国家自然科学基金(39800146)
- 作品数:7 被引量:35H指数:3
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- 人宫颈黏液HMGN2鉴定及在宫颈组织的表达
- 2008年
- 为探讨人子宫颈黏液的抗菌机制,采用酸性尿素聚丙烯酰胺凝胶电泳和反相高压液相色谱技术,从人子宫颈黏液酸溶性提取物鉴定出对大肠杆菌氨苄青霉素耐药株ML-35p有较强的抗菌活性的多肽HCP-21和HCP-26.蛋白质N端氨基酸序列测定和精确质谱分子质量测定证明,HCP-21为HMGN2,HCP-26为SLPI片段.提取原代培养宫颈上皮细胞的总RNA,采用RT-PCR技术扩增出一条与HMGN2 cDNA大小相同(270bp)目的基因片段,表明在生理状况下,宫颈上皮细胞即可表达其mRNA.制备HMGN2多克隆抗体,对生理状态下宫颈组织切片和宫颈黏液涂片进行HMGN2分子免疫组化分析表明,该分子主要分布于子宫颈黏膜层,并存在于子宫颈黏液.HMGN2分子在宫颈黏膜上皮组织和黏液中固有表达,可能在子宫颈天然免疫防御中起重要作用.
- 王莉莉何跃东黄宁李明熊文碧冯云吴琦王伯瑶潘小玲
- 关键词:女性生殖道子宫颈抗菌肽HMGN2
- 人β防御素2(HBD2)与人乳头瘤病毒HPV16E6羧基端编码基因的克隆及其在真核细胞中的表达被引量:1
- 2003年
- 目的 构建人β防御素与人乳头瘤病毒 HPV16 E6羧基端基因的真核表达质粒 ,并检测其在真核细胞中的表达情况 ,探讨其作为 DNA疫苗治疗宫颈癌的可行性。方法 利用分子克隆技术 ,将 HBD2基因片段与 HPV16 E6羧基端基因片段连接 ,插入真核表达质粒 pc DNA3.1,经测序鉴定后 ,用阳离子脂质体法转染真核细胞 COS7,RT- PCR及免疫组化法检测其表达。结果 重组质粒 pc DNA3.1/ HBD2 - HPV16 E6 C转染 COS7细胞 4 8小时后 ,RT- PCR扩增出插入的 HBD2 - HPV16 E6 C片段 ,免疫组化染色呈棕黄色阳性反应。结论 人 β防御素与人乳头瘤病毒 HPV16 E6羧基端融合基因能在真核细胞中有效表达 ,为今后进行整体动物 DNA免疫试验奠定了基础。
- 孙艳李明黄宁吴琦王伯瑶
- 关键词:人Β防御素2人乳头瘤病毒真核细胞
- 人内源性抗菌肽的多样性研究
- 2004年
- 目的 从人单个核白细胞和子宫颈及子宫内膜粘液酸溶性提取物中分离纯化新的抗菌肽。方法 电泳凝胶琼脂糖弥散法分析 r IL- 2刺激培养的人单个核白细胞和子宫颈及子宫内膜粘液酸溶性提取物抗菌组分 ,用制备性酸性尿素聚丙烯酰胺凝胶电泳初步分离并制备电泳纯的各抗菌组分 ,反相高压液相色谱技术进一步纯化 ,琼脂糖弥散法分析其抗菌活性 ,Tricine- SDS- PAGE鉴定其纯度和分子量 ,用 Edman降解法进行氨基酸序列测定。结果 从刺激培养的人单个核白细胞分别纯化出 HL P- 2 / 2 3、HL P- 3/ 2 1两个抗菌肽分子 ,分子量分别是 7.84和 16 .86 ku;从子宫颈粘液及子宫内膜粘液分别分离纯化出 HCP- 1/ 2 1、HUP1/ 38两个抗菌肽分子 ,分子量分别为 13.89和 5 .95 ku。测定 HL P- 3/ 2 1分子的前 10位 N端氨基酸序列为PKRKAEGDAK。结论 人体抗菌肽分子存在多样性 ,HL P- 2 / 2 3、HL P- 3/ 2 1、HCP- 1/ 2 1和 HU P1/
- 黄宁张舒杨华蓉王莉莉张旗冯云吴琦王伯瑶
- 关键词:子宫颈子宫内膜分离纯化抗生素
- 人子宫颈粘液抗菌活性多肽的分离纯化被引量:11
- 2003年
- 目的 从人子宫颈粘液分离纯化新的抗菌多肽。方法 用 5 %乙酸提取人子宫颈粘液可溶物 ,经电泳凝胶琼脂糖弥散法抗菌试验发现 ,子宫颈粘液酸溶性提取物有一条主带对大肠杆菌耐氨苄株 ML - 35 P有强抗菌活性 ,命名为 HCP。应用制备性酸性尿素聚丙烯酰胺凝胶电泳技术及洗脱电泳技术得到构成该主带的混合物 ,最后应用反相高效液相色谱技术分离纯化多肽。经 Tricine- SDS- PAGE鉴定其相对分子质量 ,并运用琼脂糖弥散法鉴定其抗菌活性。结果 从子宫颈粘液酸溶性提取物中纯化出一多肽 ,相对分子质量约为 14× 10 3,命名为 HCP- 1,具有抗耐药性大肠杆菌和绿脓杆菌的活性。结论 HCP-
- 杨华蓉潘小玲黄宁吴琦冯云王伯瑶
- 关键词:宫颈粘液抗菌多肽分离纯化
- 人β-防御素基因在女性生殖道及妊娠相关组织中的表达被引量:15
- 2003年
- 目的 检测人β-防御素 (HBDs)基因在女性生殖道各段组织及妊娠相关组织中的表达。方法 采用逆转录聚合酶链反应法 (RT- PCR)检测正常女性生殖道各段组织及怀孕妇女妊娠相关组织中 HBD- 1、HBD- 2的表达情况 ,用内参照β- actin的特异引物作 RT- PCR。结果 细胞株 ME- 180表达 HBD- 1m RNA,而不表达 HBD- 2m RNA;正常女性阴道、子宫颈、子宫内膜、输卵管和卵巢 5种组织中均发现有 HBD- 1m RNA的表达 ,除阴道、卵巢外的其余组织中也有 HBD- 2 m RNA的表达 ;绒毛膜、绒毛、羊膜、胎盘和脐带 5种妊娠相关组织中 ,HBD- 1m RNA在除羊膜外的各组织中均有表达 ,而 HBD- 2 m RNA则在绒毛膜、绒毛及胎盘组织中表达。结论 HBDs在正常妇女生殖道及妊娠相关组织中广泛表达 ,提示其在维系正常妇女及孕妇生殖道内环境稳定。
- 冯艳潘小玲黄宁冯云吴琦王伯瑶
- 关键词:抗菌肽女性生殖道
- 人LAK细胞抗菌活性多肽HLP-3P21的分离纯化和鉴定被引量:6
- 2003年
- 目的 分离纯化人LAK细胞小分子抗菌多肽 ,鉴定其分子特性 ,检测其抗菌活性。方法 采用密度梯度离心法分离人外周血单个核细胞 ,并用IL 2和PHA刺激培养。 5 %乙酸匀浆细胞获得其酸溶性提取物。应用制备酸性尿素聚丙烯酰胺凝胶电泳技术和反相高效液相色谱技术分离纯化多肽 ,Tricine SDS PAGE鉴定其相对分子质量 (Mr) ,运用琼脂糖弥散法鉴定其抗菌活性 ,采用Edman降解法测定其氮端序列 ,并进行肽质谱分析。结果 从人LAK细胞酸溶性提取物中纯化出一多肽 ,Tricine SDS PAGE表观Mr 为 17× 10 3,命名为HLP 3P2 1(humanlymphocytepeptide) ,具有抗致病性大肠杆菌ML 35P及铜绿假单胞菌ATCC6 5 92 2的活性。其氮端序列为PKRKAEGDAK ,肽质谱的检索分析未发现匹配度大于 5 0 %的蛋白质分子。结论 HLP 3P2 1可能为LAK细胞一新的抗菌效应分子。
- 杨华蓉黄宁吴琦王伯瑶
- 关键词:人LAK细胞纯化
- 一种从人子宫颈粘液新分离的抗菌多肽的分子特性分析被引量:2
- 2005年
- 目的 对本室从人子宫颈粘液分离纯化的1个抗菌多肽HCP- 1进行分子结构特性分析。方法 分离HCP- 1多肽,测定其氮端氨基酸序列,根据其氮端氨基酸序列密码子设计简并引物,采用3′- RACE- PCR技术扩增HCP- 1编码基因,连接到T载体进行测序。用生物软件分析测序结果。结果 以简并引物结合RACE- PCR技术成功的克隆出HCP- 1全长c DNA,BL AST分析证实其序列与HMG- 17分子相同,OMIGA软件分析发现其含有一个α-螺旋结构(疏水结构区)可能是其抗菌功能的基础。结论 HCP- 1为HMG- 17,是存在于宫颈粘液抗菌的一种抗菌多肽,其中的α-螺旋结构可能是其抗菌的结构基础。
- 李明潘小玲王莉莉孙艳冯云黄宁吴琦李绚王伯瑶