广西壮族自治区自然科学基金(2010GXNSFD013030)
- 作品数：9 被引量：34H指数：4
- 相关作者：王青艳黄日波申乃坤廖思明秦艳更多>>
- 相关机构：广西科学院广西大学南京工业大学更多>>
- 发文基金：广西壮族自治区自然科学基金广西壮族自治区科学研究与技术开发计划南宁市科学研究与技术开发计划项目更多>>
- 相关领域：生物学轻工技术与工程农业科学更多>>
- 原生质体复合诱变选育耐高温高产乙醇酵母菌株被引量：3
- 2011年
- 以酿酒酵母Ygx-5为出发菌株,对其原生质体进行紫外线(UV)与亚硝基胍(NTG)复合诱变,经初筛和复筛,选育出1株耐高温、高产乙醇菌株U-N2。在37℃培养条件下,菌株U-N2产乙醇浓度最高可达16.32%vol,比原菌株提高20.44%,比只用紫外线诱变后的菌株提高8.04%,比只用亚硝基胍诱变后的菌株提高6.27%。经过20次传代培养,乙醇产量稳定。
- 申乃坤王青艳秦艳王成华廖思明朱婧黄日波
- 关键词：燃料乙醇原生质体亚硝基胍复合诱变
- 现代化沼气产业在解决农村生态、环境、能源中的地位被引量：1
- 2015年
- 本文从分析我国农村的发展与生态、环境的关系出发,探讨现代化沼气产业在综合治理上述问题中的作用和地位。认为突破农村面临的环境、生态、能源等难题的主线是发展大规模、现代化的沼气产业,包括建立沼气生产、净化、输送和利用的现代化网络,最大程度地利用饲养业废弃物、农作物秸秆、林业下脚料、生活垃圾和污水等资源生产沼气。以沼气产业为主线,使我国农村的发展和生态、环境的保护进入良性循环。
- 杜奇石曾军庞浩黄日波
- 关键词：沼气产业生物质能源
- 2种不同形态不依赖Ca^(2+) α-淀粉酶的纯化与表征被引量：2
- 2012年
- 纯化表征了枯草芽胞杆菌Bacillus subtilis CN7产生的2种不同形态的不依赖Ca2+的α-淀粉酶,对其酶解产物进行了高效液相色谱(HPLC)分析。结果表明:通过加热除杂、超滤、(NH4)2SO4沉淀和分子筛层析,一次性获得了纯化倍数提高36倍的电泳纯成熟肽形式α-淀粉酶Amy7B和提高75倍的截短体形式α-淀粉酶Amy7S;Amy7B和Amy7S的最适pH为6.5,最适温度为65℃,酶活性均不依赖于乙二胺四乙酸(EDTA)和Ca2+;酶解产物主要由葡萄糖和麦芽糖组成。Amy7B的相对分子质量为6.7×104,半衰期温度为59.6℃,比活力为(905.99±96.52)U/mg。与之相比,Amy7S的相对分子质量小约2.0×104(为4.7×104),半衰期温度高2.7℃(为62.3℃),比活力高1.05倍(达到(1 853.87±75.61)U/mg)。
- 王成华申乃坤秦艳朱婧王青艳何冰芳黄日波
- 关键词：耐酸淀粉酶枯草芽胞杆菌水解产物
- 渗透压诱导表达重组Clostridium thermosulfurogenes β-淀粉酶基因被引量：5
- 2011年
- 以热硫梭菌Clostridium thermosulfurogenes基因组为模板,PCR扩增出β-淀粉酶基因;将该基因克隆到pET-22b(+)载体上,转入大肠杆菌BL21-SI,采用NaCl形成的高渗透压诱导表达。研究了不同诱导条件对重组菌产β-淀粉酶的影响,结果以菌体密度达到OD600为0.6,诱导剂NaCl浓度为0.6 mol/L,诱导温度为35℃最佳。重组菌以LBON为培养基分批发酵时,由于营养限制,菌体密度OD600仅为4.60,β-淀粉酶活力为118U/mL。采用pH-Stat分批补料发酵时,在菌体密度仅是分批发酵的2.35倍的条件下,得到6.12倍的产酶量,酶活力达722U/mL。重组β-淀粉酶70℃水解可溶性淀粉3h的麦芽糖转化率为62.2%,高于大麦β-淀粉酶的转化率。
- 蒙健宗梁莲华周礼芹罗兆飞王青艳
- 关键词：Β-淀粉酶
- 碱性α-淀粉酶基因在巨大芽孢杆菌中的表达及酶学性质研究被引量：6
- 2011年
- 将已克隆的碱性α-淀粉酶基因信号肽编码序列去除,用PCR的方法加入酶切位点,然后与表达载体pHIS1525连接转化大肠杆菌DH5α,筛选出阳性转化子DH5α-pHIS1525-JH,并提取质粒进一步转化巨大芽孢杆菌YYBm1原生质体,获得基因工程菌YYBm1-pHIS1525-JH。SDS-PAGE分析表明该基因在巨大芽孢杆菌中得到了有效表达。酶学性质研究表明,该酶的最适温度与pH值分别为60℃与pH8.5,在pH7.0-10.5之间具有较好的稳定性,Km值为1.94 mg/mL,酶活力可达2 516.5 U。
- 金辉廖思明王青艳刘筱梦黄日波
- 关键词：巨大芽孢杆菌基因表达酶学性质
- 一株酸性糖化酶的分离纯化及酶学性质研究被引量：2
- 2012年
- 从土壤中筛选得到一株产酸性糖化酶的黑曲霉ASP-S21，粗酶液通过（NH4）2s04沉淀、Sepharose HP阴离子交换层析、SephacrylS-200层析柱分离纯化，SDS-PAGE电泳测定其分子量为120kDa。该酶最适作用温度为65℃；酶的最适反应pH值为4．0；在pH2．2-7．6之间，具有较好的酸稳定性；酶的Km值为0．94mg／mL，Vmax=142．43mol（Glu）／min-L。Cu2＋和Co2＋对酶活有较强的促进作用，10mM的Cu2镟酶活力提高到129％，Fe^3＋对酶催化活力抑制作用较强。该酶且具有部分降解生淀粉的能力，在pH4．0，50℃反应1h，生淀粉酶活力为0．39U，RDA值为4．57％。得到的黑曲霉ASP-S21酸性糖化酶，产生的糖化酶活力高、耐酸稳定性好，酶争陛质符合淀粉糖化工业化过程中对酶的要求，具有良好的研究前景。
- 朱婧王青艳廖思明秦艳申乃坤黄日波
- 关键词：酸性糖化酶黑曲霉分离纯化
- 耐酸耐温α-淀粉酶基因在大肠杆菌中的功能表达
- 2012年
- 兼顾大肠杆菌与枯草芽孢杆菌密码子偏好性,优化获得了1个耐酸耐温淀粉酶的基因amyCN1,并将其在大肠杆菌中实现了功能表达。纯化后的重组α-淀粉酶(AMY1)表征结果表明:在最适pH 5.5和最适温度75℃条件下表观米氏常数(Km)值和催化效率(kcat/Km)值分别为20.93 g/L和98.20 L/(g.s);低浓度的Co2+(1 mmol/L)可以提高30%的淀粉酶活力,Mn2+抑制了大部分活力,包括Ca2+在内的其他金属离子影响不显著;高浓度的EDTA(≥50 mmol/L)抑制其活力;生物信息学分析表明,AMY1具有α-淀粉酶家族典型的3-结构域分布,具有1个Ca2+结合位点和5个Zn2+结合位点,活性中心催化氨基酸残基D198和E222位于(β/α)8桶中β折叠片C端一侧。AMY1优良的低pH耐受性和耐温性,有助于木薯淀粉生产燃料乙醇工业液化与糖化同步发酵工艺的实现。
- 王成华王青艳熊伍平廖思明何冰芳黄日波
- 关键词：淀粉酶耐酸耐温
- 一个外切菊粉酶基因的克隆表达及酶学性质被引量：5
- 2013年
- 从马克斯克鲁维酵母(Kluyveromyces marxianus)DSM 5418中克隆出外切菊粉酶(INU)的成熟肽编码区域,在毕赤酵母(Pichia pastoris)GS115中实现了高效分泌表达,体积酶活力达到15.27 U/mL,进一步对重组酶进行了纯化与表征。经过(NH4)2SO4沉淀、透析和分子筛过滤后,得到了纯度大于95%的纯化重组酶,SDS-PAGE分析发现INU的表观相对分子质量为9.0×104,大于理论预测值6.0×104。纯化酶液的表征结果表明,INU的最适温度和最适pH分别为55℃和5.0,在此条件下INU对菊粉的Km值和比酶活分别为1.90 mmol/L和433.86 U/mg,对蔗糖的Km值和比酶活分别为27.81 mmol/L和1 249.49 U/mg,I/S值为0.34;HPLC分析表明,INU酶解菊粉的产物由果糖和葡萄糖组成;金属离子Mn2+、Fe3+、K+和Co2+对酶有促进作用,而Zn2+、Cu2+、Ni2+、SDS和EDTA对酶活力有不同程度的抑制作用。
- 熊伍平王成华陆雁王青艳申乃坤黄日波
- 关键词：菊粉酶马克斯克鲁维酵母毕赤酵母
- 枯草芽孢杆菌高效转化及其转化子验证方法被引量：10
- 2012年
- 用构建好的重组质粒转化枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)WB600感受态细胞,进行不同时间预培养后,涂布于抗生素平板培养,研究一种更高效的转化方法。用载体与外源片段的连接产物转化WB600感受态细胞,进行最佳预培养时间培养后,涂布于抗生素平板培养,培养得到的转化子用PCR快速验证和双酶切鉴定,研究一种转化子的快速验证方法。
- 陆雁王青艳朱绮霞秦艳申乃坤廖思明谢能中黄日波
- 关键词：枯草芽孢杆菌转化率感受态细胞
