甘肃省农业生物技术研究与应用开发项目(GNSW-2010-01)
- 作品数：6 被引量：12H指数：2
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- 抗蠕虫药对人工感染豆状囊尾蚴家兔肌肉主要营养成分的影响被引量：3
- 2014年
- 为分析不同驱虫药对感染豆状囊尾蚴肌肉营养成分含量的影响,本试验采用3种抗蠕虫药(甲苯咪唑、吡喹酮、丙硫苯咪唑)对人工感染豆状囊尾蚴家兔进行驱虫试验,并对感染豆状囊尾蚴后和驱虫后家兔肌肉营养成分(水分、灰分、脂肪和蛋白质)含量变化进行分析。结果表明,3种抗蠕虫药对家兔感染豆状囊尾蚴均有不同程度的驱虫效果,家兔肌肉营养成分含量有不同程度的升高。其中,甲苯咪唑和丙硫苯咪唑对家兔肌肉中的水分、脂肪和蛋白质含量影响较大,吡喹酮驱虫后家兔肌肉中灰分含量增加较明显。
- 韩乐乐李作磊苟惠天孙晓琳
- 关键词：豆状囊尾蚴营养成分抗蠕虫药
- 豆状带绦虫TPO18基因的原核表达及保护性分析被引量：1
- 2014年
- 【目的】明确重组蛋白pGEX-TPO18的免疫保护效果。【方法】提取豆状带绦虫六钩蚴RNA,根据带科其他种属绦虫18 kD基因的保守区设计引物,5′端分别引入EcoR I、Xho I限制性酶切位点,RT-PCR扩增,产物克隆于pMD18-T中进行序列测定,并对序列进行生物信息学分析。将纯化后的PCR产物和质粒pGEX-4T-1分别用EcoRⅠ+XhoⅠ双酶切,回收目的片段,连接后转化至E.coli BL21感受态细胞,挑斑摇菌,通过PCR方法和重组质粒测序技术进行鉴定,将鉴定正确的重组表达质粒命名为pGEX-TPO18。用IPTG诱导表达重组质粒,收集菌体进行SDS-PAGE分析,用GST琼脂糖树脂纯化TPO18蛋白,进行Western blottting检测。将纯化后的重组蛋白分别乳化弗氏佐剂、206佐剂、氢氧化铝佐剂后免疫家兔,每次50μg/只,共免疫3次,末次免疫后34 d每只家兔感染1 500个虫卵,感染58 d后扑杀并计算各免疫组减囊率。免疫前后每隔7 d采血分离血清,ELISA法检测血清抗体水平,以40μg·mL-1重组蛋白包被酶标板,血清1﹕200稀释,检测血清样品的OD492nm值。【结果】TPO18基因的RT-PCR扩增产物为339 bp,与预期大小相符;测序结果表明无碱基突变,重组质粒pGEX-TPO18构建成功。pGEX-TPO18在大肠杆菌中获得高效表达,表达产物为38.6 kD的可溶性蛋白,Western blotting分析结果显示兔抗豆状囊尾蚴阳性血清与重组蛋白在38.6 kD处有一条明显的反应条带,表明该重组蛋白具有反应原性。经ELISA检测,免疫后7 d免疫组家兔抗体水平开始升高,第43天达到峰值。经口感染虫卵后,免疫组抗体水平开始降低,但仍保持一定水平。家兔免疫保护试验表明弗氏佐剂、206佐剂和氢氧化铝佐剂免疫组减囊率分别为79.13%、65.66%和50.43%。【结论】研究表明弗氏佐剂免疫效果较好,有望研制出抗豆状囊尾蚴病的高效疫苗。
- 韩进欢苟惠天尚清炎孙晓林
- 关键词：原核表达
- 羊脑多头蚴的超微结构观察被引量：1
- 2012年
- 为观察羊脑多头蚴的超微结构,寻找自然感染羊脑多头蚴的病羊,采集多头带绦虫续绦期幼虫,固定于25mL/L戊二醛中,分别取其头节、囊壁、颈部区,超薄切片后进行透射电镜观察。结果表明,羊脑多头蚴的囊壁结构具有微毛,远离头节的囊壁微毛与头节附近颈部区囊壁的微毛分布情况不同;囊壁可明显分为皮层、间质层、实质区;在实质区可观察到皮层细胞、实质细胞、成石灰小体细胞、焰细胞、成肌细胞以及排泄系统结构;头节中可观察到很发达的肌纤维结构,头节内部有类似于囊壁的皮层结构,并可见粗大微毛,细胞种类明显少于囊壁实质区,含颗粒的囊泡结构明显增多。证明羊脑多头蚴囊壁的结构和细胞种类与其他绦虫相似,但有比较发达的排泄系统;头节外表面无皮层结构,仅有呈环状围绕的纤维和囊泡结构。
- 张小宇韩进欢贺延玉孙晓林
- 关键词：羊脑多头蚴透射电镜超微结构
- 豆状带绦虫不同发育阶段虫体的抗原特性分析被引量：6
- 2012年
- 为了解豆状带绦虫成虫、幼虫及虫卵的蛋白组分及其之间的差异,比较分析其免疫反应性,应用SDS-PAGE从豆状带绦虫不同发育阶段的虫体中分离出4～8条主要蛋白区带,分子质量为30.4～114.9ku。取人工感染豆状带绦虫犬自然排出的孕卵节片,虫卵计数后以不同数量虫卵感染家兔,定期采血,用间接ELISA法检测家兔的抗体变化情况。结果显示,家兔自感染后第2周抗体水平开始升高,第7周开始逐渐下降。以第7周感染家兔血清对13种虫体抗原进行的Western-blot分析显示,13种虫体抗原在59.4ku处均能被兔抗豆状囊尾蚴血清识别,羊脑多头蚴与豆状囊尾蚴共有4条相似带,分子质量分别为32.7、59.4、78.7、81.1ku,特异性抗原极相似,表明虫种之间存在着强烈的交叉反应,59.4ku蛋白带很有希望成为预防兔豆状囊尾蚴病的候选抗原。
- 韩进欢张小宇张倩尚清炎范希萍孙晓林
- 关键词：豆状囊尾蚴SDS-PAGEWESTERN-BLOT
- 豆状带绦虫抗原的SDS-PAGE及Western-blot分析被引量：1
- 2014年
- 为筛选豆状囊尾蚴的特异性抗原,采用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）和免疫印迹（Western-blot）技术对自然感染的豆状带绦虫成虫、幼虫的头节、囊壁可溶性抗原及囊液抗原进行了分析.结果表明：从豆状带绦虫不同发育阶段的虫体中分离出5~12条主要蛋白区带,分子质量为25~114 ku.以第7周自然感染家兔血清对7种虫体抗原进行的Western-blot分析显示,7种虫体抗原在42、57、63 ku处均能被兔抗豆状囊尾蚴血清识别.以家兔阳性血清中提取出来的 IgG免疫球蛋白对 7种虫体抗原进行的 Western-blot分析显示,7种虫体抗原在63 ku处均能被兔抗豆状囊尾蚴血清识别.说明63 ku蛋白带可作为预防兔豆状囊尾蚴病的候选疫苗抗原.试验初步阐明了豆状带绦虫 7种不同抗原的部分生化特性,为对该抗原的进一步深入研究奠定了基础.
- 张倩李作磊尚清炎范希萍苟惠天韩进欢韩乐乐孙晓林
- 关键词：免疫印迹抗原
- 兔豆状囊尾蚴TpRS1基因的克隆及其序列分析
- 2014年
- 旨在研究兔豆状囊尾蚴TpRS1的功能,根据GenBank中猪带绦虫RS1 cDNA序列设计引物,以豆状囊尾蚴总RNA为模板,利用RT-PCR技术首次克隆到兔豆状囊尾蚴TpRS1的完整开放阅读框序列,并利用生物信息学软件对该基因及其编码蛋白的基本理化性质、疏水性、信号肽、二级结构和抗原位点等方面进行了预测和分析。结果表明,兔豆状囊尾蚴TpRS1的cDNA序列为275 bp的基因片段,该序列含有一个由258个核苷酸组成的开放阅读框,编码85个氨基酸。其编码蛋白疏水性,分子质量为9.6 kD,理论等电点为9.07。TpRS1二级结构中α螺旋占70.59%,β折叠占5.88%,其余23.53%为无规卷曲,TpRS1没有信号肽序列,同源性分析表明与其他带科绦虫的一致性在72%以上,系统进化分析表明与泡状带绦虫处于同一进化分支。
- 韩乐乐李作磊苟惠天孙晓林
- 关键词：豆状囊尾蚴克隆
