国家自然科学基金(30901084)
- 作品数：5 被引量：8H指数：2
- 相关作者：文心田杨恒黄小波曹三杰张鑫淼更多>>
- 相关机构：四川农业大学昆明理工大学四川省动物疫病预防控制中心更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家教育部博士点基金长江学者和创新团队发展计划更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 猪传染性胃肠炎病毒S基因B、C抗原位点的原核表达与免疫活性
- 本研究开展了猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)S基因的B、C抗原位点区域的原核表达与免疫活性研究。根据S基因的B、C抗原位点区序列设计一对引物,从S基因克隆质粒19T-S1扩增了含B、C抗原位点的基因片段(以SBC表示)。将...
- 汪洋阳黄小波曹三杰文心田张鑫淼段素芬阳酉萍张丹张小会
- 关键词：猪传染性胃肠炎病毒S基因原核表达免疫原性
- 文献传递
- 携带猪流行性腹泻病毒S基因的减毒沙门氏菌的构建与鉴定
- 本研究以RT-PCR扩增猪流行性腹泻病毒SC-L株的S基因抗原区域(简称S1,1-2367bp,编码S蛋白N末端1-789氨基酸位点),插入pMD19-T载体,酶切并回收目的片段插入双启动子真核表达载体pVAXD中,构建...
- 梁恩涛廖晓丹文心田黄小波曹三杰阳酉萍段素芬张丹张小会
- 关键词：猪流行性腹泻病毒S基因减毒沙门氏菌
- 猪传染性胃肠炎病毒S基因B、C抗原位点的原核表达与免疫活性
- 本研究开展了猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)S基因的B、C抗原位点区域的原核表达与免疫活性研究。根据S基因的B、C抗原位点区序列设计一对引物,从S基因克隆质粒19T-S1扩增了含B、C抗原位点的基因片段(以SBC表示)。将...
- 汪洋阳黄小波曹三杰文心田张鑫淼段素芬阳酉萍张丹张小会
- 关键词：猪传染性胃肠炎病毒S基因原核表达免疫原性
- 携带猪传染性胃肠炎病毒S/N融合双基因的减毒沙门氏菌的构建与鉴定被引量：1
- 2012年
- 旨在构建携带猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)S/N融合双基因的减毒沙门氏菌,并鉴定该疫苗菌株的生物学特性,为开展TGEV口服免疫研究奠定材料基础。采用PCR方法从克隆质粒19T-S和19T-N中分别扩增了TGEV的S基因(含主要抗原位点,2.1kb)和N基因(1.2kb),将S基因和N基因插入pVAX1载体,构建携带S/N融合双基因的真核表达质粒pVAX-S/N。将pVAX-S/N电转化减毒沙门氏菌SL7207,筛选获得重组菌株SL7207(pVAX-S/N),并对重组菌株SL7207(pVAX-S/N)的体外稳定性、目的基因在体内的转录、口服接种小鼠的安全性及在体内稳定性等特性进行了鉴定。结果表明,真核质粒pVAX-S/N构建成功,该质粒转染COS7中能表达2个目的蛋白,重组菌SL7207(pVAX-S/N)在Kan+抗性下体外培养稳定性好,口服接种小鼠3d可从回肠组织检测到目的基因的转录,以0.5×109、1×109和2×109 CFU口服对小鼠均具有安全性,重组菌在接种小鼠的肝、脾于4周左右逐渐被机体清除。结果表明成功构建TGEVS/N双基因疫苗SL7207(pVAX-S/N),该疫苗具有良好的稳定性与安全性等特点,为开展TGEV口服免疫研究奠定了基础。
- 黄小波李春松杨恒曹三杰文心田廖晓丹张鑫淼
- 关键词：减毒沙门氏菌猪传染性胃肠炎病毒生物学特性
- 减毒沙门氏菌递呈的TGEV S/N双启动子基因疫苗的口服免疫规律
- 以小鼠为动物模型研究了重组减毒沙门氏菌疫苗SL7207(pVAXD-N-Sa)的口服免疫规律。将菌株SL7207(pVAXD-N-Sa)及对照组SL7207(pVAX-S)、SL7207(pVAX-N)、SL7207(p...
- 张鑫淼文心田黄小波曹三杰汪洋阳张丹段素芬阳酉萍张小会
- 关键词：减毒沙门氏菌口服免疫
- 减毒沙门氏菌递呈的TGEV S/N双启动子基因疫苗的口服免疫规律
- 以小鼠为动物模型研究了重组减毒沙门氏菌疫苗SL7207(pVAXD-N-Sa)的口服免疫规律。将菌株SL7207(pVAXD-N-Sa)及对照组SL7207(pVAX-S)、SL7207(pVAX-N)、SL7207(p...
- 张鑫淼文心田黄小波曹三杰汪洋阳张丹段素芬阳酉萍张小会
- 关键词：减毒沙门氏菌口服免疫
- 文献传递
- 减毒沙门菌递呈的猪传染性胃肠炎病毒S基因与猪IL-6基因双启动子DNA疫苗的构建被引量：1
- 2012年
- 从猪传染性胃肠炎病毒克隆质粒pMD19T-S中扩增了2.1kb的S基因片段(含完整的A、B、C、D 4个抗原位点序列),以RT-PCR从猪外周血淋巴细胞中扩增了猪白细胞介素6(IL-6)(658bp),插入同一双启动子真核表达载体pVAXD的2个多克隆位点,构建了共表达S与IL-6基因的双启动子表达质粒pVAXD-S-IL-6,转染COS7细胞进行转录和表达鉴定。将质粒pVAXD-S-IL-6电转化减毒鼠伤寒沙门菌SL7207,筛选获得重组菌株SL7207(pVAXD-S-IL-6),并对重组菌株SL7207(pVAXD-S-IL-6)的体外稳定性和口服小鼠的安全性进行了鉴定。结果表明该双启动子真核表达质粒pVAXD-S-IL-6构建成功,RT-PCR检测到转染的COS-7细胞中2个目的基因的转录,间接免疫荧光试验结果显示表达产物可与猪抗猪传染性胃肠炎病毒血清发生特异性反应。重组菌株SL7207(pVAXD-S-IL-6)在含卡那霉素的抗性培养基中稳定性好,以1×109 CFU灌胃接种小鼠具有良好的安全性。本研究构建了猪传染性胃肠炎病毒的新型口服疫苗株SL7207(pVAXD-S-IL-6),为开展其免疫原性评价奠定了基础。
- 黄小波李春松曹三杰文心田张鑫淼杨恒张亮
- 关键词：猪传染性胃肠炎病毒IL-6基因减毒鼠伤寒沙门菌
- 猪传染性胃肠炎病毒S基因B、C位点的克隆与表达及间接ELISA方法的建立被引量：2
- 2015年
- 针对猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)S基因B、C抗原位点编码基因片段(SBC,下同)设计合成1对引物,用PCR方法扩增SBC基因,将该基因片段定向插入到原核表达载体p ET-32a(+)中,构建原核表达载体p ET-32a-SBC。阳性质粒转化宿主菌BL21(DE3),在IPTG的诱导下表达大小约38 k D的蛋白,重组蛋白以包涵体的形式存在。Western blot分析表明,表达产物具有良好的免疫学活性。以纯化的表达产物作为诊断抗原建立了检测TGEV抗体的间接ELISA(TGEV SBC-ELISA)方法。表明建立的间接ELISA方法特异性和重复性良好,敏感性比血清中和试验高,可用于TGEV的检疫和流行病学调查。
- 尹杰杨恒曹三杰黄小波文心田李洁萍余正强周军
- 关键词：猪传染性胃肠炎病毒
- 携带猪流行性腹泻病毒S基因的减毒沙门氏菌的构建与鉴定
- 本研究以RT-PCR扩增猪流行性腹泻病毒SC-L株的S基因抗原区域(简称S1,1-2367bp,编码S蛋白N末端1-789氨基酸位点),插入pMD19-T载体,酶切并回收目的片段插入双启动子真核表达载体pVAXD中,构建...
- 梁恩涛廖晓丹文心田黄小波曹三杰阳酉萍段素芬张丹张小会
- 关键词：猪流行性腹泻病毒S基因减毒沙门氏菌
- 文献传递
- 猪传染性胃肠炎病毒S-N融合双基因疫苗的构建及其免疫原性分析被引量：3
- 2012年
- 为了构建TGEV S-N融合双基因疫苗并分析其免疫原性,从S、N基因克隆质粒中以PCR扩增了S基因(2.1kb,含A、B、C、D抗原位点)和N基因(1.2kb),将S基因插入pVAX1载体构建了pVAX-S质粒,再将N基因插入pVAX-S中S基因末端,构建了融合表达S、N双基因的重组质粒pVAX-S-N,将pVAX-S-N转染COS7细胞以免疫荧光试验进行S、N双基因的表达鉴定。用纯化的pVAX-S-N和作为对照的pVAX-S、pVAX1、PBS免疫BALB/c小鼠,共免疫3次,分别测定免疫后第0、14、28、42天的小鼠血清IgG抗体,测定免疫后第42天小鼠外周血T淋巴细胞亚群(CD3+、CD4+、CD8+)的数量。结果,融合质粒pVAX-S-N可在COS7细胞特异性表达S、N两个蛋白,pVAX-S-N免疫小鼠后第14天即可诱导产生抗TGEV的特异性IgG,但pVAX-S-N诱导的抗体水平一直低于pVAX-S诱导的抗体水平,在免疫后第42天差异极显著(P<0.01);pVAX-S-N可激发小鼠产生细胞免疫应答,但pVAX-S-N组的CD3+、CD4+、CD8+数量均低于pVAX-S免疫组。研究结果表明,融合双基因疫苗pVAX-S-N具有免疫原性,但免疫效果却不如单基因疫苗pVAX-S的理想。
- 黄小波杨恒曹三杰文心田李春松廖晓丹张鑫淼
- 关键词：猪传染性胃肠炎病毒DNA疫苗免疫原性
