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广谱趋化作用抑制剂的体内筛选及其活性鉴定: 2010年; 目的为抗炎药物的研发提供先导肽。方法利用脂多糖(LPS)刺激SD大鼠建立炎症模型,应用噬菌体展示技术经大鼠体内筛选得到阳性噬菌体克隆,经体内回输实验、趋化抑制实验和竞争结合实验鉴定噬菌体克隆的活性,提取生物活性较好的10个阳性噬菌体克隆的DNA进行测序,据此推导插入的氨基酸序列。结果经过三轮体内筛选,目的噬菌体得到了有效富集。对10个趋化抑制效果较好的阳性噬菌体进行测序,共得到5个序列,其中有2个序列出现的频率均为30%。结论利用噬菌体展示技术体内筛选方法得到了抑制趋化作用的相关肽;该相关肽可作为抗炎药物的先导肽。; 黄伦亮孙晗笑李秀英莫雪梅; 关键词：噬菌体展示技术

先天性心脏病相关易感基因的预测性研究被引量：6: 2011年; 目的:应用生物信息学预测先天性心脏病相关易感基因,为先天性心脏病的临床诊断和治疗提供理论依据。方法:通过OMIM数据库获取已知的先天性心脏病相关易感基因。将已知的疾病相关易感基因作为"种子基因",利用蛋白质相互作用网络寻找邻近节点中富集了疾病相关易感基因的"种子基因",并视其邻居基因为候选的疾病相关易感基因。对已知的疾病相关易感基因进行GO、Pathway和Human Phenotype富集分析,并据此注释候选基因;运用文献挖掘法对候选基因进行验证性分析。结果:通过OMIM共获取已知的先天性心脏病相关易感基因28个,发现邻近节点中富集了疾病相关易感基因的"种子基因"4个,得到候选的疾病相关易感基因20个,通过功能富集分析从中预测出新的先天性心脏病易感基因7个。文献挖掘发现这7个基因在心脏发育过程中均起着极其重要的作用。结论:通过生物信息学分析发现7个候选基因与已知的先天性心脏病相关易感基因关系密切,提示该病的发生是多种基因相互作用的结果,为后续深化该病机制研究提供了有效的指导。; 刘毅李秀英莫雪梅张光孙晗笑; 关键词：蛋白质相互作用网络

广谱炎症趋化因子抑制先导物P1肽的活性及功能分析被引量：1: 2011年; 目的初步探讨广谱趋化因子抑制先导物P1肽的活性及功能,为过度炎症反应的负调控提供理论基础。方法 MTT法检测P1肽的细胞毒性后,选择合适的浓度,应用液相芯片技术、钙流实验、RT-PCR和ELISA等方法对P1肽的活性和作用特点进行分析。结果 CXC类的IL-8、IP-10以及CC类的MCP-1、MIP-1β炎症趋化因子的产生量在P1肽的作用下有明显下降,且这两类趋化因子mRNA的表达量均有明显下降,进一步的实验显示P1肽不通过TTP途径降解mRNA;同时较之LPS炎症模型组,P1肽作用下的细胞炎症因子TNF-α的分泌水平有明显下降。结论合成后的P1肽具有良好的生物学活性;P1肽的作用靶点可能存在于炎症因子产生的上游信号通路中,P1肽不仅能从趋化因子mRNA水平降低趋化因子的表达量,同时还可抑制TNF-α的产生,进而发挥炎症抑制作用。; 贾红伟孙晗笑莫雪梅李秀英王磊张光; 关键词：炎症模型 PBMC

一株脂肪酶产生菌的筛选及产酶条件优化研究被引量：7: 2012年; 通过利用溴甲酚紫显色培养基初筛和酶活测定法复筛得到产脂肪酶的一株细菌HP2,经形态学观察和生理生化测定初步鉴定该菌株为不动杆菌属。并对该菌株的摇床培养产酶条件进行了初步研究,采用正交试验对HP2菌株发酵产脂肪酶的条件进行了优化,得到最佳发酵条件为初始pH为7.7,培养温度为35℃,接种量(V/V)为1.5%,发酵周期为48 h,酶活力达到129.7 U/mL。; 欧阳敏孙晗笑莫雪梅李秀英张光; 关键词：脂肪酶不动杆菌属发酵正交设计

人TRIM5α嵌合体蛋白与HIV-1gag蛋白体外分子间相互作用的鉴定被引量：1: 2009年; 目的:表达和纯化人TRIM5α嵌合体蛋白[TRIM5αH(R328-332)],并探讨该蛋白和HIV-1gag间的相互作用。方法:将构建的TRIM5α嵌合体pET28aTRIM5αH(R328-332),转化大肠杆菌BL21(DE3),获得重组表达质粒pETTRIM5αH(R328-332),30℃下经IPTG诱导,该融合蛋白在大肠杆菌BL21(DE3)中表达。获得的重组的蛋白再经过纯化,SDS-PAGE分析重组蛋白,并用免疫共沉淀技术和ELISA等检测重组蛋白与HIV-1gag间的相互作用。结果:构建的重组质粒在大肠杆菌中获得表达,重组TRIM5αH(R328-332)蛋白经纯化复性后,通过免疫共沉淀和ELISA等技术,证明TRIM5αH(R328-332)蛋白能够与HIV-1gag间的相互作用。结论:在大肠杆菌表达系统中成功表达了重组TRIM5αH(R328-332)蛋白,并且证实其在体外与HIV-1gag有结合作用。; 孟祥平李秀英孙晗笑莫雪梅; 关键词：纯化免疫共沉淀 ELISA

SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR检测HIV-1前病毒方法的建立及应用被引量：3: 2010年; 目的建立SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR技术测定HIV-1前病毒载量方法,并以其观察相关病毒进入抑制剂对HIV-1前病毒的作用。方法选择HIV-1的gag和env保守区域设计引物,建立SYBR Green I荧光定量PCR测定HIV-1前病毒载量的体系,并以其观察6μg/ml^6 ng/ml的重组病毒巨噬细胞炎症蛋白(rvMIP)、逆转录酶抑制剂(AZT)、膜融合抑制剂(T-20)、rvMIP+AZT、rvMIP+T-20对HIV-1前病毒载量的影响。结果所建立的荧光定量PCR体系的检测下限为101Copies,其标准曲线的相关系数为0.998 9,斜率为-4.925,截距为35.70;除6ng/ml的rvMIP、AZT、T-20外,三种药物处理后HIV-1前病毒载量均显著减小(P<0.05),并呈质量浓度依赖性;联合用药者前病毒载量显著低于单用rvMIP者(P<0.05),HIV-1前病毒载量rvMIP+T-20(rvMIP+AZT(rvMIP(T-20(AZT。结论本研究建立的SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR检测方法具有灵敏、快速、准确及成本低廉等优点;与T-20或AZT联用可增强rvMIP对HIV-1前病毒的抑制作用。; 莫雪梅闫莉孙晗笑

运用SYBR GreenⅠ荧光实时RT-PCR法检测草莓中甲肝病毒被引量：5: 2010年; 针对甲肝病毒的vp3/vp1壳蛋白区域设计引物,建立SYBR GreenⅠ实时荧光RT-PCR检测甲肝病毒的反应体系。此方法的病毒检测下限达到101TCID50,标准曲线为Ct=-3.052lg(TCID50)+34.57,线形范围101～105TCID50,相关系数0.9961。该方法对甲肝病毒检测特异,与轮状病毒、腺病毒、诺如病毒、星状病毒无交叉反应。针对甲肝病毒标准品检测的批内试验变异系数(CV)为0.85%～1.71%(n=5)、批间试验CV为0.76%～1.98%(n=3)。运用此方法随机检测45份草莓样品,检测出3份阳性样品。该检测方法灵敏、特异、重复性好,可应用于水果和蔬菜中甲肝病毒的快速检测。; 莫雪梅高东微; 关键词：甲肝病毒 SYBR 草莓

噬菌体技术筛选广谱炎症相关趋化因子抑制剂先导物被引量：1: 2010年; 目的:筛选能与炎症相关趋化因子结合的广谱抑制剂先导物。方法:用内毒素刺激外周血单核细胞建立急性炎症模型,以刺激炎症相关趋化因子的产生,利用噬菌体随机12肽库进行高通量筛选得到阳性克隆,并初步分析其体外活性。结果:经过四轮肽库亲和筛选后,获得了一共同短肽(TVVGSGCVLRIQ)。结论:该短肽可有效抑制炎性趋化因子活性,说明该短肽有可能成为一种广谱的炎性趋化因子抑制先导物。; 李琴孙晗笑李秀英莫雪梅张光; 关键词：内毒素噬菌体肽库 PBMC

C25P肽对小鼠的急性毒性及体外致癌作用: 2011年; 目的研究C25P肽对小鼠的急性毒性作用以及体外致癌性,为临床应用提供依据。方法采用最大耐受剂量法(MTD)进行对小鼠的急性毒性试验。对照组小鼠尾静脉注射生理盐水(40ml/kg);用药组小鼠尾静脉注射C25P多肽(3.64g/kg)。给药后连续观察14d。14d处死小鼠,测定血常规及血液生化学指标,并解剖小鼠进行病理组织学检查。并采用染色体畸变试验、细胞转化试验、非锚定依赖性生长试验对C25P多肽进行体外的致癌性评价。结果未出现小鼠死亡,用药组有3只小鼠发生轻微毒性反应;每组小鼠体质量均有增长,各组间的平均增长率无显著差异;所测血液生化指标中,用药组GPT(谷丙转氨酶)值比对照组呈显著性升高(P<0.05);用药组ALP(碱性磷酸酶)值比对照组呈显著性降低(P<0.05);大部分小鼠器官正常,发生毒性反应的3只小鼠的肺、脾、肝脏出现病变。C25P多肽的染色体畸变试验、细胞转化试验、非锚定依赖性生长试验均呈阴性。结论 C25P肽对受试动物无明显急性毒性作用以及无明显致癌性作用,属于低毒类药物。; 莫雪梅孙晗笑汤曼莉; 关键词：急性毒性致癌性安全性

荧光定量PCR法研究重组病毒巨噬细胞炎症蛋白联合用药体外抗HIV-1的作用: 2010年; 目的建立荧光定量PCR技术测定HIV-1病毒载量的方法 ,并用于研究重组病毒巨噬细胞炎症蛋白(rvMIP)联合用药前后的病毒载量变化。方法选择HIV-1的gag和env保守区域设计引物,建立荧光定量PCR测定HIV-1病毒载量的体系。分别设置rvMIP、AZT、T-20、rvMIP+AZT、rvMIP+T-20 5个不同用药组,运用荧光定量PCR法检测用药后各组病毒载量的变化。结果所建立的荧光定量PCR体系的检测下限为101拷贝,其标准曲线的相关系数为0.997 4,斜率为-2.524,截距为29.716;除了浓度6 ng.mL-1的rvMIP组、AZT组、T-20组外,各用药组病毒载量值与阳性对照均有差别,且随药物浓度增加,病毒载量逐渐减小。各相同浓度用药组病毒载量相比,rvMIP+T-20组(rvMIP+AZT组(rvMIP组(T-20组(AZT组。结论所建立的荧光定量PCR检测体系可靠;rvMIP与T-20或AZT联用可以增强rvMIP对HIV-1病毒的抑制作用。; 孙晗笑莫雪梅闫莉李秀英张光; 关键词：荧光定量PCR HIV-1病毒载量

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