福建省自然科学基金(C0410009)
- 作品数：8 被引量：29H指数：4
- 相关作者：林琳刘燕雅胡长浩司圣乾陈彦更多>>
- 相关机构：福建师范大学更多>>
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- 相关领域：生物学轻工技术与工程化学工程更多>>
- K55R与ep8叠加突变对扩展青霉脂肪酶热稳定性的改善被引量：9
- 2007年
- 利用重叠延伸PCR对扩展青霉脂肪酶(PEL)基因进行体外定点突变,构建了K55R与随机突变体ep8叠加突变的重组质粒pAO815-ep8-K55R。将该质粒电转化引入毕赤酵母(Pichia pastoris)GS115,进行异源表达。实验结果表明:该叠加突变体在毕赤酵母中获得了活性表达,得到表达产物脂肪酶PEL-ep8-K55R-GS。其表达量为508u/mL,分别约为野生型脂肪酶PEL-GS(627u/mL)的81%,随机突变脂肪酶PEL-ep8-GS(924u/mL)的55%;其比活力为2309.1u/mg,与随机突变脂肪酶PEL-ep8-GS和野生型脂肪酶PEL-GS的相仿。叠加突变脂肪酶PEL-ep8-K55R-GS的最适作用温度为37℃,与野生型脂肪酶PEL-GS和随机突变脂肪酶PEL-ep8-GS一致;其Tm值为41.0℃,比野生型脂肪酶PEL-GS提高了2.3℃,比随机突变脂肪酶PEL-ep8-GS提高了0.8℃。表明叠加突变脂肪酶PEL-ep8-K55R-GS的热稳定性有了进一步的提高。
- 蔡少丽林俊涵王彩梅林琳
- 关键词：扩展青霉脂肪酶叠加突变热稳定性
- 扩展青霉脂肪酶ep8与R182K叠加突变体的构建被引量：3
- 2007年
- 利用重叠延伸PCR法对扩展青霉碱性脂肪酶(PEL)基因进行体外定点突变,并将含突变基因的重组质粒pAO815-ep8-R182K在毕赤酵母(Pichiapastoris)GS115中进行表达。叠加突变体PEL-ep8-R182K表达产物与野生型PEL、PEL-ep8比较实验表明:叠加突变体表达蛋白PEL-ep8-R182K最适反应温度与野生型PEL、PEL-ep8一致,均为40℃;热稳定性与野生型相似,比PEL-ep8降低2.25℃。但是,在比活上,PEL-ep8-R182K与PEL-ep8、野生型PEL相比,其比酶活分别提高了14.03%和3.86%。
- 王彩梅蔡少丽吴义真林琳
- 关键词：扩展青霉脂肪酶叠加突变最适温度热稳定性
- 冷藏牛奶中脂肪酶产生菌的分离
- 本文从福建农林大学及康利达乳品有限公司采集牛奶样品，并将其置于4℃预处理一周，让耐冷菌成为优势菌。采用常规稀释度方法稀释样品至适当浓度，涂布2%三丁酸甘油酷平皿筛选培养基，培养温度分别为4℃和18C，挑取在平皿筛选培养基...
- 施文芳胡长浩沈麟林琳
- 关键词：脂肪酶酶学特性假单胞菌
- P197E与ep8叠加突变对扩展青霉脂肪酶热稳定性的影响被引量：5
- 2010年
- 为提高脂肪酶的热稳定性,作者利用重叠延伸PCR对扩展青霉脂肪酶(PEL)基因进行了体外定点突变,构建了P197E(即将第197位的脯氨酸突变为谷氨酸)与随机突变体ep8叠加突变的重组质粒pPIC3.5K-ep8-P197E。将该质粒电转化至毕赤酵母Pichiapastoris GS115中,进行异源表达。与野生型酶和单点突变酶PEL-ep8的酶学性质比较,结果表明:叠加突变体PEL-ep8-P197E在40°C温育处理30min后,残余酶活分别比野生型PEL和随机突变体PEL-ep8提高了42.13%和37.3%。叠加突变体PEL-ep8-P197E的Tm值为41.51°C,比野生型酶PEL提高了2.81°C,比随机突变体脂肪酶PEL-ep8提高了2.25°C。通过对脂肪酶PEL的叠加突变,提高了该酶的热稳定性,并为结构与功能的进一步研究提供了材料。
- 刘燕雅黄平司圣乾陈彦林琳
- 关键词：扩展青霉脂肪酶叠加突变热稳定性
- 脂肪酶的固定化及其在生物柴油制备中的应用被引量：2
- 2009年
- 脂肪酶（1ipase EC3．1．1．3）又称三酰基甘油酰基水解酶，属于特殊的水解酶，它的天然底物是油脂．除了具有高催化效率、专一性、无污染性等生物酶的一般特性外，一个突出的特点是在异相体系中具有催化活性．即在油水界面能够催化酯水解或醇解、氨解、酯合成、酯交换、内酯合成、高聚物合成以及手性药物的拆分等反应^[1]。
- 刘燕雅黄平胡长浩林琳
- 关键词：脂肪酶生物柴油酯合成
- 脂肪酶菌种的筛选鉴定及部分酶学性质的研究
- 脂肪酶的热稳定性问题一直是脂肪酶生产和应用的瓶颈问题。本研究小组致力于从耐高温菌种筛选、分子突变、结构修饰等方面研究和解决该问题。从自然界筛选耐高温脂肪酶菌种,获得相应的基因,不但菌种本身将来有可能成为耐高温脂肪酶的生产...
- 胡长浩施文芳陈彦刘燕雅林琳
- 关键词：脂肪酶酶学性质
- 脂肪酶菌种的筛选、鉴定及酶学性质研究被引量：9
- 2009年
- 目的:筛选耐热脂肪酶产生菌并研究其酶学特性。方法:以固体平板法筛选产酶菌株,单因素和分子进化树分析确定产酶条件、酶学性质及分类地位。结果:产酶条件初步确定为2%糊精、3%酵母膏、MgSO4·7ddH2O 0.1%、K2HPO40.1%、CaCl20.1%、三丁酸甘油酯乳化液0.1%,起始pH7.0,装量为50mL/250mL摇瓶,发酵温度及周期为35℃,22h。酶学性质表明:较适作用温度,pH分别为45℃,10.0,在pH5.0～11.0范围内稳定;该酶具有较好的热稳定性,60℃下温浴30min仍保留77%的活性;可水解长链油脂(C18∶0);0.01%的SDS及10mmol/L的Pb2+、Ba2+抑制该酶的活性,0.05%的EDTA没有影响,0.01%的Triton X-100、Tween80及10mmol/L的K+有促进作用;16S rDNA的分子进化树分析表明,该菌株与Staphylococcus aureus有最紧密的亲缘关系。结论:获得了一株耐热脂肪酶产生菌FL-12,并初步鉴定为Staphylococcus aureus。
- 胡长浩施文芳沈麟林琳
- 关键词：热稳定性酶学性质
- Pseudomonas sp. RT-1低温脂肪酶的纯化及酶学特性被引量：1
- 2010年
- Pseudomonas sp. RT-1是从低温环境下分离的低温脂肪酶产生菌,对该菌产生的胞外脂肪酶（PL-1）进行纯化,并对其酶学特性进行初步研究。Pseudomonas sp. RT-1的发酵上清液经60%（NH4）2SO4沉淀、12~14000截留相对分子质量（MWCO）透析袋透析、Sephadex G75分子筛和超滤浓缩后,得到了电泳纯的P-L1。SDS-PAGE电泳估算其表观相对分子质量为4.43×104。对其酶学特性研究表明：PL-1是低温碱性脂肪酶且对有机溶剂的耐受性较好。10~40℃内有较好的催化活性,最适作用温度为18℃;0~50℃该酶的稳定性较好,当温度超过50℃时则容易失活;最适作用pH为10.2,且pH在9~11时较稳定;该酶对有机溶剂的耐受性较好,10mmol/L的Ca2＋、K＋、Na＋和Fe3＋对PL1的酶活力有促进作用,其中Ca2＋促进作用最大,提高了146.07%,而10mmol/L的Cu2＋、Co2＋、Mn2＋、Mg2＋、Zn2＋、Ba2＋和Al3＋对酶活力具有不同程度的抑制作用,其中Al3＋抑制作用最强,抑制了98.55%;PL-1对C链长度小于或等于12的短链脂肪酸形成的甘油三酯具有较强的水解能力;1mmol/L的去氧胆酸盐（desoxycholate）和0.01%的Triton X100对酶活力具有提高作用,分别提高了30.74%和11.83%;0.01%的SDS和Tween-80、1mmol/L的EDTA和尿素对酶活都有抑制作用,其中EDTA的抑制作用最大,抑制了80%。
- 司圣乾陈彦刘燕雅冯蔚宗林琳
- 关键词：PSEUDOMONAS低温脂肪酶纯化酶学特性
- 随机突变对扩展青霉脂肪酶最适作用温度的改善被引量：4
- 2009年
- 利用error-prone PCR和staggered extension process(StEP)相结合的方法对扩展青霉脂肪酶(PEL)进行定向进化,构建含有随机突变基因的重组质粒pPIC3.5K-lip-mutantx,电转化引入毕赤酵母GS115中,进行异源表达。高通量筛选获得一株最适作用温度比野生型提高了5℃的突变株。15%的SDS-PAGE表明突变体分子量与野生型一致,约为28kDa。基因测序结果表明,突变体第270位丙氨酸变为苏氨酸,后者是氢键的供体,能形成具有稳定空间结构的氢键,使酶结构更加稳定,在高温下更适于与底物结合。
- 胡长浩邹有土刘燕雅冯蔚宗林琳
- 关键词：扩展青霉脂肪酶随机突变最适作用温度
- 易错PCR对扩展青霉脂肪酶基因PEL的定向进化被引量：1
- 2011年
- 以带有野生型扩展青霉碱性脂肪酶cDNA全长的载体psk-lip07为模板,利用易错PCR技术以及高通量筛选,最终获得了一株最佳突变体GS-pPIC3.5K-lip07-ER04,其最适作用温度比野生型提高10℃,酶活提高了约22%,热稳定性Tm值也提高了3.28℃。基因测序结果表明,脂肪酶(PEL)第82位的Lys突变成Arg,第241位的Glu突变成Pro。
- 陈彦司圣乾刘燕雅冯蔚宗林琳
- 关键词：扩展青霉脂肪酶易错PCR最适作用温度
