国家高技术研究发展计划(2003AA215020)
- 作品数：8 被引量：24H指数：3
- 相关作者：邹全明郭刚曾浩毛旭虎童文德更多>>
- 相关机构：第三军医大学北华大学更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划“九五”国家科技攻关计划国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：医药卫生化学工程更多>>
- 壳聚糖-海藻酸钠包裹幽门螺杆菌全菌蛋白微球疫苗制备工艺研究被引量：7
- 2007年
- 目的改变壳聚糖-海藻酸钠包裹幽门螺杆菌全菌蛋白微球制备中的各项参数,最终确认微球制备工艺。方法根据形成乳液的溶解性、流动性及黏稠度,选择微球制备过程中海藻酸钠(AGS)浓度及植物油与海藻酸钠的配比,通过比较形成微球的粒径大小,最终确定微球制备中CaCl2溶液的滴定程序及搅拌速率、搅拌时间等实验参数。结果确定了AGS乳液浓度为2%、植物油与AGS乳液配比为2∶8、CaCl2溶液反滴滴定法等MS制备工艺,并确定了搅拌速率800r/min、药物浓度2mg/ml、制备温度25℃、搅拌时间30min等参数。结论依照上述参数可以制备出符合实验要求的微球疫苗。
- 王毅超邹全明任建敏郭刚解庆华刘健
- 关键词：微球幽门螺杆菌
- Hp中性粒细胞激活蛋白研究进展被引量：1
- 2006年
- 幽门螺杆菌(Hp)是一种参与多种胃、十二指肠疾病的重要人类病原体,可引起慢性胃炎和消化性溃疡,并与胃癌密切相关。人类幽门螺杆菌感染的特征是胃黏膜炎症部位中性粒细胞持续浸润。幽门螺杆菌中性粒细胞激活蛋白(H.py-lorineutrophil-activating protein,HP-NAP)正是由于其能活化中性粒细胞而被如此命名。HP-NAP不仅是重要的毒力因子,而且是主要的候选疫苗抗原。本文综述了HP-NAP的结构、生物学活性和致病机制等的研究进展,并对其应用前景进行了展望。
- 高原邹全明
- 关键词：抗原
- 有氧胁迫下幽门螺杆菌球形体形成的比较蛋白质组学研究被引量：8
- 2006年
- 目的研究有氧胁迫下幽门螺杆菌(H.pylori)由螺旋体转变成球形体的适应性调节蛋白。方法运用双向电泳技术比较H.pylori螺旋体与球形体的全菌蛋白表达谱,差异蛋白进行胶内酶切,肽混合物使用基质辅助激光解吸/电离飞行时间质谱仪(MALDI-TOF-MS)进行质谱分析,将肽质量指纹谱数据输入互联网上的蛋白质数据库进行检索。结果获得6个与H.pylori球形体形成相关的适应性调节蛋白,即翻译延长因子Tu、丙酮酸-黄素蛋白氧化还原酶、黄素氧化还原蛋白、尿素酶G、烷基化氢化氧化酶、超氧化物歧化酶。结论上述蛋白的鉴定对深入研究有氧胁迫下H.pylori球形体的形成机制,筛选具有潜在价值的抗H.pylori药物靶位和疫苗候选表位具有参考价值。
- 曾浩邹全明郭刚毛旭虎童文德
- 关键词：幽门螺杆菌球形体比较蛋白质组学活性氧代谢
- 幽门螺杆菌球形体回复原形的实验研究被引量：3
- 2008年
- 目的对幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)球形体进行体内、外回复原形的比较研究,揭示其潜在的传播途径。方法在布氏肉汤的基础上设计了4种Hp再生培养基,对Hp螺旋体、原生质体及球形体进行体外培养;同时采用30只蒙古沙土鼠(Mongolian gerbil)进行体内感染定植实验,对感染小鼠胃粘膜进行Hp定量培养和组织学检测。结果Hp球形体在4种再生培养基中均未能回复生长;而在感染小鼠的体内却观察到了Hp球形体的回复定植。Hp螺旋体感染组在小鼠胃内的定植密度较高,且胃粘膜下可见大量炎症细胞浸润;而球形体感染组并未见到小鼠胃粘膜组织的明显炎症损伤,且仅有少量回复的螺旋体定植。结论Hp球形体作为一种低水平代谢休眠体,代谢活性及毒力均有所减弱,但仍具有潜在的致病性。本研究支持部分Hp球形体具有活力但体外不能培养成活这一假说,提示"粪-口"传播应引起更多的关注。
- 曾浩郭刚毛旭虎童文德邹全明
- 关键词：幽门螺杆菌球形体螺旋体蒙古沙土鼠
- 有氧胁迫幽门螺杆菌球形变异的实验研究被引量：4
- 2006年
- 目的对有氧胁迫下幽门螺杆菌(Hp)的球形变异特征进行研究。方法采用细菌学、酶学、遗传学、动物实验等方法对有氧胁迫作用下形成的Hp球形体进行实验研究。结果随着有氧胁迫时间的延长,Hp螺旋体逐渐转化为球形体,代谢及酶活性逐渐下降并趋于稳定,与Hp定居相关的毒力基因表达有所减弱,但SodB和Kat在基因表达和酶活检测中均保持较高水平;部分Hp球形体可在小鼠体内回复定植。结论有氧胁迫下形成的Hp球形体代谢活性及毒力均有所减弱,但部分球形体仍具有活性。SodB和Kat可能在Hp活性氧代谢中发挥着重要作用。
- 曾浩邹全明郭刚毛旭虎童文德
- 关键词：球形体活性氧代谢
- 幽门螺杆菌分子内佐剂三价疫苗的构建、纯化及活性研究被引量：1
- 2006年
- 目的构建幽门螺杆菌(helicobacterpylori,Hp)中性粒细胞激活蛋白基因napA、黏附素hpaA、尿素酶B亚单位活性功能片段ureB414与大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位(heat-labileenterotoxinBsubunit,LTB)的分子内佐剂三价融合蛋白疫苗,并通过口服免疫小鼠研究其抗原性,为疫苗的开发奠定基础。方法利用分子克隆技术构建携带napA-hpaA-ureB414-LTB融合基因的重组原核表达质粒pET-22b-NHUL,转化E.coliBL21(DE3),进行原核表达,重组表达蛋白采用HK26/60Superdex-75分子筛和亲和层析柱ChelatingSepharose进行纯化,Tris-Tricine电泳和Westernblot鉴定,GM1-ELISA检测rNHUL与神经节苷脂的结合。口服免疫Balb/c小鼠,检测重组融合蛋白的抗原性。结果重叠延伸PCR扩增出了约1590bp的NHUL融合基因;其核苷酸序列与GenBank公布的相关序列一致。重组融合蛋白以可溶和包涵体两种形式表达,表达量约占细菌总蛋白的25%,Tris-Tricine初步测定目的蛋白的Mr约59000,纯化后纯度大于90%。Westernblot检测其具有良好的抗原性。该重组蛋白保持了与神经节苷脂GM1结合的生物学活性。动物实验表明,多亚单位疫苗口服免疫小鼠后血清特异性IgG、IgA和胃黏液、肠黏液的抗原特异性sIgA抗体显著高于单一亚单位疫苗。结论所获得重组融合蛋白具有良好的抗原性和黏膜佐剂活性,为进一步的疫苗研究奠定了基础。
- 高原张卫军邹全明
- 关键词：幽门螺杆菌中性粒细胞激活蛋白疫苗
- 幽门螺杆菌适应性球形变异相关蛋白的筛选及鉴定被引量：2
- 2008年
- 目的对幽门螺杆菌(Hp)在有氧胁迫条件下由螺旋体转变成球形体的适应性调节蛋白进行筛选及鉴定。方法运用双向电泳技术比较Hp螺旋体与球形体的全菌蛋白表达谱,差异蛋白进行胶内酶切,肽混合物使用基质辅助激光解吸/电离飞行时间质谱仪(MALDI-TOF-MS)进行质谱分析,将肽质量指纹谱数据输入互联网上的蛋白质数据库进行检索。结果获得7个与Hp球形变异相关的适应性调节蛋白,即翻译延长因子Tu(EF-Tu)、丙酮酸-黄素蛋白氧化还原酶(POR)、黄素氧化还原蛋白(FldA)、尿素酶G(UreG)、热休克蛋白10(Hsp10)烷基化氢化氧化酶(Ahp)、超氧化物歧化酶(SOD)。结论共筛选出7个与Hp球形变异相关的适应性调节蛋白,对有氧胁迫下Hp球形体的形成机制研究和抗Hp药物靶位和疫苗候选靶位的筛选具有参考价值。
- 曾浩郭刚毛旭虎童文德邹全明
- 关键词：幽门螺杆菌球形体双向电泳活性氧代谢
- 幽门螺杆菌napA基因克隆及高效表达与鉴定被引量：1
- 2006年
- 高原邹全明吴超
- 关键词：幽门螺杆菌基因克隆中性粒细胞激活蛋白慢性活动性胃炎胃黏膜炎症
