河北省自然科学基金(C2010001804) 作品数:4 被引量:9 H指数:2 相关作者: 冯雪 张一名 孙艳香 贾永红 赵学良 更多>> 相关机构: 廊坊师范学院 吉林农业大学 南京农业大学 更多>> 发文基金: 河北省自然科学基金 河北省高等学校科学技术研究指导项目 博士科研启动基金 更多>> 相关领域: 生物学 农业科学 更多>>
应用高效液相色谱-二极管阵列检测器优化棉花体内多胺的测定方法 2016年 应用高效液相色谱-二极管阵列检测器法(HPLC-DAD)对棉花体内多胺测定时的流动相比例及流速、多胺全光谱信息等进行分析,重点比较2种常用检测波长230、254 nm下的测定参数。最终确定检测波长为230 nm、流动相体积比V_(甲醇)∶V_水=80∶20、流速为0.6 m L/min为最佳色谱条件。该方法有较好的准确度、灵敏度,腐胺、亚精胺、精胺的回收率分别为98.58%、96.98%、99.62%,且非常稳定。以此色谱条件为基础测定棉花幼苗不同组织中多胺水平发现,叶片中3种多胺的含量明显高于根、茎组织;此外,不同组织内亚精胺含量最高。 张一名 刘玲玲 谢韫泽 孙艳香 冯雪 贾永红关键词:棉花 多胺含量 高效液相色谱 二极管阵列检测器 棉花精氨琥珀酸合成酶基因GhASS1的克隆及表达分析 被引量:6 2016年 【目的】克隆棉花精氨琥珀酸合成酶基因Gh ASS1的c DNA序列,并利用原核表达系统高效表达融合蛋白,检测融合蛋白的精氨琥珀酸合成酶活性及其表达对工程菌生长、耐盐能力及与游离L-瓜氨酸(L-Cit)和L-精氨酸(L-Arg)含量的影响,为解析该基因的功能及作用机制奠定基础。【方法】以拟南芥推断的精氨琥珀酸合成酶c DNA序列作为探针,利用电子克隆和RT-PCR技术,从棉花幼叶中获得c DNA片段,T/A克隆测序后得其序列信息,利用生物信息学软件分析其DNA结构、蛋白质结构、功能域和同源性,并构建系统进化树。利用q RT-PCR检测其在盐胁迫下的表达模式;将Gh ASS1的开放阅读框连接到原核表达载体p Cold-TF上,构建融合表达载体p Cold-Gh ASS1,转化到大肠杆菌Rosetta(DE3)plys S中进行IPTG诱导表达,利用SDS-PAGE法测定表达产物分子量,焦磷酸荧光法测定酶活性和比活力,HPLC法测定工程菌中L-Cit和L-Arg的含量,对比不同温度和不同Na Cl浓度下工程菌与对照菌的生长速度及其体内L-Cit、L-Arg含量及L-Arg/L-Cit。【结果】棉花Gh ASS1存在于D基因组的第1染色体上,由10个外显子和9个内含子构成,其c DNA全长序列共1 584 bp,其中5′非翻译区22 bp,开放阅读框1 485 bp,3′端非翻译区77 bp,编码产物由494个氨基酸组成,推断分子量为54 k D,等电点6.74;序列比对分析表明Gh ASS1与大肠杆菌、酵母和拟南芥中同源蛋白序列一致性分别为21.81%、41.1%和78.5%,且具有典型的精氨琥珀酸合成酶结构模序;系统进化分析显示Gh ASS1与番茄、马铃薯和烟草中同源蛋白亲缘关系最近,而与云杉、卷柏中同源蛋白亲缘关系最远;盐胁迫可上调叶片中Gh ASS1的表达,1 d时达到峰值,随后逐渐下降,推测Gh ASS1参与棉花对盐胁迫的早期响应。表达载体p Cold-Gh ASS1在工程菌中表达的融合蛋白分子量约108 k D,与预期相符,在体外具有精氨琥珀酸合成酶活性;与 王慧飞 孙艳香 冯雪 张一名 杨江涛 马梅芳 陈光关键词:棉花 REAL-TIME PCR 植物“液泡膜”H^+ -PPase的功能与应用 被引量:2 2014年 H+-PPase是一类将焦磷酸水解与质子转运相耦联的焦磷酸酶。在植物中,主要定位在液泡膜,少量定位于细胞质膜,除具有酸化液泡、有助于有毒离子的液泡区室化功能外,还有调控质膜H+-ATPase介导的根际酸化,促进氮、磷吸收的功能。本文就植物"液泡膜"H+-PPase的定位、结构与性质、调控与作用机制及其在基因工程中的利用等方面展开论述,旨在使研究者系统地了解"液泡膜"H+-PPase的研究进展,为未来通过调控H+-PPase的表达来改进植物的生长发育、抗盐耐旱能力、氮、磷肥的利用效率等生产应用提供参考。 孙艳香 冯雪 贾永红 张一名 赵学良关键词:质子泵 肥料利用率 含GmNHX1和LcVP1双价基因植物表达载体构建与转基因棉花的获得 被引量:1 2014年 应用DNA重组技术将编码大豆液泡膜Na+/H+反向转运蛋白GmNHX1和百脉根液泡膜H+-PPase LcVP1的开放阅读框片段同时构建在pCambia1301载体中,形成p1301-GmNHX1-LcVP1双价耐盐基因植物表达载体。以Coker 312棉花品种的胚性愈伤组织为外植体,采用根癌农杆菌介导法将其转入棉花中,并利用潮霉素筛选获得抗性植株。对抗性植株的T1幼苗进行分子和生理指标检测,表明外源基因已成功整合到棉花基因组中,并不同程度地提高了转基因株系耐盐能力。 冯雪 贾永红 郭红珍 张一名 赵学良 孙艳香关键词:棉花 耐盐