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湖北省自然科学基金(2008CDB128)

作品数：4 被引量：8H指数：2
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相关领域：医药卫生生物学更多>>

文献类型

  • 4篇中文期刊文章

领域

  • 4篇医药卫生
  • 1篇生物学

主题

  • 3篇线粒体
  • 3篇线粒体融合素...
  • 3篇基因
  • 2篇小鼠
  • 2篇RNA干扰
  • 2篇MFN2
  • 1篇代谢
  • 1篇信号通路
  • 1篇血糖
  • 1篇胰岛
  • 1篇胰岛素
  • 1篇胰岛素信号
  • 1篇胰岛素信号通...
  • 1篇质粒
  • 1篇示踪
  • 1篇示踪法
  • 1篇鼠肝
  • 1篇糖代谢
  • 1篇通路
  • 1篇葡萄糖

机构

  • 4篇武汉大学

作者

  • 4篇陈小琳
  • 4篇雷幼蓉
  • 2篇徐焱成
  • 1篇蔡小莉

传媒

  • 1篇同位素
  • 1篇中华肝脏病杂...
  • 1篇生物医学工程...
  • 1篇医学研究杂志

年份

  • 1篇2012
  • 1篇2010
  • 2篇2009
共 4 条 记 录，以下是 1-4
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排序方式：
流体力学介导的RNA干扰对小鼠肝脏线粒体融合素基因-2、空腹血糖和血清甘油三酯水平的影响被引量：5
2010年
目的 观察流体力学介导的RNA干扰（RNAi）对小鼠肝脏线粒体融合素基因-2（Mfn2）、空腹血糖（FBS）和血清甘油三酯（TG）水平的影响.方法 将56只雄性BALB/c小鼠随机分为空白对照组（NC组,n=8）、阴性对照组（HK组,n=24）和Mfn2质粒干扰组（Mfn2组,n=24）.HK组小鼠利用流体力学注射75μg阴性对照质粒溶液1.5 ml,Mfn2组小鼠利用流体力学注射75 μg Mfn2 shRNA质粒溶液1.5 ml.应用逆转录-聚合酶链反应和Western blot方法分别测定注射24、72、120 h后,小鼠肝脏Mfn2的mRNA和蛋白质表达;同时分别取血测定小鼠FBS和TG水平.多组间比较采用单因素方差分析,两两比较采用Scheffe＇s t检验.结果 质粒注射72、120 h后,Mfn2组小鼠肝组织Mfn2 mRNA相对表达量分别为1.00±0.03和1.01±0.053,较HK组（分别为1.14±0.07和1.18±0.07）明显下降（f值分别为4.027和4.234,P值均＜0.01）; Mfn2蛋白分别为7.81±0.80和8.05±0.15,较HK组（分别为8.01±0.08和8.56±0.01）也明显下降（f值分别为2.941和4.883,P值均＜0.05）.注射24 h后,Mfn2组小鼠FBS低于HK组[（2.65±0.70）mmol/L比（5.28±0.82）mmol/L,t=6.879,P＜0.01],TG高于HK组[（1.96±0.32）mmol/L比（1.12±0.16）mmol/L,t=-6.711,P＜0.01）],HK组与NC组之间FBS和TG差异无统计学意义（F值分别为1.412和2.711,P值均＞0.05）;注射72、12h后,Mfn2组小鼠FBS高于HK组（7.23±0.82）mmol/L比（5.18±0.69）mmol/L,t=2.050,P＜0.01;（7.00±0.67）mmol/L比（6.05±0.76）mmol/L,t=3.57,P＜0.05）],血清TG高于HK组,但差异无统计学意义[（1.53±0.27）mmol/L比（1.37±0.18）mmol/L,t=0.160,P＞0.05;（1.84±0.30）mmol/L比（1.52±0.37）mmol/L,t=0.330,P＞0.05）].结论 流体力学介导的RNAi在干扰72、120h后可有效抑制肝脏目的基因的表达,抑制Mfn2表达可导致小鼠葡萄糖和脂肪代谢异常.
陈小琳雷幼蓉
关键词：血糖甘油三酯类RNA干扰线粒体融合素基因-2
Mfn2基因沉默对HepG_2细胞葡萄糖代谢和胰岛素信号通路的影响
2012年
目的研究线粒体融合素基因-2(mitofusin-2,Mfn2)沉默对人肝癌细胞株(HepG2)葡萄糖代谢和胰岛素信号通路分子丝/苏氨酸蛋白激酶(Akt1)的影响。方法构建Mfn2短发夹双链RNA(Mfn2shRNA)和阴性对照短发夹双链RNA(HK),将HepG2细胞株分为空白对照组(NC)、阴性对照组(HK)、Mfn2shRNA质粒转染组(Mfn2)。HK和Mfn2组细胞应用lipo-fectamine2000转染HepG2细胞株;采用葡萄糖氧化酶的方法和氚标记葡萄糖(3-3H-Glucose)放射性核素示踪法检测细胞葡萄糖消耗量和摄取率;Western blotting检测Mfn2和Akt1蛋白表达。结果与HK组比较,Mfn2组细胞Mfn2蛋白表达明显下降(0.23±0.05 vs 0.51±0.14,P=0.034),Akt1表达差异无统计学意义(0.13±0.00 vs 0.14±0.01,P=0.055);Mfn2组细胞葡萄糖消耗量明显下降(8.72±0.62 vs 9.75±0.35,P=0.001),葡萄糖摄取率亦显著下降(7.94±0.04 vs 9.64±0.13,P=0.002)。结论抑制Mfn2基因表达导致HepG2细胞葡萄糖代谢下降;Mfn2表达对葡萄糖代谢的影响是否通过PI3K/Akt信号通路介导还需要进一步研究。
陈小琳雷幼蓉
关键词：线粒体融合素基因-2HEPG2细胞葡萄糖代谢
Mfn2基因shRNA质粒的构建及其流体力学转染技术的实验研究被引量：2
2009年
构建线粒体融合素基因2(Mfn2)短发卡RNA(Mfn2shRNA)表达质粒,观察流体力学注射法对绿色荧光蛋白器官靶向性。根据Mfn2基因序列,挑选1条目标基因序列和1条非特异性基因序列,构建质粒重组体并测序及鉴定。将24只BALB/c小鼠随机分为正常对照组、阴性对照组和转染组(n=8),阴性对照组和转染组分别通过尾静脉快速注入阴性对照质粒(HK)和Mfn2shRNA质粒溶液1.5 ml。24 h后采集肝脏、心脏、肌肉、肾脏组织冰冻切片,荧光显微镜下观察,并取血清测定谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)浓度。结果表明:质粒HK和Mfn2shRNA构建成功;流体力学注射后,肝脏、心肌及肾脏可见绿色荧光蛋白的表达;与正常对照组比较,阴性对照组血清ALT、AST有明显差异,转染组血清ALT、AST较正常对照组及阴性对照组明显升高。Mfn2shRNA质粒载体的成功构建,流体力学肝脏靶向性的基因转染方法,为活体内研究Mfn2功能提供了可靠的材料和方法。
陈小琳徐焱成蔡小莉雷幼蓉
关键词：SHRNA质粒RNA干扰
氚示踪法评估RNAi介导Mfn2基因沉默对小鼠体内物质代谢的影响被引量：2
2009年
采用同位素示踪技术研究RNAi介导线粒体融合素基因-2(Mfn2)沉默小鼠体内物质代谢变化。构建了含Mfn2短发卡RNA(short hair RNA,shRNA)干扰质粒和阴性对照质粒。24只BALB/c小鼠分为转染组和阴性对照组,每组各12只,转染组经尾静脉注射Mfn2干扰质粒,对照组注入阴性对照质粒。质粒注入5 d后,将氚水(3H2O)或氚标记葡萄糖(3-3H-Glucose)经腹腔或尾静脉注射到小鼠体内,留取血标本和组织标本,用液体闪烁计数仪测定标本放射性浓度,计算小鼠组织脂肪酸合成率和肝脏葡萄糖生成率,两组间均数比较采用t检验。结果显示,Mfn2基因转染组小鼠肝脏葡萄糖生成率为49.43±16.31,明显高于阴性对照组的24.91±4.07(P<0.05),肝脏、肌肉、心脏、脂肪组织的脂肪酸合成率分别为0.10±0.00、9.12±1.90、1.18±0.28、11.11±1.31,显著低于阴性对照组0.79±0.07,70.52±13.95,53.88±9.90,45.43±5.91。以上结果表明,Mfn2基因在体内葡萄糖和脂肪酸代谢中起重要作用。
陈小琳徐焱成雷幼蓉
关键词：基因沉默物质代谢
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