教育部科学技术研究重点项目(02088)
- 作品数：3 被引量：2H指数：1
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- 野生型人DNA polβ高表达中国仓鼠卵巢细胞系的建立及其生物学特征
- 2006年
- 脂质体转染法将野生型人DNA聚合酶beta(polβ)重组绿色荧光蛋白表达载体转染入中国仓鼠卵巢细胞系(CHO),经G418筛选得到稳定高表达人野生型polβ的CHO细胞.通过RT-PCR方法检测转染细胞polβmRNA的表达水平,流式细胞仪测细胞周期,软琼脂实验测细胞恶性增殖能力,6-TG实验测细胞自发突变率,以探讨转染细胞的生物学特性.结果显示,转染细胞polβ的mRNA的表达较空载体转染细胞、对照细胞增加,细胞周期多被阻滞在S期,细胞软琼脂集落形成率增高,自发突变率增加,表明polβ的过表达与细胞周期的分布、细胞恶性增殖程度、遗传稳定性相关.
- 李敏贺颖赵国强董子明
- 关键词：转染细胞周期中国仓鼠卵巢细胞
- 食管癌点突变型DNA聚合酶β与绿色荧光蛋白重组表达载体的构建被引量：1
- 2005年
- 目的 构建携带食管癌点突变型DNA聚合酶β基因的重组真核绿色荧光蛋白表达载体p EGFP-C3- polβ。方法 运用PCR方法,从质粒pc DNA3.1- polβ中扩增出点突变型的DNA聚合酶β基因,作为目的片段,T- A克隆至p GEM- TEasy载体,再定向克隆至p EGFP- C3真核绿色荧光蛋白表达载体,重组质粒p EGFP- C3- polβ用限制性内切酶酶切和通用鉴定引物PCR扩增鉴定,并进行DNA序列分析。结果 DNA序列分析证实了重组载体中的DNA聚合酶β序列与已知的点突变型DNA聚合酶β基因序列相符。结论 成功构建了携带食管癌点突变型DNA聚合酶β基因的重组的荧光蛋白表达载体p EGFP- C3- polβ,为DNA聚合酶β基因的体内外表达及蛋白定位提供了理想的标记。
- 赵军黄幼田路静杨洪艳赵国强董子明
- 关键词：DNA聚合酶Β绿色荧光蛋白PCR扩增食管癌
- 稳定高表达人野生型DNApolβ食管癌细胞Ec9706的生物学特征被引量：1
- 2007年
- 目的:建立稳定高表达人野生型DNA聚合酶beta(polβ)的食管癌细胞系Ec9706,并对该细胞系的生物学特征进行分析。方法:脂质体转染法将人野生型polβ重组绿色荧光蛋白表达载体pEGFP-AC3转染入Ec9706细胞,荧光显微镜观察转染效果,经G418筛选得到稳定转染细胞系。RT-PCR方法检测转染细胞polβmRNA的表达水平,绘制生长曲线,软琼脂实验测细胞克隆形成率,MTT法测转染前后细胞对顺铂的敏感性。结果:荧光显微镜下转染细胞荧光强,转染效率高,RT-PCR结果表明转染细胞的polβ表达较空载体转染细胞、对照细胞增加。转染前后细胞生长速度接近,转染细胞周期分布发生改变,多被阻滞在S期,在软琼脂实验中克隆形成率增加,对顺铂的敏感性降低。结论:成功建立了稳定高表达人野生型polβ的Ec9706细胞系,polβ的高表达与细胞的细胞周期分布、恶性增殖能力及耐药性有一定关系。
- 李敏付庆赵国强董子明
- 关键词：转染细胞周期食管癌细胞四甲基偶氮唑蓝
