国家自然科学基金(30901056)
- 作品数：3 被引量：0H指数：0
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- 金黄地鼠Kcnq1基因的分子克隆与鉴定以及在多种器官组织中的表达差异分析
- 2013年
- 本研究对金黄地鼠Kcnq1基因进行分子克隆与鉴定以及在多种器官组织的表达差异进行分析,旨在研究Kcnq1基因在地鼠各组织器官中的功能。提取金黄地鼠心脏组织总RNA,根据大鼠Kcnq1的保守序列区域设计引物TK1,用RT-PCR化后的cDNA在T4连接酶的作用下与pMD18-T载体特异性连接,转化感受态大肠杆菌DH5a中,筛选重组子并酶切鉴定,将鉴定后的重组子进行DNA测序。提取心、肝、脾、肺、肾各组织总RNA,并反转,将各组织cDNA做荧光定量检测,检测各组织表达量的差异。结果,克隆出金黄地鼠Kcnq1基因477bp的部分片段长度,推测出编码的159个氨基酸。与大鼠等物种Kcnq1基因比对,核苷酸和氨基酸序列均具有较高的同源性。荧光定量结果显示,Kcnq1在金黄地鼠心脏中表达量最高,在肺脏和肾脏中均有较高表达,在脾脏中低度表达,在肾脏中基本不表达。该研究结果为深入研究金黄地鼠KCNQ1基因功能奠定了基础。
- 孔德龙潘晓燕秦莹殷玉鹏安培培陈玥唐博李子义
- 关键词：金黄地鼠KCNQ1分子克隆
- 金黄地鼠Kcnq1基因的分子克隆与鉴定以及在多种器官组织中的表达差异分析
- 2012年
- 对金黄地鼠Kcnq1基因进行分子克隆与鉴定以及在多种器官组织的表达差异进行分析,旨在研究Kcnq1基因在地鼠各组织器官中的功能。提取金黄地鼠心脏组织总RNA,根据大鼠Kcnq1的保守序列区域设计引物TK1,用RT-PCR的方法从金黄地鼠心脏组织中扩增出Kcnq1cDNA片段,并且以心脏cDNA片段为模板,将纯化后的cDNA在T4连接酶的作用下与pMD18-T载体特异性连接,转化感受态大肠杆菌DH5α中,筛选重组子并酶切鉴定,将鉴定后的重组子进行DNA测序。提取心、肝、脾、肺、肾各组织总RNA,并反转录,将各组织cDNA做荧光定量检测,检测各组织表达量的差异。结果显示克隆出金黄地鼠Kcnq1基因477bp的部分片段长度,推测出编码的159个氨基酸。与大鼠等物种Kcnq1基因比对,核苷酸和氨基酸序列均具有较高的同源性。荧光定量结果显示,Kcnq1在金黄地鼠心脏中表达量最高,在肺脏和肾脏中均有较高表达,在脾脏中低度表达,在肾脏中基本不表达。该研究结果为深入研究金黄地鼠Kcnq1基因功能奠定了基础。
- 孔德龙潘晓燕秦莹殷玉鹏安培培陈玥唐博李子义
- 关键词：金黄地鼠KCNQ1分子克隆
- 不同激活方法对小鼠卵母细胞孤雌发育及二倍体形成的影响
- 2011年
- 卵母细胞的孤雌激活是研究哺乳动物受精机制和发育机理的有效方法,也是细胞核移植、显微注射受精技术、孤雌胚胎干细胞等研究内容中的重要环节。本试验分别用乙醇、SrCl2、钙离子载体A23187对小鼠卵母细胞进行单独孤雌激活,并分别与6-DMAP联合运用,对小鼠卵母细胞进行联合孤雌激活。结果显示:(1)不同激活剂单独或联合激活,对卵母细胞的激活率有显著影响(P<0.05),SrCl2组的激活率最高(92%～94%);(2)相同激活剂对卵母细胞孤雌囊胚的发育率在单独激活组(SrCl2组,18%)和联合激活组(SrCl2+6-DMA组,53%)中存在显著差异(P<0.05);(3)相同激活剂对卵母细胞二倍体率在单独激活组(钙离子载体A23187组,21%)和联合激活组(钙离子载体A23187+6-DMA组,77%)中均存在显著差异(P<0.05)。结果表明:(1)SrCl2可以对小鼠卵母细胞进行有效的孤雌激活;(2)联合激活法可以显著提高孤雌卵母细胞的囊胚发育率;3、6-DMAP可以抑制第二极体排出,显著提高孤雌激活卵母细胞的二倍体率。
- 赵天闯张鹏陈玥高飞唐博李子义
- 关键词：孤雌激活二倍体小鼠
