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国家自然科学基金(312710)
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1
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相关作者:
冯俊涛
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陈欣
祝传书
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冯俊涛
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2014
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雷公藤RNA提取方法选择与优化
被引量:2
2014年
建立提取完整性好、丰度高的雷公藤RNA的方法,是后续分子生物学试验的必要前提。试验以雷公藤叶、根、愈伤组织和悬浮细胞为材料,比较亚精胺法、SDS法、CTAB法和异硫氰酸胍法从雷公藤组织中提取的RNA,并对最佳方法进行优化。结果表明:SDS法从雷公藤组织中获得RNA片段完整性较好,但丰度较低;对该方法的操作步骤进行删减,并在2次氯仿/异戊醇去除蛋白质和多糖的过程中进行不同时间和程度的振荡提取,得到的RNA较优化前丰度更高,完整性更好,28SrRNA条带的亮度约为18SrRNA条带亮度的2倍,经过紫外分光光度计测定A260/A280比值在1.8~2.0之间,A260/A230比值在1.9~2.1之间。用优化的SDS法提取的雷公藤各组织RNA均具有很好的反转录活性,完全能满足后续RT-PCR、全长基因的克隆和Northernblotting分析等分子生物学研究。
陈欣
祝传书
冯俊涛
张兴
关键词:
雷公藤
RNA提取
SDS法
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