内蒙古自治区自然科学基金(2013MS0521)
- 作品数：2 被引量：5H指数：2
- 相关作者：高金亮徐萌杰姜晓杰王文杰李炜更多>>
- 相关机构：鄂尔多斯市疾病预防控制中心包头医学院更多>>
- 发文基金：内蒙古自治区自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- 钝顶螺旋藻超氧化物歧化酶的原核表达及纯化被引量：3
- 2013年
- 目的原核表达并纯化钝顶螺旋藻超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)。方法利用PCR技术扩增钝顶螺旋藻sod基因,克隆入原核表达载体pGEX-4T-1,构建重组表达质粒pGEX-4T-sod,转化大肠埃希菌BL21(DE3)pLysS,IPTG诱导表达。表达的重组融合蛋白SOD-GST利用蛋白纯化树脂Glutathione SepharoseTM4 Fast Flow纯化后,采用改进的邻苯三酚自氧化法测定重组SOD的活性。结果重组表达质粒pGEX-4T-sod经双酶切和测序证实构建正确;表达的融合蛋白SOD-GST的相对分子质量约为49 000,表达量占菌体总蛋白的30.2%,在重组菌裂解上清和沉淀中均有融合蛋白的表达;纯化的融合蛋白纯度为82.4%,浓度为2.8 mg/ml,从可溶性表达产物中纯化的酶的比活性为1 440 U/mg。结论在大肠埃希菌中成功表达并纯化了具有生物学活性的钝顶螺旋藻SOD,为其产业化生产奠定了基础。
- 赫慧琛姜晓杰高金亮徐萌杰王英王文杰李炜祁美荣
- 关键词：钝顶螺旋藻超氧化物歧化酶原核细胞基因表达纯化
- 钝顶螺旋藻别藻蓝蛋白α、β亚基基因的克隆及其原核表达被引量：2
- 2015年
- 目的克隆钝顶螺旋藻别藻蓝蛋白(allophycocyanin,APC)α、β亚基的基因序列,分别构建该蛋白的α和β亚基的原核表达载体,并在大肠埃希菌中进行表达。方法 PCR扩增钝顶螺旋藻APC基因(apc)序列,克隆至p GEM-T easy载体中,测序分析插入片段的正确性。以克隆的apc基因为模板,分别扩增APC的α和β亚基的编码基因apc A和apc B,测序分析正确后,分别克隆入表达载体p GEX-4T-1中,构建重组质粒p GEX-4T-apc A和p GEX-4T-apc B。将重组质粒转化入大肠埃希菌BL21(DE3)p Lys S感受态细胞中,IPTG诱导表达,表达产物经Glutathione Sepharose TM 4Fast Flow树脂纯化,Bradford法测定纯化蛋白的浓度。结果成功克隆了钝顶螺旋藻的APCα和β亚基的编码基因apc A和apc B,构建的重组质粒经测序证明构建正确,表达的融合蛋白α-APC-GST和β-APC-GST的相对分子质量均为43 000,其中α-APC-GST主要以可溶性形式存在,表达量占菌体总蛋白的32.1%,纯化后的蛋白纯度达85%,蛋白浓度为0.3 mg/ml;β-APC-GST主要以包涵体形式存在,表达量占菌体总蛋白的31.4%,纯化后的蛋白纯度达65.4%,蛋白浓度为0.1 mg/ml。结论已成功克隆并在大肠埃希菌中表达了钝顶螺旋藻APC的α和β亚基。
- 姜晓杰高金亮祁美荣徐萌杰王文杰李炜
- 关键词：钝顶螺旋藻基因原核表达
