基础研究重大项目前期研究专项(05JY029-109)
- 作品数：4 被引量：55H指数：3
- 相关作者：汪铭书程安春陈孝跃陈海军郭宇飞更多>>
- 相关机构：四川农业大学动物疫病与人类健康四川省重点实验室更多>>
- 发文基金：四川省重点科学建设项目教育部“新世纪优秀人才支持计划”基础研究重大项目前期研究专项更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 鸭α干扰素基因疫苗对DVH弱毒苗免疫鸭的细胞免疫调节作用研究
- 将鸭α干扰素(IFN-α)基因疫苗(pcDNA-DuIFN-α)以50、100、200μg三个剂量分别肌注免疫28日龄樱桃谷鸭,15天后免疫鸭病毒性肝炎(DVH)弱毒疫苗;同时设空载体+DVH弱毒疫苗、生理盐水、DVH弱...
- 刘闯程安春汪铭书陈斌程志萍段坤杨梅周雪陈孝跃
- 关键词：细胞免疫调节
- 文献传递
- 鸭α-干扰素真核表达质粒的构建及其对DVH弱毒苗免疫鸭细胞免疫调节作用研究被引量：1
- 2007年
- 为检测鸭α-干扰素对鸭细胞免疫的调节作用，本文按常规方法构建了鸭α-干扰素真核表达质粒（pcDNA-DuIFN-α），并以50、100、200μg分别肌注28日龄樱桃谷鸭，15d后免疫鸭病毒性肝炎（DVH）弱毒疫苗，设空载体＋DVH弱毒疫苗、生理盐水、DVH弱毒疫苗以及pcDNA—DuIFN-α对照组，采用流式细胞仪（FACS）和淋巴细胞增殖试验（MTT法）分别对免疫鸭外周血的CD3^＋淋巴细胞总数和T淋巴细胞转化能力进行动态检测。结果：①CD3^＋淋巴细胞数量：7～56d实验组极显著（P≤0．01）高于生理盐水和显著高于（P≤0．05）DVH弱毒苗、空载体＋DVH弱毒疫苗和pcDNA-DuIFN—α对照组，14～28d 100μg组显著（P≤0．05）高于50和200μg组；②T淋巴细胞对ConA的反应能力（OD值）：21～56d实验组极显著（P≤0．01）高于生理盐水和显著高于（P≤0．05）DVH弱毒苗、空载体＋DVH弱毒疫苗和pcDNA-DuIFN—α对照组，50和100μg组差异不显著，28～56d均略高于200μg组。研究表明pcDNA—DuIFN—α是一种优秀的鸭细胞免疫的分子增强剂和DVH弱毒疫苗的分子佐剂，肌注100μg／只的效果最佳。
- 刘闯程安春汪铭书陈斌程志萍段坤杨梅周雪陈孝跃
- 关键词：细胞免疫调节
- Ⅰ型鸭病毒性肝炎病毒RT-PCR检测方法的建立被引量：40
- 2007年
- 根据获得的Ⅰ型鸭病毒性肝炎病毒（DHVⅠ）RNA聚合酶基因序列，应用Primer Premier5．0软件设计了1对引物，建立了检测DHVⅠ的RT-PCR方法。该法能从DHVⅠ中扩增到440bp的条带，而对正常鸭胚尿囊液、健康鸭肝、鸭瘟病毒、番鸭细小病毒、鹅细小病毒、雏鹅新型病毒性肠炎病毒、禽流感病毒（H5N2亚型）、鸭病毒性肿头出血症病毒、鸭源多杀性巴氏杆菌（5：A）的扩增结果均为阴性。该法最低可以检测到30pg的DHV工核酸模板。RT-PCR对DHVⅠ强毒CHv-1株人工感染发病死亡鸭肝的检测结果与病毒分离和Dot—ELISA检测结果的阳性检出率均为100％，对脾、肺、脑病料的检出率显著（P≤0．01）高于病毒分离和Dot-ELISA。RT-PCR、病毒分离和Dot—ELSA对1987～2005年采集且保存于-20℃的经病毒分离已确诊为鸭肝炎的临床送检肝病料的检出率分别为100％（19／19）、36．84％（7／19）和57．98％（11／19），对2000-2005年采集且于-20℃保存的来源于中国18个省份发病鸭群的48份肝病料的检出率分别为100％（48／48）、56．25％（27／48）和75．00％（36／48）。结果表明，建立的RT—PCR方法具有良好的特异性和敏感性，可用于DHVⅠ的分离鉴定、临床病料的检测和分子流行病学调查。
- 程安春汪铭书信洪一陈海军杨苗郭宇飞朱德康贾仁勇袁桂萍陈孝跃
- 间接免疫酶组化检测DHV方法建立及其抗原定位研究
- 建立检测鸭肝炎病毒(Duck Hepatitis Virus,DHV)的免疫组化方法,为DHV感染的实验室诊断、感染雏鸭体内的DHV抗原亚细胞定位研究提供有效的检测手段,阐明DHV在感染细胞内繁殖部位。用蔗糖密度梯度离心...
- 陈海军程安春汪铭书
- 关键词：免疫组化DHV雏鸭抗原定位
- 文献传递
- Ⅰ型鸭肝炎病毒间接免疫酶染色检测方法的建立被引量：7
- 2007年
- 以蔗糖密度梯度离心提纯的Ⅰ型鸭肝炎病毒(DHV-Ⅰ)免疫兔制备兔抗DHV-Ⅰ抗体,建立了检测石蜡组织切片中DHV-Ⅰ抗原的间接免疫酶染色(indirect immunoperoxidase staining,IIS)方法,并对DHV-Ⅰ强毒人工感染死亡或濒死雏鸭的各个组织器官进行了检测。结果表明,IIS与DHV-Ⅰ感染死亡或濒死雏鸭的肝等呈现阳性反应,与鸭瘟病毒、鸭疫里默氏杆菌、大肠杆菌、沙门菌、多杀性巴氏杆菌感染发病和死亡雏鸭的肝以及健康雏鸭的肝呈现阴性反应。感染DHV-Ⅰ死亡或濒死雏鸭的肝、脾、肾、心、胸腺、腔上囊、胰腺、十二指肠、盲肠、空肠、回肠、直肠的免疫组织化学检测呈阳性或强阳性,DHV-Ⅰ抗原主要分布于感染细胞的细胞质。该IIS法具有良好的特异性,可用于DHV-Ⅰ在感染雏鸭组织细胞中的亚细胞定位、DHV-Ⅰ感染雏鸭的实验室诊断、甲醛固定组织的回顾性诊断。
- 陈海军程安春汪铭书陈孝跃
- 关键词：免疫组织化学鸭肝炎病毒抗原定位
- 猪IL-2真核表达质粒构建及对PRRSV-ORF5基因疫苗免疫佐剂作用的研究被引量：9
- 2007年
- 本研究应用真核表达载体pcDNA3.1(+)和猪白细胞介素2(IL-2)基因成功构建了IL-2的真核表达质粒(pcDNA-IL-2),探讨了pcDNA-IL-2作为分子免疫佐剂对猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)ORF5基因疫苗(pcDNA-PRRSV-SC2-ORF5)免疫猪的增强作用。经间接ELISA法、MTT比色法及流式细胞仪分别对pcDNA-IL-2与pcDNA-PRRSV-SC2-ORF5共同免疫猪、pcDNA-PRRSV-SC2-ORF5单独免疫猪、pcDNA3.1(+)空载体和灭菌水免疫对照猪的血清抗PRRSV抗体IgG、外周血T淋巴细胞的增殖活性、CD4+和CD8+细胞比例进行检测,结果表明pcDNA-IL-2与pcDNA-PRRSV-SC2-ORF5共同免疫猪的IgG含量、外周血T淋巴细胞的增殖活性、CD4+和CD8+细胞比例与pcDNA-PRRSV-SC2-ORF5单独免疫猪相比有显著差异(P<0.05)。说明pcDNA-IL-2能显著增强pcDNA-PRRSV-SC2-ORF5基因疫苗免疫猪的体液和细胞免疫应答,可作为PRRSV基因疫苗的良好佐剂。
- 希尼尼根程安春汪铭书陈希文豆文波李雪梅刘伍梅张平英刘菲陈孝跃
- 关键词：IL-2免疫
