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板栗疫病菌脱毒方法的比较研究被引量：4: 2007年; 病毒与宿主相互作用中,存在宿主主动或被动摆脱病毒的机制。本研究用光照诱导-单孢分离、原生质体再生和菌丝尖端分离3种方法对携带低毒病毒的板栗疫病菌(Cryphonectria parasitica)的EP721、EP713和Euro7三个菌株的脱毒效率进行了比较。结果表明:经光照诱导-单孢分离后所有菌株均可获得脱毒菌株,而原生质体再生对EP721的脱毒效率最高,是继光照诱导-单孢分离脱毒法之后另一种新的有效的脱毒方法,特别适用于不产孢的真菌脱毒。; 康宁蓝秀万陈保善; 关键词：板栗疫病菌脱毒原生质体再生

在板栗疫病菌线粒体中检出低毒病毒编码蛋白p29: 2012年; p29蛋白是低毒病毒基因组编码的一个木瓜蛋白酶样蛋白。前人研究发现,在宿主板栗疫病菌(Cryphonectria parasitica)体内表达p29,会引起真菌毒力降低,色素产生减少,丧失产生无性孢子的能力。除已知p29与源于高尔基体的膜结构共分离之外,p29在细胞内的其它分布形式未明。本研究在成功制备p29特异抗体和高效分离板栗疫病菌线粒体的基础上,尝试用p29抗体检测线粒体中是否存在p29蛋白。Western印迹结果表明,受CHV1-EP713感染的EP713菌株线粒体中存在与p29抗体特异作用的病毒蛋白。本研究结果暗示,低毒病毒蛋白p29可能参与调控宿主线粒体功能。; 王方贞全睿陈本勇王金子商巾杰陈保善; 关键词：板栗疫病菌线粒体

板栗疫病菌致病性机理的双向凝胶电泳法研究被引量：4: 2008年; 双向凝胶电泳技术是蛋白质组学研究的基础性技术平台。如何得到一张高质量的双向凝胶电泳图谱是进行后续研究的关键。为探索适用于板栗疫病菌可溶性总蛋白的最佳提取条件，从蛋白组学角度来探索板栗疫病菌致病性机理，比较了目前在丝状真菌中常用的两种蛋白质提取方法，制备的蛋白质样品经双向凝胶电泳后，在凝胶上呈现的蛋白质斑点的丰度和分布特点。结果表明，两种方法获得的蛋白质主要集中分布在pH4～7的范围内；TCA-丙酮沉淀法得到的图谱分辨率高但是蛋白质总量很少。裂解液-TCA-丙酮沉淀法得到的蛋白质总量较大，通过cleanupkit处理后图谱分辨率可以达到差异蛋白组的要求。随机提取几个银染蛋白点用MALDI-TOFMS／MS进行分析，可以得到高质量的肽质量指纹谱。表明该样品制备方法可以满足蛋白质鉴定的要求。; 姜明国何小丹裴氏秋河江欢欢黄永颜陈保善; 关键词：蛋白质提取双向凝胶电泳蛋白质组板栗疫病菌

同源片段大小对板栗疫病菌同源重组频率的影响: 2007年; 低毒病毒／板栗疫病菌系统是一个具有独特优点的、崭新的研究病毒与宿主相互作用的模型系统。以同源重组为基础的基因打靶是研究基因功能和病毒与宿主相互作用分子机制的重要手段。为了研究在板栗疫病菌同源重组遗传操作中同源片段大小对同源重组频率的影响，利用一段5．4kb板栗疫病菌染色体DNA序列，构建了以潮霉素抗性基因为遗传转化筛选标记的3个同源双交换片段以及3个同源单交换质粒，分别转化板栗疫病菌EPl55原生质体，检测筛选同源重组转化子并计算发生同源重组频率。结果表明，在板栗疫病菌中3个同源双交换片段FHA1（1．7～2.0kb）、FHA2（1.0～1.2kb）和FHA3（0.5kb）的同源重组频率分别为3．73％、2。06％和0；3个同源单交换质粒pFHl（1．76kb）、pFH2（1．23kb）和pFH3（O．54kb）的同源重组频率分别为0.95％、0和0。这些结果为板栗疫病菌同源重组遗传操作中同源片段大小的设计提供了依据。; 蓝秀万陈美佳周燕段丹华陈保善; 关键词：板栗疫病菌同源重组

G418抗性筛选标记在板栗疫病菌中的应用被引量：8: 2007年; 板栗疫病菌-低毒病毒系统,是一个优良的研究植物病原真菌致病和病毒-宿主相互作用分子机制的模型。随着研究的深入,原有的苯菌灵和潮霉素两个遗传转化筛选标记已不能满足研究需要。文章报道构建一个由构巢曲霉trpC启动子驱动的G418抗性Neo基因盒,并成功应用于板栗疫病菌的遗传转化研究。; 蓝秀万陈敏玫桂磊范云燕甘文剑陈保善; 关键词：板栗疫病菌

低毒病毒及板栗疫病菌低毒力机制被引量：13: 2009年; 低毒病毒是一类存在于板栗疫病菌细胞质中自主复制的无衣壳正链RNA病毒。感染低毒病毒后,板栗疫病菌的致病力显著降低,色素分泌减少,菌丝体由感染病毒前的桔黄色变为白色,产孢量降低或不产孢,漆酶表达水平明显下降。低毒病毒侵染性克隆的获得以及高效转化和转染体系的建立,使得低毒病毒成为目前唯一可以进行全面遗传操作的真菌病毒。利用低毒病毒作为探针来探测板栗疫病菌的致病力组成和毒力调节机制,已获得了一些很有意义的发现。本文介绍近几年低毒病毒及其与真菌相互作用的研究进展,包括低毒病毒的基因组和功能基因研究、低毒病毒和线粒体损害引起的板栗疫病菌低毒力机制、板栗疫病菌的RNA沉默系统以及低毒病毒抗RNA沉默的机制。低毒病毒/板栗疫病菌系统已经成为研究病毒与宿主相互作用以及病原真菌致病机理的很好的模式系统。; 商巾杰陈保善; 关键词：板栗疫病菌 RNA沉默基因组学

板栗疫病菌过氧化物酶tp基因的克隆、分子鉴定及功能研究: 从板栗疫病菌野生菌株EP155的基因组上克隆到两个过氧化还原蛋白基因(cptp1和cptp2),分别属于typic 2-Cys prx和1-Cys prx家族。这两个基因编码的蛋白与其他真菌的过氧化物酶有很高的同源性。为...; 全睿谭俊范素华商巾杰陈保善

板栗疫病菌分泌蛋白质的提取和双向电泳分析: 比较了3种提取板栗疫病菌分泌蛋白质样品的方法,其中,改良Sevage法效果最好,双向电泳分离了250个蛋白质点,是硫酸铵沉淀法的3倍左右。用飞行质谱仪鉴定了190个蛋白质,分别属于133种蛋白质。使用ProtComp 8...; 王金子施涯邻商巾杰陈保善; 文献传递

低毒病毒与板栗疫病菌互作研究的现状和展望: 自板栗疫病菌低毒现象在上世纪五十年代发现以来,对于低毒现象的研究重心先后经历了低毒菌株在板栗疫病菌生物防治中的应用,低毒现象的遗传规律和决定因子,低毒病毒的分子生物学,真菌毒力的调节机制和病毒与真菌互作中宿主因子的作用等...; 陈保善; 文献传递

板栗疫病菌低毒力遗传转化株LC的构建被引量：1: 2007年; 低毒病毒—板栗疫病菌组合是研究病毒—宿主相互作用的模式系统之一。通过构建含板栗疫病菌低毒病毒CHV1-EP713的全长cDNA和苯菌灵抗性基因的表达质粒pXB3F2,并用于转化野生型无毒株EP155,获得了以苯菌灵抗性为筛选标记、具有dsRNA病毒再生能力的低毒力遗传转化株LC,为深入研究病毒—真核宿主相互作用的分子机制提供了新的研究材料。; 蓝秀万蓝瑛林海燕陈保善; 关键词：板栗疫病菌

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