陕西省自然科学基金(2004C2-36)
- 作品数：4 被引量：8H指数：2
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- 相关机构：第四军医大学西京医院第四军医大学更多>>
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- 人MUC1重复序列与GM—CSF融合表达的重组卡介苗疫苗对乳腺癌生长的抑制作用被引量：3
- 2011年
- 目的构建一种新的基于人MUCl重复序列与GM—CSF融合表达的重组卡介苗疫苗，并观察其对乳腺癌生长的预防性抑制作用。方法分步克隆人MUC1重复序列1、4、8串联体基因（MVNTR1／4／8），构建人MUC1重复序列串联体与GM—CSF基因融合的大肠一分枝杆菌表达载体pDE22-MVNTR1／4／8-CSF，酶切鉴定及序列分析后，将构建的穿梭质粒电穿孔转染卡介苗，构建重组卡介苗疫苗rBCG．MVNTR1／4／8-CSF，SDS—PAGE和Western Blot检测MVNTR与GM-CSF融合蛋白的表达。在hu。PBL．SCID鼠模型评价其对乳腺癌生长的抑制作用，并通过免疫组化染色检测其免疫诱导的T细胞反应。结果SDS—PAGE和Western Blot结果说明：人MUC1重复序列与GM．CSF基因融合的重组卡介苗疫苗分别有MVNTR1／4／8与GM—CSF融合蛋白的表达。rBCG—MVNTR4／8-CSF免疫组在MCF-7乳腺癌细胞接种42d后，肿瘤成瘤率分别为37．5％和25％，而PBS和BCG—pDE22对照组均为100％（P〈0．05）。与对照组相比，rBCG—MVNTR4／8-CSF预防接种显著抑制MCF-7乳腺癌细胞生长（P〈0．01），且生长抑制作用随着VNTR的增加而增强。肿瘤细胞接种70d后，rBCG—MVNTR4／8-CSF组小鼠生存率分别为75％和87．5％，而BCG—pDE22对照组的生存率为12．5％（P〈0．05）。rBCG—MVNTR4／8．CSF免疫组瘤体组织中可见CD4’和CD8’T淋巴细胞浸润。结论重组卡介苗疫苗rBCG—MVNTR4／8-CSF预防接种可显著抑制乳腺癌生长。
- 袁时芳师长宏晏伟王廷韩苇王岭张英起窦科峰
- 关键词：卡介苗CA-15-3抗原
- 人多形上皮黏蛋白与巨噬细胞集落刺激因子基因融合构建双基因多表位抗原的真核共表达质粒(英文)
- 2008年
- 背景:一些实验已经证明在同一载体上构建含多个基因的共表达载体,可提高转染和表达效率。目的:利用多形上皮黏蛋白(polymorphic epithelial mucin,MUC1)多肽骨架中含有许多连续重复系列,构建人MUC1重复序列串联体基因与巨噬细胞集落刺激因子(Granulocyte macrophage colony stimulating factor,GM-CSF)基因重组的真核共表达质粒pcDNA3.1(+)-MUC1-GM-CSF,并观察重组质粒在COS-7细胞中的表达。设计、时间及地点:基因重组体设计实验,于2005-09/2006-12在解放军第四军医大学动物中心实验室完成。材料:真核表达载体pcDNA3.1(+)由英国Taylor-Papadimitriou教授惠赠,pGEM-3zf(-)-GM-CSF质粒、COS-7细胞、pUC18载体及E.coli DH5α为自备,雌性BALB/c小鼠由解放军第四军医大学实验动物中心提供。方法:将信号肽及编码MUC1基因片段合成、合成的片断经退火等方法获得MUC1基因重复序列串联体,酶切鉴定及序列分析后,与GM-CSF基因克隆入pcDNA3.1(+)真核表达载体中,构建真核共表达质粒pcDNA3.1(+)-MUC1-GM-CSF。以重组质粒转染COS-7细胞。主要观察指标:通过间接免疫荧光法及ELISA检测目的基因的表达。结果:酶切鉴定及序列分析表明,重组质粒含有人MUC1重复序列串联体与GM-CSF的融合基因,在COS-7细胞中可检测到MUC1表达,重组质粒免疫小鼠可诱导产生抗GM-CSF抗体。结论:成功构建了人MUC1基因重复序列串联体与免疫佐剂GM-CSF基因重组成为双基因多表位抗原的真核共表达质粒。
- 袁时芳师长宏晏伟李南林吕勇刚王廷王岭张英起
- 关键词：基因工程COS-7细胞
- MUC1基因疫苗和GM-CSF对小鼠的细胞免疫和体液免疫应答被引量：4
- 2007年
- 目的:观察MUC1基因疫苗和GM-CSF共免疫对小鼠特异性细胞免疫和抗体水平的影响.方法:采用股四头肌肌肉注射,将构建的MUC1基因疫苗pcDNA3.1-MUC1免疫雌性Balb/c小鼠,每3wk1次,共3次.MUC1基因加GM-CSF组于每次基因免疫后1,3,5d,皮下注射GM-CSF100μL.最后1次基因免疫后第3周接种表达MUC1的EMT6小鼠乳腺癌细胞.2wk后观察、记录肿瘤的生长情况.流式细胞仪检测外周血CD4+和CD8+淋巴细胞亚群的百分比和比值.ELISA方法检测小鼠血清MUC1特异性抗体的水平.4h51Cr释放法检测小鼠脾特异性CTL的杀伤活性.结果:淋巴细胞亚群:与pcDNA3.1对照组相比,MUC1基因疫苗预防组的CD8+T淋巴细胞升高,差异有统计学意义(P<0.01),CD4+T淋巴细胞升高,差别无统计学意义;加GM-CSF佐剂预防组与单独MUC1疫苗预防组相比,CD4+T淋巴细胞升高,差异有统计学意义(P<0.01),CD8+T淋巴细胞升高差别无统计学意义.小鼠血清MUC1抗体水平:与对照组相比,MUC1基因疫苗预防组抗体水平升高,差异有统计学意义(P<0.05);加佐剂组与预防组相比,抗体水平升高但差别无统计学意义.在不同效靶比时,MUC1基因疫苗加GM-CSF组与单独MUC1基因免疫组相比较,特异性CTL对EMT6靶细胞的杀伤率差异显著(P<0.05).结论:MUC1基因疫苗可诱导小鼠产生特异性CD8+T淋巴细胞及体液免疫应答,GM-CSF对小鼠CD4+T淋巴细胞具有一定的调节作用.
- 袁时芳师长宏姚青李南林王廷王岭张英起
- 关键词：MUC1粘蛋白基因疫苗体液免疫
- 人MUC1与GM-CSF基因融合真核表达质粒的构建与表达被引量：1
- 2007年
- 目的:构建人MUC1重复序列串联体基因与GM-CSF基因重组的真核共表达质粒pcDNA3.1(+)-MUC1-GM-CSF,并观察重组质粒在COS-7细胞中的表达。方法:将信号肽及编码MUC1基因片段合成、合成的片段经退火等方法获得MUC1基因重复序列串联体,酶切鉴定及序列分析后,与GM-CSF基因克隆入pcDNA3.1(+)真核表达载体中,构建真核共表达质粒pcDNA3.1(+)-MUC1-GM-CSF。以重组质粒转染COS-7细胞,通过间接免疫荧光法及ELISA检测目的基因的表达。结果:酶切鉴定及序列分析表明,重组质粒含有人MUC1重复序列串联体与GM-CSF的融合基因,在COS-7细胞中可检测到MUC1表达,重组质粒免疫小鼠可诱导产生抗GM-CSF抗体。结论:人MUC1重复序列串联体与GM-CSF基因重组的真核共表达质粒的成功构建,为对其免疫原性、生物学特性及免疫治疗的进一步研究奠定了基础。
- 袁时芳师长宏晏伟姚青李南林王廷王岭张英起
- 关键词：基因工程MUC1GM-CSFCOS-7细胞
