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湖北省自然科学基金(2004AA301C44)
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沈关心
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人截断型转化生长因子β受体Ⅱ真核表达载体的构建和表达
2007年
目的构建无细胞内段基因的人转化生长因子βⅡ型受体(△TβRⅡ)的真核表达载体pEGFP/△TβRⅡ,转染L02细胞以表达融合蛋白EGFP/△TβRⅡ,并检测其生物学活性。方法以质粒H2-3FF为模板,用PCR方法扩增得到人转化生长因子βⅡ型受体(TpRⅡ)胞外段和跨膜段的cDNA,将该cDNA克隆到真核表达载体pEGFP-N2上,构建成pEGFP/△TβRⅡ重组质粒。经双酶切和核酸测序鉴定,将该重组质粒转染L02细胞,用倒置荧光显微镜观察融合蛋白EGFP的表达,并检测其生物学活性。结果L02细胞转染pEGFP/△TβRⅡ重组质粒后,在荧光显微镜下可以观察到融合蛋白EGFP的表达,所表达的蛋白能显著减轻TGF-β1对L02细胞G1~S期的阻滞作用。结论成功构建了pEGFP/△TβRⅡ重组质粒,并表达了有活性的融合蛋白EGFP/△TβRⅡ,为进一步探讨其生物学效应奠定了基础。
余贻汉
杨道锋
谢林卡
朱慧芬
沈关心
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受体
转染
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