国家自然科学基金(30570937)
- 作品数：5 被引量：6H指数：2
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- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 小鼠胚胎干细胞转染条件的优化被引量：2
- 2010年
- 【目的】对小鼠胚胎干细胞(mESCs)转染条件进行优化。【方法】分别将0.5×105,1×105,2×105,4×105个细胞接种24孔板(各细胞量均接种2孔),培养48h在其细胞融合度分别为30%,50%,70%,90%左右时,分别设置相同的(0.8μgDNA/2μL脂质体)和不同的DNA/脂质体用量(DNA量(μg)/Lipo量(μL)分别为0.4/1,0.8/2,1.6/4,3.2/8),采用脂质体(LipofectamineTM2000)转染法,将pEGFP-N1报告基因载体转染到mESCs中,48h后通过荧光观察和流式分析检测各组EGFP荧光强度,比较转染效率。【结果】在质粒及脂质体用量相同(0.8μgDNA/2.0μL脂质体)的条件下,随着细胞融合度的增加,EGFP荧光强度逐渐减弱,在细胞融合度为30%,50%,70%,90%左右时转染,各组EGFP阳性细胞率分别为56.4%,51.8%,40.8%和23.3%。提高转染质粒及脂质体量可在一定程度上提高转染效率,但脂质体的细胞毒性也随之增加,不利于细胞生长。【结论】低融合度(30%～50%)条件下,使用0.8μgDNA/2.0μL脂质体对mESCs进行转染,可获得较高的转染效率(>50%),同时可维持良好的细胞状态。
- 陈天姬杜娟卢光琇
- 关键词：小鼠胚胎干细胞脂质体法PEGFP-N1转染效率
- 人类胚胎干细胞分化过程中DPPA2基因的表达情况分析(英文)被引量：3
- 2010年
- DPPA2(Developmental Pluripotency-Associated gene2)是近年来发现的在多能性细胞中特异表达的一个基因,它被认为参与维持干细胞的"干性".但目前为止,并没有关于该基因在人类胚胎干细胞(human embryonic stem cells,hESCs)分化过程中的表达情况的报道,其功能也尚不清楚.通过Real-time PCR对DPPA2基因在hESCs分化过程中的表达情况进行分析,此外还对其在异常核型hESCs,人类胚胎癌细胞(human embryonic carcinoma cells,hECCs)NTERA-2以及其它5种癌细胞中的表达情况进行检测.结果表明DPPA2基因在hESCs中特异表达,其表达水平随着hESCs的分化而显著下调.该基因在异常核型hESCs和NTERA-2细胞中也有表达,但在其它肿瘤细胞中未检测到该基因的表达.此外,以EGFP-N1系统为基础的亚细胞信号定位结果表明,DPPA2是一个核蛋白.这些结果提示,DPPA2基因可能在维持hESCs特性的过程中发挥着重要的作用.
- 陈天姬杜娟杜丽丽欧阳琦卢光琇
- 关键词：人类胚胎干细胞干性核蛋白
- 小鼠Dppa2基因shRNA载体的构建及干扰效果的检测被引量：1
- 2010年
- 目的:构建有效的针对小鼠Dppa2基因的shRNA(short hairpin RNA)干扰载体。方法:设计合成2对针对小鼠Dppa2基因的shRNA序列以及1对与哺乳动物基因组无同源性的shRNA序列作为对照,构建pSUPER.Retro.puro干扰载体并进行PCR,酶切和测序验证。进一步将各干扰载体分别转染小鼠胚胎干细胞(embryonic stem cells,ESCs),RT-PCR检测干扰效率。结果:PCR,酶切和测序验证均表明各shRNA载体构建成功。将空载体及各重组载体分别转染小鼠ESCs发现,干扰组Dppa2基因表达水平相对于空载体对照组和阴性shRNA载体对照组明显下调。结论:成功构建了有效的针对小鼠Dppa2基因的shRNA干扰载体,为进一步研究Dppa2基因在维持小鼠ESCs不分化过程中的作用提供了基础。
- 陈天姬杜娟卢光琇
- 小鼠Oct4基因真核表达载体的构建及表达鉴定
- 2010年
- 目的:构建小鼠Oct4基因真核表达载体并对其表达进行鉴定。方法:以小鼠胚胎干细胞(mouse embryonic stem cells,mESCs)cDNA为模板克隆Oct4基因编码区序列,将其通过定向克隆插入pcDNA3.1(+)载体多克隆酶切位点(multiple cloning sites,MCS)中,形成pcDNA3.1(+)/Oct4重组载体。将pcDNA3.1(+)空载体和pcDNA3.1(+)/Oct4重组载体分别转染293T细胞,通过Western Blotting检测Oct4蛋白的表达。结果:成功检测到Oct4蛋白的表达。结论:成功构建了小鼠Oct4基因真核表达载体。
- 陈天姬杜娟卢光琇
- 关键词：小鼠胚胎干细胞
- DPPA2基因的研究进展被引量：1
- 2011年
- DPPA2(Developmental pluripotency-associated gene 2)是近年来发现的一种在多能性细胞和某些癌组织中特意表达的基因。它与早期胚胎发育密切相关,参与维持胚胎干细胞的多能性及自我更新,还在体细胞重编程为多能性诱导干细胞的过程中发挥了作用。此外,它还是一种新的肿瘤抗原,有望成为某些恶性肿瘤的特异性免疫治疗新靶点。本文就DPPA2的结构、功能,以及它与胚胎发育、恶性肿瘤、体细胞重编程的关系等方面的研究进展做一综述。
- 赵谦杜娟
- 关键词：胚胎发育胚胎干细胞恶性肿瘤
