甘肃省农业生物技术研究与应用开发项目(GNSW-2010-10)
- 作品数：2 被引量：7H指数：2
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- 相关机构：西北民族大学兰州百源基因技术有限公司更多>>
- 发文基金：甘肃省科技支撑计划甘肃省农业生物技术研究与应用开发项目更多>>
- 相关领域：生物学农业科学更多>>
- 牛轮状病毒的分离与细胞培养特性被引量：4
- 2010年
- 探讨牛轮状病毒(BRV)的细胞培养方法,为研发诊断试剂盒和疫苗提供依据.将RT-PCR阳性样品在MA-104细胞及Vero细胞上进行培养,盲传4代后MA-104细胞出现病变(CPE),主要表现为细胞脱落,出现拉网现象,部分出现死亡.这表明轮状病毒能够在MA-104细胞上生长,并引起细胞病变;而Vero细胞无病变.用胰酶处理的病毒接种MA-104细胞,用含2μg/mL、3μg/mL和5μg/mL三种(A、B和C)不同浓度胰酶的培养液在MA-104和Vero细胞对犊牛轮状病毒传代培养.将分离培养的病毒经聚丙烯酰胺凝胶电泳,结果表明BRV在C组培养液中分离培养最好,聚丙烯酰胺凝胶电泳图显示病毒核酸呈4∶2∶3∶2排列,与参考株NCDV相似,呈典型A群轮状病毒的特征.
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- 关键词：轮状病毒细胞病变胰酶
- 牛轮状病毒VP7基因荧光定量RT-PCR检测方法的建立被引量：3
- 2013年
- 为建立快速特异的定量检测牛轮状病毒(BRV)VP7基因的荧光定量PCR检测方法,本研究设计扩增BRV VP7基因的特异性引物,将扩增的VP7基因片段(342 bp)克隆于pMD18-T载体中(pMD-VP7),作为重组质粒标准品,建立EvaGreen荧光定量RT-PCR(qRT-PCR)检测方法。经反应条件优化,结果表明该方法的最低检测量为8.03拷贝/μL。该方法对牛病毒性腹泻病毒、牛冠状病毒、猪流行性腹泻病毒及牛结核分枝杆菌的检测结果均为阴性,表明其具有良好的特异性。批内和批间重复变异系数均小于3%。采用该方法对12份ELISA阳性样本检测出10份阳性,符合率83.33%。本研究建立的BVR VP7 qRT-PCR检测方法具有特异、灵敏、快速和对标本的检测能力较强等特点,可以用于临床诊断和流行病学调查。
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- 关键词：轮状病毒VP7基因实时荧光定量PCR
