国家自然科学基金(30570904)
- 作品数：4 被引量：7H指数：2
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- 相关机构：中国医学科学院肿瘤医院齐齐哈尔医学院更多>>
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- 过表达FLJ22349促进人胚胎肾细胞HEK293及乳腺癌细胞MCF-7的生长
- 2008年
- 目的:人假想蛋白FLJ22349基因位于染色体22q13.2上,编码一个229个氨基酸的蛋白。表达谱分析发现多种肿瘤组织中有FLJ22349的表达,预测该基因可能与肿瘤的发生发展有密切关系。本研究旨在用生物信息学方法分析FLJ22349的结构和功能,并初步研究FLJ22349在HEK293及乳腺癌细胞中的作用。方法:运用各种生物信息学数据库初步分析FLJ22349的结构和功能。逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法分析FLJ22349基因在小鼠正常组织,人癌症细胞株及HEK293中的表达情况。将载有FLJ22349的基因的质粒转染入HEK293,MCF-7,MDA-MB231中,观察该基因的亚细胞定位。MTT检测细胞的生长变化。结果:FLJ22349基因在人类、猩猩、恒河猴、褐家鼠、小鼠和狗中有很高的同源性,但与其它已知的基因无同源性。小鼠正常组织中有FLJ22349表达;乳腺癌细胞株MDA-MB231,肝癌细胞株Bel-7402也有表达;主要定位于细胞核;转染FLJ22349的HEK293,MCF-7细胞株生长曲线显示促进细胞生长(P<0.05)。FLJ22349转染120h后,MTT实验观察到HEK293,MCF-7细胞的增殖率分别为299%,456%;而对照组分别为233%,272%。结论:FLJ22349基因过表达促进HEK293和MCF-7细胞的生长。
- 戴亚云赵玫余权方明镜时岚罗清袁兴华黄常志
- 关键词：HEK293细胞生长
- PI3Kp55γ调节亚基N末端对乳腺癌细胞增殖和侵袭能力的影响被引量：4
- 2009年
- 目的:研究磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)调节亚基p55γN末端24个氨基酸表达对乳腺癌细胞增殖和侵袭转移的影响。方法:通过脂质体介导用pEGFPC1和pEGFPN24表达质粒转染MDA-MB-231细胞,建立表达稳定融合蛋白GFP-N24和GFP的细胞系;MTT法观察转染细胞的增殖情况;流式细胞术分析细胞周期;细胞侵袭实验观察N24p55γ对细胞侵袭力的影响;明胶酶谱实验观察N24p55γ表达对基质金属蛋白酶9(MMP9)活性的影响。结果:N24p55γ的表达抑制细胞体外增殖,使细胞生长速度减慢,细胞周期G0/G1期百分率由(42.1±1.637)%上升到(51.4±0.78)%,P<0.05。N24p55γ过表达抑制MDA-MB-231细胞的运动和迁移,与对照组细胞相比,差异有统计学意义,P<0.05;明胶酶谱实验结果显示,N24p55γ抑制活化型MMP-9的表达。结论:N24p55γ不仅能抑制乳腺癌细胞的体外增殖,而且抑制乳腺癌细胞的运动和迁移,抑制细胞周期以及肿瘤转移相关基因MMP-9表达和分泌可能是其发挥作用的主要机制。
- 孙晓杰王淑英李珅吴琦赵玫黄常志
- 关键词：流式细胞术细胞增殖
- 蛋白激酶SGK2α在大肠杆菌中的表达纯化及抗体制备被引量：1
- 2010年
- 目的该研究通过SGK2α基因的克隆、原核蛋白表达以及纯化,制备抗SGK2α抗体,为进一步研究SGK2α蛋白的生物学功能奠定基础。方法利用原核表达载体PGEX-4T-3构建重组质粒,并在大肠杆菌中通过IPTG诱导表达;亲和层析法纯化重组蛋白;以纯化的重组蛋白为抗原免疫新西兰大耳白兔制备抗SGK2α多克隆抗体,ELISA方法检测抗体效价,免疫印迹法检测抗体的特异性。结果构建了PGEX-4T-3-SGK2α原核表达质粒,经原核表达和亲和层析获得GST-SGK2α融合蛋白,蛋白纯度在90%以上;利用GST-SGK2α融合蛋白制备多克隆抗体,抗体效价阳性且具有较强的特异性。结论利用原核表达的GST-SGK2α融合蛋白成功地制备了抗SGK2α多克隆抗体,可用于免疫组织化学和免疫印迹检测以及功能研究。
- 孙晓杰周启兵赵玫李珅吴琦郭红艳黄常志
- 关键词：重组蛋白纯化多克隆抗体
- 磷脂酰肌醇3激酶p55γ调节亚单位对胃癌细胞系MGC803细胞迁移的影响被引量：3
- 2006年
- 孙晓杰赵玫袁兴华余权黄常志
- 关键词：磷脂酰肌醇3激酶MGC803催化亚单位细胞迁移P55PI3K信号通路
