国家教育部博士点基金(20060422015)
- 作品数：6 被引量：9H指数：2
- 相关作者：王志玉曹海霞陶泽新郑晓民王炳花更多>>
- 相关机构：山东大学山东省疾病预防控制中心徐州医学院更多>>
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- 相关领域：医药卫生更多>>
- 汉坦病毒GM04-38株包膜糖蛋白上融合肽的初步确定被引量：1
- 2009年
- 目的初步确定汉坦病毒GM04-38株包膜糖蛋白上潜在的融合肽区域。方法采用基因定点突变技术将潜在融合肽区域的十个关键氨基酸突变成性质相左的氨基酸,转染Vero E6细胞后,间接免疫荧光(IFA)检测糖蛋白表达,采用Giemsa染色法观察细胞融合现象。结果在Vero E6细胞中成功表达出糖蛋白,IFA显示关键氨基酸突变前后细胞中均有荧光信号,呈胞浆分布,但细胞融合现象在突变后消失。结论潜在融合肽区域的十个氨基酸突变均对细胞融合产生明显的影响,提示该段区域很可能是病毒的融合肽。
- 曹海霞陶泽新郑晓民刘晓丽王桂亭许洪芝温红玲宋艳艳赵丽姚苹王志玉
- 关键词：汉坦病毒包膜糖蛋白细胞融合融合肽
- 汉坦病毒包膜糖蛋白细胞融合活性研究进展被引量：2
- 2008年
- 曹海霞王志玉
- 关键词：汉坦病毒肺综合征包膜糖蛋白细胞融合抗原位点致病病毒
- 汉坦病毒GM04-38株N-联糖基化位点在细胞融合中作用的初步确定被引量：1
- 2009年
- 目的初步确定汉坦病毒GM04—38株N-联糖基化位点在细胞融合中的作用。方法采用基因定点突变技术将汉坦病毒GM04-38株G1片段上N134、N235、N347、N399四位点及G2片段上N928位点共5个位点上的天冬酰胺置换为丙氨酸。转染VeroE6细胞后，间接免疫荧光（IFA）检测蛋白表达，荧光显微镜观察IFA结果；Westernblot检测蛋白的表达情况。采用Giemsa染色法观察细胞融合现象。结果在VetoE6细胞中成功表达出糖蛋白，Westernblot显示除134位点末显示G1片段外，各突变体均表达出G1、G2片段。IFA显示天冬酰胺突变前后各位点均显示荧光信号，呈核周分布。突变后134位点与928位点的突变体融合现象消失，其余各位点突变后融合现象仍然存在。结论G1上的134位点可能与蛋白正确折叠有密切关系，134位点突变极可能导致蛋白的错误折叠，进而无法转运出内质网。G2上的928位点对细胞融合有重要作用，提示汉坦病毒融合肽很有可能位于G2上。
- 郑晓民陶泽新曹海霞刘晓丽闫玉芬王桂亭许洪芝温红玲宋艳艳赵丽姚苹王志玉
- 关键词：汉坦病毒糖蛋白细胞融合
- 汉坦病毒GM04-38株包膜糖蛋白基因表达载体的构建及表达被引量：3
- 2008年
- 目的构建汉坦病毒GM04-38株包膜糖蛋白G1、G2的真核表达载体并将其在Vero E6细胞中进行表达,观察细胞融合现象。方法采用PCR和基因克隆技术,将GM04-38株G1、G2基因分别克隆到表达载体pCAGGS/MCS,酶切和测序鉴定正确后,将表达载体pCAGGS-G1、pCAGGS-G2共转染Vero E6细胞,酸性MEM处理后观察细胞融合现象的产生,并以间接免疫荧光试验(IFA)观察糖蛋白的表达情况。结果显示在Vero E6细胞中成功表达出糖蛋白G1、G2,IFA显示荧光信号分布在细胞浆中。二者的共表达可产生良好的生物学活性,在偏酸性条件下引起Vero E6细胞发生融合,而转染pCAGGS-NP的细胞没有融合现象发生。共表达也未出现明显的促进效应。结论成功构建了糖蛋白G1、G2的表达载体,并在Vero E6细胞中呈有效表达,二者的共表达可在偏酸性条件下引起Vero E6细胞发生融合。
- 王炳花陶泽新王丽娟曹海霞王志玉
- 关键词：汉坦病毒包膜糖蛋白细胞融合
- 汉坦病毒融合作用研究进展
- 2010年
- 郑晓民王志玉
- 关键词：汉坦病毒肾综合征出血热
- 汉坦病毒包膜糖蛋白糖基化位点突变体的构建被引量：2
- 2009年
- 目的构建汉坦病毒糖基化位点的突变体。方法利用基因定点突变的方法构建了5个糖蛋白突变体,即将G1、G2上的天冬酰胺置换为丙氨酸,根据被替换的位置,突变体分别命名为N134A、N235A、N347A、N399A、N928A。结果构建的5个N-联糖基化位点的突变体,经测序图谱显示原序列中的天冬酰胺(N)均被置换为丙氨酸(A)。结论成功构建了5个糖基化位点的突变体,为进一步研究N-联糖基化的缺失对细胞融合的影响奠定了基础。
- 王炳花王志玉
- 关键词：汉坦病毒
