、pEGFP-C3-TCR BV12-3表达载体转染的PBMCs细胞分别与肝癌细胞BEL-7402和宫颈癌细胞HeLa共培养24 h,显微镜观察肿瘤细胞的生长情况。结果:测序证实TCR BV12-3基因片段成功亚克隆至pEGFP-C3载体中,荧光显微镜证实重组体转染PBMCs细胞48 h后可有效表达绿色荧光。显微镜观察发现pEGFP-C3-TCR BV12-3载体转染的PBMCs对肝癌细胞有杀伤作用,但对宫颈癌杀伤作用不明显。结论:成功构建pEGFP-C3-TCR BV12-3表达载体,初步证实TCRBV12-3对肝癌细胞有杀伤作用。
- 王辉区裕升沈晗黄树林
- 关键词：T细胞受体克隆肿瘤
- 建立一种survivin抗原肽诱导T淋巴细胞优势取用TCR Vβ基因的方法
- 2013年
- 目的:探讨survivin抗原肽体外诱导健康人外周血单个核细胞(PBMC)后T淋巴细胞活化情况及TCRVβ表达谱变化。方法:分离健康人PBMC经rhIL-4、rhGM-CSF诱导DCs,将成熟DCs分为阴性组(不负载肽)、未洗脱负载组(负载survivin肽)、洗脱负载组(经酸液洗脱并多聚甲醛固定后负载survivin肽),分别与自体淋巴细胞共培养诱导抗原特异性T淋巴细胞。分别于24小时、48小时、96小时和7天以Elisa法检测诱导后T淋巴细胞中IFN-γ的分泌,并于第7天通过流式细胞仪分析TCRVβ表达谱。结果:随着时间延长两实验组IFN-γ的分泌比阴性组显著增高,且洗脱负载组增加更为显著。流式细胞仪分析结果显示洗脱负载组相比于阴性组及未洗脱负载组引起TCR Vβ表达谱的改变更为明显,其中TCR亚家族Vβ7.2、Vβ12、Vβ14、Vβ16、Vβ20、Vβ22最为显著。结论:DCs经酸液洗脱表面多肽并固定的方法更能有效地诱导TCRVβ亚家族优势取用。
- 林燕梅沈晗邵红伟吴凤麟黄树林肖兰凤
- 关键词：SURVIVINTCR
- 当归补血汤调控骨髓造血机理及对造血微环境的影响被引量：39
- 2013年
- 目的探讨当归补血汤调控骨髓造血的机理。方法 50只ICR小鼠随机分为5组,每组10只。除正常组外其他组小鼠连续腹腔注射多柔比星4 mg·kg^(-1)·d^(-1),共3 d,正常组给予同等体积的生理盐水。注射多柔比星3 d后,当归补血汤低、中、高剂量组分别连续腹腔注射补血汤5、15、25 g·kg^(-1)·d^(-1),共7 d,正常组和模型组给予同等体积的生理盐水。给药结束制备骨髓单细胞悬液,体外培养观察骨髓基质细胞生长状态,流式细胞仪检测骨髓细胞增殖和黏附情况。结果当归补血汤组骨髓基质细胞生长状态好于正常组和模型组,骨髓细胞之间的聚集明显。模型组聚集细胞数占总细胞比例为(4.00±1.10)%,低于正常组[(3.07±2.35)%],但无显著差异(P>0.05)。当归补血汤低、中、高剂量组聚集细胞数目占总细胞数比例分别为(5.40±2.91)%、(7.36±2.32)%和(9.27±3.35)%,均高于模型组(P<0.05或P<0.01)。正常组G2期细胞比例高于其他四组(P<0.05),当归补血汤各剂量组G2/M期细胞比例与模型组比较无显著差异(P>0.05)。结论当归补血汤可能通过改善基质细胞的状态、增强骨髓细胞之间的黏附来改善骨髓造血微环境。
- 薄华本陈启助沈晗吴凤麟邵宏伟黄树林
- 关键词：当归补血汤骨髓造血干细胞细胞黏附造血微环境
- HLA-A2限制性Survivin点突变肽诱导特异性抗肝癌CTL反应
- 2012年
- 目的探讨HLA—A2限制性Survivin点突变抗原肽体外诱导CTLs的抗肝癌作用。方法生物信息学软件BIMAS和SYFPEITHI用来鉴定点突变的HLA-A2限制性Survivin抗原九肽；流式细胞术检测突变肽与HLA-A2分子结合效率；肽体外刺激肝癌患者腹水来源的肿瘤浸润淋巴细胞（TILs）诱导反应性CTLs，用流式细胞术及ELISA检测反应性CTLs释放IFN-γ情况；肽诱导的CTLs与肝癌细胞系HepG2及BEL-7402共孵育，CytoTox96@非放射性细胞毒性检测法检测对肿瘤细胞的裂解情况，倒置相差显微镜观察肝癌细胞形态学变化。结果生物信息学分析筛选出与MHC分子结合效率评分显著提高的点突变Survivin抗原九肽Sur79M2（KMSSGCAFL），流式细胞术检测证实负载Sur79M2的T2细胞，HLA-A2表达率显著提高，经Sur79M2体外刺激诱导的CTLs与靶细胞共孵育后能释放较高水平的IFN-γ，Sur79M2诱导的CTLs能通过HIA．A2限制性机制有效杀伤肝癌细胞系HepG2，对HLA—A2阴性的BEL-7402细胞无明显杀伤作用。结论点突变肽Sur79M2能在体外诱导反应性CTLs产生，该CTLs能以HLA-A2限制性方式有效杀伤肝癌细胞系。
- 沈晗黄昭亮陈晓华林燕梅王腾邵红伟黄树林
- 关键词：SURVIVIN抗肝癌HLA-A2限制性
- Calcein-AM荧光扫描测定细胞毒方法的建立被引量：1
- 2014年
- 目的：建立和优化基于钙黄绿素-AM（Calcein-AM）荧光扫描的细胞毒测定方法。方法：首先使用Calcein-AM染色靶细胞,扫描检测Calcein-AM荧光值,确定Calcein-AM最佳激发波长和发射波长;然后优化Calcein-AM染色的浓度和时间;最后以效靶比为30∶1～1∶1,共孵育时间为4 h,荧光扫描测定靶细胞裂解的百分率。结果：荧光染料Calcein-AM能有效标记靶细胞,最佳激发波长和发射波长为485 nm和515 nm;Calcein-AM对细胞毒性低,不影响细胞活性;4 h内的自发释放率低于15%;CIK（Cytokine induced killer）效应细胞与靶细胞共孵育4 h的细胞毒效应随效靶比增加而升高。结论：建立和优化了Calcein-AM荧光染料标记靶细胞检测细胞毒效应的方法,该方法可避免放射性试剂的应用,对细胞毒性低,准确性高。
- 陶嫦立丁哲纯郭雯静吴凤麟邵红伟黄树林
- 关键词：细胞毒
- 甲基纤维素沉降对脐带血单个核细胞分离效果的影响
- 2014年
- 目的研究甲基纤维素沉降预处理对密度梯度离心法分离脐带血单个核细胞效果的影响。方法取等量的同份脐带血,分别采用Ficoll密度梯度离心一步法和甲基纤维素-Ficoll两步法分离脐带血单个核细胞,倒置显微镜下计数并结合台盼蓝拒染法判定细胞活力,流式细胞术检测其中的造血干细胞以及NK细胞亚群的含量。结果通过2种分离方法分离得到的脐带血单个核细胞的数量、细胞活力和CD34+造血干细胞的含量差异无统计学意义,但通过两步法获得的脐带血CD56+、CD3-CD56dim以及CD3-CD56bright等NK细胞亚群的含量比一步法有明显提高。结论甲基纤维素沉降不影响脐带血单个核细胞的得率、细胞活力以及其中的造血干细胞含量,且较好地保存了脐带血中以CD56分子为主要标志的NK细胞亚群。
- 袁茵鲁欣陈丹亮邵红伟黄树林
- 关键词：脐带血单个核细胞甲基纤维素自然杀伤细胞
- 不同保存条件对病毒载体活性及对类癌细胞杀伤的影响被引量：1
- 2014年
- 目的探索5型病毒载体的保存条件,使病毒载体在保存过程的活性损失最小,对类癌细胞的杀伤作用最大。方法采用正交设计法,考虑温度、甘油含量及MgCl2浓度3因素,对病毒载体采用了3因素3水平的试验,测出不同保存配方的病毒载体的滴度。同时检测病毒载体在体对类癌细胞杀伤的影响。结果在-80℃,含5%甘油和3 mmol/L MgCl2的保存条件下病毒载体的活性最高,对类癌细胞HEK-293杀伤作用最明显;温度对病毒载体的活性影响最显著,甘油含量及MgCl2浓度对病毒载体的活性影响并不显著。结论温度越低,病毒载体体内反应越低;滴度越大,对类癌细胞的杀伤效果越大。温度越低对病毒载体的保存越有利,同时也为其他病毒载体保存条件的研究提供借鉴。
- 邬君陈骁陈璇邵红伟黄树林
- 关键词：病毒载体正交设计法
- 葛花提取物对急性心肌梗死小鼠心肌的保护作用被引量：1
- 2014年
- 目的:阐明葛花对急性心肌梗死小鼠心肌的保护作用及作用机制。方法:结扎小鼠冠状动脉左前降支建立急性心肌梗死模型。实验分为生理盐水组,复方丹参组,葛花提取物低、中、高剂量组共5组。通过心肌梗死面积和心肌酶的变化来评价保护效果,通过检测血清中SOD、MDA的含量和心肌中β-ARK1、eNOS基因的表达情况来阐明其作用机制。结果:与生理盐水组比较,葛花提取物能够减少心肌梗死面积(P<0.05),降低血清中心肌酶的含量(P<0.05),同时能够升高血清中SOD的含量(P<0.05),并能降低血清中MDA的含量(P<0.05)和心肌中β-ARK1的表达(P<0.05)。结论:葛花提取物通过升高SOD的含量和降低心肌中βARK1的表达来保护急性心肌梗死心肌。
- 薄华本郑迪伟钱佳碧
- 关键词：葛花急性心肌梗死心肌
