转基因生物新品种培育专项(2009ZX08005-003B)
- 作品数：6 被引量：36H指数：4
- 相关作者：张保龙杨郁文陈天子倪万潮周益军更多>>
- 相关机构：江苏省农业科学院南京农业大学扬州大学更多>>
- 发文基金：转基因生物新品种培育专项江苏省农业科学院科研基金国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 棉花黄萎病不同抗性品种内生菌数量调查与拮抗菌筛选被引量：13
- 2010年
- 在不同生长期对棉花黄萎病不同抗性品种的植株根部内生菌数量进行了调查。结果表明,抗病品种内生菌数目少于感病品种,但其拮抗内生细菌比例高于感病品种;进一步对具有拮抗活性的内生菌的产纤维素酶、蛋白酶、几丁质酶等水解酶活性和嗜铁素活性进行了测定,并根据对黄萎病菌抑菌带宽度、产水解酶和嗜铁素活性给予了赋值,筛选出赋值得分最高的7个拮抗内生菌菌株。
- 王明江章如意林多多林玲周益军
- 关键词：棉花黄萎病内生菌拮抗菌
- 海岛棉GBNBS基因的原核表达以及表达产物的活性分析被引量：1
- 2012年
- 分别构建含有GBNBS基因全长序列以及去除富含亮氨酸重复区(Leucine-rich repeat,LRR)的部分序列的原核表达载体P3161和NBCD,SDS-PAGE凝胶电泳检测发现在IPTG诱导下,重组载体P3161和NBCD在BL21菌株中可以分别表达90 kDa和60 kDa的目的蛋白,Western blot证明它们为目的基因表达产物。分离纯化这两种蛋白并分析酶活功能,发现GBNBS全长蛋白具有ATPase活性,而去除LRR的缺失蛋白的ATPase活性则大幅降低。GBNBS基因的原核表达以及表达产物的活性研究为进一步了解该基因抗性功能与抗性机制奠定基础。
- 张保龙杨郁文陈天子倪万潮
- 关键词：原核表达ATPASE
- 一个棉花类受体蛋白激酶基因的克隆与表达分析被引量：8
- 2011年
- 利用简并引物扩增、染色体步移以及RT-PCR的方法,分离了棉花的一个类受体蛋白激酶基因的全长序列。序列分析表明,该基因没有内含子,开放读码框的长度为2964 bp,编码的多肽序列含有988个氨基酸并与拟南芥控制花器官脱落的基因HAESA-like2具有60%左右的相似性,将该基因命名为GRLK5。半定量RT-PCR分析发现GRLK5在种子、茎皮、根和纤维中的表达量较高,并且受ABA的诱导表达。将GRLK5整合到植物表达载体pCAMBIA2301中,构建植物过量表达载体,通过农杆菌介导,采用叶盘法转化烟草,PCR检测证明目的基因已经整合到烟草基因组中。
- 杨郁文何冰张保龙倪万潮
- 关键词：棉花类受体蛋白激酶
- 棉花SUPERMAN类锌指蛋白基因GZFP的启动子及功能分析被引量：6
- 2011年
- GZFP是来源于陆地棉的一个SUPERMAN类锌指蛋白基因。为了进一步了解该基因功能,本研究通过染色体步移(Genome walking)获得其启动子区域,并构建该片段与GUS连接的重组载体pBI-pGZFP-5::GUS,通过花浸染法转化拟南芥。转基因植株的GUS染色结果表明GUS基因主要在根部以及花器官表达,而叶片中的表达量很低,并且根部的表达量在整个生育期都很强。通过半定量RT-PCR分析不同诱导下GZFP基因的表达变化,发现ABA、干旱、盐胁迫诱导可以提高其表达量。构建GZFP过量表达载体并通过叶盘法转化烟草,烟草转化株的表型无明显变化,但是转化株中NtOPBP1和NtERD10的表达量较未转化株明显增强,而这两个基因都参与了植物的抗逆反应,说明GZFP基因可能与植物抗逆相关。
- 杨郁文周建武张保龙范晓慧任永哲陈天子
- 关键词：锌指蛋白陆地棉启动子抗逆
- CYP6CM1基因RNA干扰载体的构建及转基因烟草对烟粉虱抗药性的影响被引量：4
- 2012年
- 烟粉虱的抗药性与体内细胞色素P450单加氧酶基因的过量表达有关。根据Q型烟粉虱一个P450基因(CYP6CM1基因)的特异区域构建RNAi载体,通过农杆菌介导法转化烟草,PCR检测获得6个独立转基因株系;以非转基因烟草和T1代转基因烟草饲喂烟粉虱5 d后,荧光定量PCR结果显示取食转基因烟草的烟粉虱体内CYP6CM1基因相对表达量仅为取食非转基因烟草烟粉虱的13%～27%,表明CYP6CM1基因RNAi表达框架可以干扰烟粉虱CYP6CM1基因的表达。
- 张保龙胡雪虹陈天子杨郁文常蕾刘方王坤波
- 关键词：烟粉虱烟草RNAIP450基因
- 棉花PGHNBS启动子维管束特异表达元件的分离及功能研究被引量：4
- 2012年
- PGHNBS是来源于陆地棉的一个CC-NBS-LRR类基因GHNBS的启动子,该启动子具有维管束特异表达特征。为了分离PGHNBS启动子的调控元件,对该启动子进行了缺失分析。将PGHNBS启动子6个部分缺失片段分别与GUS基因融合构建植物表达载体,这6个表达载体分别为PGN15(-1 420 bp～-28 bp)、PGN27(-1 300 bp～-28 bp)、PGN31(-1 071 bp～-28 bp)、PGN44(-959 bp～-28 bp)、PGN53(-807 bp～-28 bp)和PGN996(-604 bp～-28 bp)。用植物表达载体转化拟南芥,通过对转基因植物的GUS组织化学染色,进一步确认了韧皮部特异表达元件位于-1 071 bp～-959 bp区域。用PLACE进行相似性比较,发现该区域含有脱落酸(ABA)诱导元件、铜离子响应元件以及多个与抗逆相关的MYB转录因子的识别位点。另外,在-1 559 bp～-1 420 bp区域中存在增强子元件。
- 杨郁文张保龙陈天子高媛媛
- 关键词：陆地棉NBS-LRR启动子
