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教育部“新世纪优秀人才支持计划”(NCET-050370)

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相关作者：郭文毅方媛樊嘉雯莫晓芬田洁更多>>
相关机构：复旦大学上海医学院复旦大学更多>>
发文基金：教育部“新世纪优秀人才支持计划”上海市自然科学基金国家自然科学基金更多>>
相关领域：医药卫生更多>>

文献类型

  • 1篇中文期刊文章

领域

  • 1篇医药卫生

主题

  • 1篇动物
  • 1篇动物实验
  • 1篇营养因子
  • 1篇荧光
  • 1篇源性
  • 1篇源性神经营养...
  • 1篇神经节
  • 1篇神经节细胞
  • 1篇神经营养
  • 1篇神经营养因子
  • 1篇生理学
  • 1篇视网膜
  • 1篇视网膜神经
  • 1篇视网膜神经节
  • 1篇视网膜神经节...
  • 1篇网膜
  • 1篇网膜神经节细...
  • 1篇细胞
  • 1篇疗法
  • 1篇绿色荧光

机构

  • 1篇复旦大学
  • 1篇复旦大学上海...

作者

  • 1篇孔德升
  • 1篇孙兴怀
  • 1篇马端
  • 1篇田洁
  • 1篇莫晓芬
  • 1篇樊嘉雯
  • 1篇方媛
  • 1篇郭文毅

传媒

  • 1篇中华眼底病杂...

年份

  • 1篇2009
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排序方式：
脑源性神经营养因子-绿色荧光蛋白融合基因载体的构建、鉴定及初步应用研究
2009年
目的构建脑源性神经营养因子（BDNF）绿色荧光蛋白（GFP）融合表达质粒，观察其融合蛋白的特性。方法将BDNFcDNA片段插入pcDNA3．1／NT-GFP—TOPO真核表达质粒，使其与GFP同处一个阅读框架中，测序鉴定后，转染培养的雪旺细胞，用免疫组织化学和蛋白质印迹（Western botting）观察外源性目的蛋白的表达情况，并用该质粒活体转染视神经切断的大鼠模型，观察所表达外源性蛋白的神经保护作用。结果测序证实质粒构建成功。Westernbotting结果显示，BDNF—GFP融合蛋白表达一相对分子质量为41×10^3。大小条带。荧光显微镜下可见BDNF～GFP转染的细胞发出绿色荧光，免疫组织化学染色后，可见绿色荧光与红色荧光完全重合。转染BDNF—GFP质粒和GFP质粒的大鼠视神经切断术后7d存活视网膜神经节细胞（RGC）分别为（1201±286）、（482±151）个／mm^2，存活百分比分别为（51．39±12．24）％和（20．62±6．46）％；28d时存活的RGC分别为（715±71）、（112±24）个／mm^2，存活百分比分别为（30．59±3．04）％和（4．79±1．03）％。两组存活百分比比较，差异有统计学意义（t=3．144，11．378；P〈0．01）。结论BDNF-GFP融合表达载体可以转录翻译为一融合蛋白，该蛋白可自发绿色荧光，并具有BDNF的生物学活性。
方媛樊嘉雯莫晓芬孙兴怀郭文毅孔德升马端田洁
关键词：基因疗法动物实验
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