国家自然科学基金(81271411)
- 作品数：10 被引量：41H指数：4
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- proBDNF对培养鼠小脑颗粒细胞增殖和凋亡的影响被引量：1
- 2014年
- 目的观察脑源性神经营养因子前体(proBDNF)对培养的小鼠小脑颗粒细胞(CGCs)的增殖和凋亡的影响,探讨p75神经营养因子受体(p75NTR)和VPS10P-结构域家族成员sortilin的介导机制。方法采用出生后7 d(P7)的129SV转基因小鼠(p75NTR+/+和p75NTR-/-)进行CGCs的原代培养。分为BSA组(10 ng/mL)、proBDNF干预组(10 ng/mL)和proBDNF(10 ng/mL)+sortilin-Fc(20 ng/mL)干预组。免疫荧光染色法观察p75NTR和sortilin在培养细胞的表达,BrdU标记阳性增殖细胞以及TUNEL法检测凋亡细胞。结果成功培养出高纯度的原代小脑颗粒细胞。免疫荧光显示p75NTR和sortilin共同表达于野生型小鼠培养的小脑神经元胞膜和突起上。给予proBDNF干预后,p75NTR+/+型CGCs的BrdU阳性细胞比例较对照组明显减少(P<0.01),而TUNEL阳性细胞比例较对照组明显增加(P<0.01),且这两种效应都可被sortilin-Fc竞争性抑制并中和;p75NTR-/-型CGCs中各组之间BrdU阳性细胞以及TUNEL阳性细胞比例均无显著性差异(P>0.05)。结论 proBDNF可能通过与p75NTR、sortilin结合形成功能三聚体抑制神经细胞的增殖、促进细胞凋亡,proBDNF具有神经毒性作用。
- 陈甲张涛刘娟蒋晓江许志强
- 关键词：小脑颗粒细胞增殖凋亡
- 脑源性神经营养因子前体的研究进展被引量：10
- 2015年
- 神经营养因子家族对神经细胞的生长、分化和存活等具有重要的营养支持作用,这早已成为研究者们的共识.早期研究者较为关注的是其中的脑源性神经营养因子（brain-derived neurotrophic factor,BDNF）家族,但成熟体BDNF的表达水平近来被认为可能难以成为阿尔茨海默病等神经退行性疾病有效的生物标记物[1.近年来研究发现,脑源性神经营养因子前体（brain-derived neurotrophic factor precursor,proBDNF）作为成熟BDNF的前体物质,其自身存在着重要功能,逐渐改变了以往将proBDNF仅作为细胞内无生物活性的失活状态的传统认识[2-3].研究证实,proBDNF在神经细胞的生长、分化、存活和凋亡等方面均有重要作用,与神经突触可塑性以及记忆等功能有重要联系.
- 陈甲周华东许志强
- 关键词：脑源性神经营养因子神经生长因子类神经元基质金属蛋白酶类
- 肝性脑病患者脑脊液Tau蛋白水平测定及其临床意义被引量：1
- 2016年
- 目的:探讨肝性脑病患者脑脊液中总Tau蛋白(t-Tau)和磷酸化Tau蛋白(p-Tau)水平的变化及其与疾病严重程度的相关性。方法:采集26例肝性脑病患者及31例健康对照的脑脊液标本,采用酶联免疫吸附法(Elisa)检测脑脊液中的t-Tau和p-Tau水平,分析其与Child-Pugh评分和West Haven分级的相关性。结果:(1)肝性脑病患者脑脊液t-Tau和p-Tau水平显著高于健康对照组(P<0.01)。(2)肝性脑病患者脑脊液t-Tau(γ=0.876,P<0.01;γ=0.952,P<0.01)、p-Tau(γ=0.808,P<0.01;γ=0.808,P<0.01)水平与Child-Pugh评分及West-Haven分级呈正相关。结论:由于脑脊液t-Tau和p-Tau水平为神经元损害的标志物,同时反应脑内应激状况,本研究证实肝性脑病患者脑内处于应激状态并有神经元损伤。
- 刘承春吴芳张志宏吴娅许志强张猛
- 关键词：肝性脑病神经损伤TAU
- 脑出血患者脑脊液Abeta水平检测及其临床意义被引量：2
- 2016年
- 目的:探讨脑出血患者脑脊液中amylid-beta(Aβ)40和Aβ42水平及其与出血量以及血肿周围低密体积相关性。方法:采集73例脑出血患者及72例健康对照的脑脊液标本,采用酶联免疫吸附法(Elisa)检测脑脊液中的Aβ40和Aβ42的水平,分析其与出血量和血肿周围低密度体积的相关性。结果:(1)脑出血患者脑脊液Aβ40和Aβ42水平显著高于健康对照组(P<0.01)。(2)脑出血患者脑脊液Aβ40(r=0.549,P<0.01;r=0.791,P<0.01)和Aβ42(r=0.450,P<0.01;r=0.440,P<0.01)水平与出血量及血肿周围低密度体积呈正相关。结论:Aβ40和Aβ42水平为神经元损害的标志物,本研究提示脑脊液Aβ40和Aβ42水平对于判断脑出血严重程度具有临床参考价值。
- 刘承春吴芳张志宏吴娅许志强张猛
- 关键词：脑出血神经损伤ABETA
- 脑源性神经营养因子前体对小鼠海马神经元存活和突起生长的抑制作用被引量：5
- 2014年
- 目的探讨脑源性神经营养因子前体(proBDNF)对小鼠海马神经元存活和突起生长的影响,以及p75神经营养素受体(p75NTR)在其中的介导作用。方法取p75NTR转基因18日龄胎鼠(野生型p75NTR+/+,基因敲除型p75NTR–/–)海马组织,进行新生海马神经元原代培养。p75NTR+/+基因型神经元设对照组、proBDNF(30ng/ml)组和proBDNF(30ng/ml)+p75/Fc(30μg/ml)组,p75NTR–/–基因型神经元设对照组和proBDNF(30ng/ml)组。采用MTT法检测各组处理24h后新生海马神经元的存活情况,免疫荧光染色观察各组处理72h后的突起长度。结果经MAP2和DAPI双重荧光染色鉴定,成功培养出高纯度新生海马神经元。MTT检测结果显示,在p75NTR+/+型海马神经元中,proBDNF组570nm处吸光度值(A570)明显小于对照组(P<0.05),加入p75NTR受体竞争性抑制剂p75/Fc后与对照组相比差异无统计学意义(P>0.05);在p75NTR–/–型海马神经元中,proBDNF组A570值与对照组差异无统计学意义(P>0.05)。免疫荧光染色显示,p75NTR+/+神经元proBDNF组神经突起长度明显小于对照组(P<0.05),proBDNF(30ng/ml)+p75/Fc(30μg/ml)组与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05);p75NTR–/–神经元proBDNF组神经突起长度与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论 proBDNF通过p75NTR受体途径抑制神经元的存活和突起生长,具有毒性作用。
- 陈甲矫树生梁春荣王延江许志强
- 关键词：脑源性神经营养因子神经生长因子类神经元海马
- 快速眼动期睡眠剥夺对大鼠海马齿状回神经元增殖与凋亡的影响被引量：1
- 2013年
- 目的探讨快速眼动期(rapid eye movement,REM)睡眠剥夺(sleep deprivation,SD)对大鼠海马齿状回神经元增殖与凋亡的影响。方法 45只Sprague-Dawley大鼠按随机数字表法分为3组:①普通鼠笼对照组(CC,n=15);②睡眠剥夺组(SD,n=15);③睡眠恢复组(RS,n=15)。采用改良多平台睡眠剥夺法连续72 h剥夺大鼠REM睡眠后,利用BrdU标记增殖细胞,运用免疫组织化学方法观察大鼠海马齿状回神经元增殖情况,并利用免疫荧光染色检测大鼠海马齿状回新生神经元标记物微管相关蛋白(doublecortin,DCX)和星形胶质细胞标记物胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)的表达情况。采用TUNEL法观察大鼠海马神经元凋亡情况。结果免疫组化结果显示SD组及RS组每张切片BrdU阳性细胞平均数均明显少于CC组(P<0.01),但是RS组与SD组相比无显著性差异(P>0.05)。免疫荧光染色结果显示,DCX阳性细胞在BrdU阳性细胞中所占比例最大,各组间BrdU/DCX、BrdU/GFAP双阳性细胞的百分比相差不显著(P>0.05)。CC组、SD组及RS组各组海马区均未见TUNEL阳性细胞。结论 REM睡眠剥夺抑制海马齿状回神经元增殖,短期睡眠恢复后无显著改善。REM睡眠剥夺对海马齿状回神经元的分化和凋亡无影响。
- 梁小敏陈甲许志强
- 关键词：海马齿状回凋亡
- 中国人群MTHFR基因C677T多态性与青中年缺血性脑卒中相关性的Meta分析被引量：10
- 2014年
- 目的系统评价中国人群中N5,N10-亚甲四氢叶酸还原酶(MTHFR)基因677位点单核苷酸多态性(C677T)与青中年缺血性脑卒中易感性的相关性。方法计算机检索PubMed、EMbase、h e Cochrane Library(2013年第11期)、CBM、CNKI、VIP及WanFang Data,收集相关中国人群MTHFR基因C677T多态性与青中年缺血性脑卒中关系的病例-对照研究,检索时限均为从各数据库建库至2013年11月。由2位评价者按照纳入与排除标准独立筛选文献、提取资料并评价纳入研究的方法学质量后,采用RevMan 5.2进行Meta分析,并采用Stata 12.0进行敏感性分析和发表偏倚评估。结果共纳入10个病例-对照研究,合计病例787例,对照766例。Meta分析结果显示:在青中年组(年龄<60岁)中,携带T等位基因的人群相对于C等位基因的人群,缺血性脑卒中易感性增加[OR=1.42,95%CI(1.07,1.89),P=0.02];基因型为TT的人群缺血性脑卒中发病风险高于基因型为CC者[OR=2.11,95%CI(1.58,2.81),P<0.000?01];显性模型中TT+TC基因型的人群发病风险高于CC基因型的人群[OR=1.97,95%CI(1.55,2.51),P<0.000?01];隐形模型中TT基因型者发病风险同样高于TC+CC基因型者[OR=1.42,95%CI(1.13,1.77),P=0.003]。而在青年组(年龄<45岁),显性遗传模型的TT+TC基因型者相对于CC基因型者显示出更高的发病风险[OR=1.66,95%CI(1.19,2.32),P=0.003]。结论 MTHFR基因C677T多态性与中国人群青中年缺血性脑卒中的发病具有显著相关性,677T的存在增加发病风险。
- 陈甲和儒林朗莹许志强
- 关键词：缺血性脑卒中META分析病例-对照研究青中年
- 脑源性神经营养因子前体基因重组蛋白的原核表达和活性鉴定被引量：3
- 2014年
- 目的：原核表达脑源性神经营养因子前体（ proBDNF ）基因重组蛋白，并检测其生物学活性。方法通过PCR方法扩增大鼠点突变型基因的脑源性神经营养因子前体的cDNA，克隆到质粒pET-28a中，在大肠杆菌BL21中表达，其表达产物经Western印迹方法鉴别，用DAPI法检测其对PC12细胞凋亡的影响。结果重组基因的扩增产物在大肠杆菌中获得表达，表达产物符合目的蛋白分子量并能够与特异性抗体反应。原核表达的proBDNF基因重组蛋白能够诱导PC12细胞的凋亡。结论成功地在大肠杆菌BL21中表达了proBDNF基因重组蛋白，该蛋白能够对促进PC12细胞的凋亡，具有生物毒性。
- 陈甲梁小敏许志强
- 关键词：PCR原核表达
- 不同形态脑源性神经营养因子与阿尔茨海默病关系研究进展被引量：10
- 2019年
- 阿尔茨海默病(AD)是一种常见的中枢神经系统变性疾病,是老年痴呆人群的主要病因。脑源性神经营养因子(BDNF)是神经营养蛋白家族的重要成员。BDNF及其前体蛋白脑源性神经营养因子前体(proBDNF)、脑源性神经营养因子前肽(pBDNF)在AD发病机制中起着重要作用。现对BDNF、proBDNF及pBDNF的表达、功能及其与AD之间的关系进行综述如下。
- 许曼玉许志强
- 关键词：脑源性神经营养因子阿尔茨海默病
- AAV-proBDNF对阿尔茨海默病鼠海马DCX阳性细胞数及PSD-95表达的影响被引量：3
- 2019年
- 目的探讨侧脑室注射携带抗裂解脑源性神经营养因子前体(proBDNF)基因的腺相关病毒基因整合载体(AAV-proBDNF)对阿尔茨海默病小鼠(AD鼠)海马神经形成与生长的影响。方法取5月龄APP/PS1转基因AD鼠15只,采用抛硬币法随机分为正常对照组(n=5)、空载体对照组(n=5)和AAV-proBDNF组(n=5),AAV-proBDNF组右侧侧脑室注射AAV-proBDNF(4μL,2×10^(13)v.g./mL),空载体对照组右侧侧脑室注射等量空病毒载体,正常对照组右侧侧脑室注射生理盐水(4μL)。于侧脑室注射后4周采用ELISA检测海马proBDNF含量,免疫组化检测海马齿状回DCX阳性细胞数,Western blot检测海马突触后致密物-95 (PSD-95)表达。结果侧脑室注射后4周,AAV-proBDNF组脑内proBDNF表达水平较正常对照组明显增加,且显著高于空载体对照组,差异均具有统计学意义(P<0.05);AAV-proBDNF组海马DCX阳性细胞数为(202.46±24.27),明显低于正常对照组(382.26±37.58,P<0.05)和空载体对照组(365.48±32.68,P<0.05);AAV-proBDNF组海马PSD-95相对含量为(0.62±0.05),明显低于正常对照组(0.82±0.02,P<0.05)和空载体对照组(0.86±0.07,P<0.05)。结论侧脑室注射AAV-proBDNF能够在AD鼠脑内成功表达proBDNF,并可降低AD鼠海马区新生神经元数量及突触可塑性。
- 许曼玉陈甲许志强
- 关键词：阿尔茨海默病
