国家自然科学基金(30770109)
- 作品数：6 被引量：5H指数：2
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- 人巨细胞病毒UL149蛋白结合多肽的氨基酸序列分析
- 2008年
- 目的初步确定与UL149蛋白具有较强结合能力的多肽，并对这些多肽氨基酸序列的特点进行分析。方法应用随机多肽文库分别筛选与UL1493种不同基因型克隆表达的UL149蛋白结合的克隆，并测序，对相应的多肽氨基酸序列进行同源性比较，并与蛋白数据库中已知的蛋白序列进行比较。结果与3种不同基因型的UL149蛋白结合的多肽序列之间具有较高的同源性，氨基酸序列中存在较为集中的区域，即W／A／F／V—D／E—D／E—G—W／F／I／L。与已知人类蛋白数据库进行比较，发现与人免疫球蛋白重链可变区关系密切，并与SH3、WD结构域、丝氨酸／苏氨酸蛋白激酶、补体因子H、锌脂蛋白、MHCI类分子、真核细胞转录起始因子、核因子NF等存在结合关系。结论人巨细胞病毒UL149蛋白可能通过多条途径来干扰机体对人巨细胞病毒的免疫应答反应。
- 王岳平阮强吉耀华孙峥嵘何蓉齐莹马艳萍
- 关键词：人巨细胞病毒
- 人巨细胞病毒UL135蛋白结合蛋白的酵母双杂交筛选被引量：2
- 2009年
- 目的利用酵母双杂交系统从人胎脑cDNA文库中筛选与人巨细胞病毒(HCMV)UL135编码蛋白相互作用的蛋白。方法将成功构建的酵母诱饵表达载体pGBKT7-UL135转化到酵母菌AH109中,再将人胎脑文库DNA转化到含有pGBKT7-UL135的酵母细胞中,筛选与HCMVUL135编码蛋白相互作用的细胞蛋白,并对阳性克隆进行测序和生物信息学分析。结果最终确认60个克隆与HCMVUL135编码蛋白相互作用,其中2个克隆与Thy-1高度同源。结论成功应用酵母双杂交系统筛选出与HCMVUL135编码蛋白相互作用的蛋白,其中Thy-1在HCMV感染致病过程中可能起重要作用。
- 邹飞任高伟周晓薇马艳萍齐莹阮强孙峥嵘
- 关键词：人巨细胞病毒酵母双杂交系统
- 与人巨细胞病毒UL128两种不同结构蛋白相互作用蛋白的筛选与分析
- 2010年
- 目的 利用酵母双杂交系统从人胎脑cDNA文库中筛选与两种不同转录结构的人巨细胞病毒（HCMV）UL128编码蛋白相互作用的蛋白,比较两者相互作用蛋白之间的异同点.方法 通过3＇RACE和5＇RACE技术扩增出两种HCMV UL128片段,其大小分别为519 bp和642 bp,并将其成功构建到酵母诱饵表达载体pGBKT7中.将以上两种酵母表达载体分别转化到酵母菌AH109中,再将文库DNA转化到已含有酵母表达载体的AH109中,筛选与两种片段大小不同的UL128编码蛋白相互作用的人胎脑蛋白,并对筛选得到的阳性克隆进行测序和生物信息学分析.结果 筛出EFEMP2与UL128-519 bp编码蛋白相互作用,THY-1与UL128-642 bp编码蛋白相互作用.结论 成功构建pGBKT7 UL128-519 bp和pGBKT7 UL128-642 bp,并应用酵母双杂交系统分别筛选出EFEMP2和THY-1与UL128-519 bp和UL128-642 bp编码蛋白相互作用,在所筛选得到的相互作用蛋白之间未发现有相同的蛋白,UL128-519 bp和UL128-642 bp所编码的蛋白在HCMV感染致病过程中可能发挥不同的作用.
- 任高伟崔鑫马艳萍齐莹阮强孙峥嵘
- 关键词：人巨细胞病毒酵母双杂交
- 筛选与分析与人巨细胞病毒UL133编码蛋白相互作用的蛋白被引量：3
- 2011年
- 目的应用酵母双杂交技术筛选人胎脑c;;DOI:10.3969/j.issn.NA文库中与人巨细胞病毒(HCMV)UL/b′UL133编码蛋白相互作用的蛋白,为研究UL/b′编码蛋白的生物学功能,揭示HCMV先天感染的致病机制奠定基础。方法设计特异性引物,在引物上下游分别引入NdeⅠ和BamHⅠ限制性内切酶识别位点,采用PCR技术扩增HCMV临床分离株H株的UL133基因片段,将其扩增产物与载体pGBKT7同时使用NdeⅠ和BamHⅠ进行双酶切,纯化后,将UL133片段插入到pGBKT7载体上,构建诱饵质粒pGBKT7-UL133,并测序分析。利用醋酸锂小量酵母转化方法 ,将测序正确的诱饵质粒pGBKT7-UL133转化入AH109酵母感受态细胞中,然后将转化的菌液涂布在色氨酸缺陷型培养基(-Trp)上,筛选阳性菌落。再将人胎脑c;;DOI:10.3969/j.issn.NA文库质粒转化到含pGBKT7-UL133质粒的AH109菌株中,在四缺培养基(-Ade/-H is/-Leu/-Trp)中筛选,在铺有X-Gal的滤纸上进行显色反应,提取显蓝色的阳性酵母筛选质粒,运用电穿孔方法将其转化到TG1的大肠杆菌中,并行PCR鉴定,提取大肠杆菌中的文库质粒,并将其回转到含诱饵质粒pGBKT7-UL133的酵母菌株中,进行回转验证。对筛选到的阳性克隆进行测序和生物信息学分析。结果用于酵母双杂交筛选的诱饵质粒pGBKT7-UL133成功构建,含有诱饵质粒的酵母菌株在-Trp上生长。转化有人胎脑c;;DOI:10.3969/j.issn.NA文库和诱饵质粒pGBKT7-UL133的酵母菌AH109,在四缺培养基中观察到有28个酵母菌落生长,通过显色反应、酵母质粒转化及回转酵母细胞筛选得到4个阳性克隆。通过序列比对,发现在这些基因中,其中一个基因编码人类还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NA;;DOI:10.3969/j.issn.PH)依赖性氧化还原酶1。结论成功应用酵母双杂交系统筛选出与HCMV UL/b′区UL133编码蛋白相互作用的蛋白-NA;;DOI:10.3969/j.issn.PH,提示UL133蛋白可能在增加病毒毒力和传染性,干扰细�
- 崔鑫任高伟王桂丽齐莹马艳萍阮强孙峥嵘
- 关键词：人巨细胞病毒酵母双杂交系统
- 与人巨细胞病毒UL130编码蛋白相互作用蛋白的筛选
- 2010年
- 目的利用酵母双杂交技术筛选与人巨细胞病毒(HCMV)UL130表达产物有相互作用的细胞蛋白及其编码基因,了解其在宿主基因组中的地位功能。方法将成功构建的酵母诱饵表达载体pGBKT7-UL130转化到酵母菌AH109中,再将人胎脑文库DNA转化到含有pGBKT7-UL130的酵母细胞中,筛选与HCMVUL130编码蛋白相互作用的细胞蛋白,并对阳性克隆进行测序和生物信息学分析。结果最终确认9个克隆与HCMVUL130编码蛋白相互作用,其中2个克隆与突触小体相关蛋白(SNAP)高度同源。结论成功应用酵母双杂交系统筛选出与HCMVUL130编码蛋白相互作用的蛋白,其中SNAP在HCMV感染致病过程中可能起重要作用。
- 任高伟崔鑫齐莹马艳萍阮强孙峥嵘
- 关键词：人巨细胞病毒酵母双杂交系统
- 肠致病性大肠杆菌毒力因子EspF对肿瘤坏死因子-α、白细胞介素-6和白细胞介素-8的影响
- 2011年
- 目的研究肠致病性大肠杆菌(EPEC)毒力因子EspF转染人肠上皮细胞(HIC)株时,血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)和IL-8水平的动态变化及与HIC凋亡的关系。方法以Annexin V FITC/PI双染流式细胞仪检测HIC的凋亡率,并用酶联免疫吸附测定法检测转染0、6、12、24、48 h细胞培养上清液中TNF-α、IL-6和IL-8浓度的变化。结果 EspF转染HIC后TNF-α、IL-6和IL-8活性均显著增加,HIC凋亡率在转染后逐渐增高,HIC凋亡率与TNF-α、IL-6和IL-8的水平呈正相关。结论 EspF可激活多种炎症介质和诱导HIC凋亡,EspF转染HIC后TNF-α、IL-6和IL-8水平的升高在EPEC致病过程中起重要作用。
- 王佳贺任开明姜洪芳白雪吴宝刚张萌何平
- 关键词：肠致病性大肠杆菌肿瘤坏死因子-Α白细胞介素-6白细胞介素-8凋亡
