上海市自然科学基金(03ZR14084)
- 作品数：4 被引量：32H指数：4
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- 相关机构：上海交通大学医学院附属瑞金医院台州市中心医院更多>>
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- 扩髓促进骨不连愈合的实验研究被引量：4
- 2009年
- 目的:通过建立大鼠股骨骨折不愈合模型,探讨扩髓加粗髓内钉固定治疗骨不连,重启骨折愈合过程的生物学机理。方法:选用3月龄雄性SD大鼠80只,在建立右股骨骨折不愈合模型后,随机分为2组,即扩髓治疗组和不扩髓对照组,不扩髓对照组不扩髓,仅更换同等大小的髓内钉。分别于扩髓术后第1、2、3、4、6周收集组织标本,通过放射学检查观察骨组织形态学变化;用免疫组化法,检测不同时间点骨折端骨痂组织中碱性磷酸酶(ALP)和Ⅱ型胶原(Col-Ⅱ)的表达;采用RT-PCR方法检测骨痂组织中骨形态发生蛋白-2(BMP-2)和转化生长因子-β(TGF-β)的mRNA表达。结果:放射学检测显示术后6周扩髓治疗组骨断端致密骨痂填充,骨折线模糊甚至消失,外骨痂致密,而不扩髓对照组则骨折端肥大硬化,骨折线仍存在;免疫组化结果显示扩髓治疗组骨痂组织中ALP在1～6周都有较高表达,而Col-Ⅱ的表达在第1周有一个高表达,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05);2～3周表达逐渐下降,在4周后甚至低于模型对照组的表达;RT-PCR结果显示:术后1～6周,扩髓治疗组骨痂中BMP-2与TGF-β的mRNA表达与不扩髓对照组比都有较高的表达量,但BMP-2的高表达在早期就表现出来,以后逐渐减弱;而TGF-β的高表达则在2～3周出现,再逐渐减弱,治疗组与对照组比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:扩髓可重启骨折愈合过程,促进成骨前体细胞向成骨细胞分化和软骨内骨化,使成骨能力增强,促进骨折愈合。
- 黄正冯伟傅文彧王晋申
- 关键词：骨不连扩髓骨折愈合
- 扩髓治疗骨折不愈合中的血管分布研究被引量：12
- 2008年
- 目的研究扩髓治疗骨折不愈合过程中血管生成和血管内皮细胞生长因子（VEGF）表达的时间和空间特点以及相互联系。探讨扩髓并更换粗直径髓内钉治疗骨折不愈合的生物学机理，为临床运用扩髓治疗长骨骨折延迟愈合及不愈合提供理论依据。方法3个月龄雄性SD大鼠200只，对大鼠一侧股骨干骨折用不稳定固定方法制备肥大性骨折不愈合模型，随机选取40只作为模型鉴定，剩下160只随机分为试验组扩髓治疗和对照组不扩髓治疗，每组80只进行随机配对研究。术后第1、3、5、7、14、21、28、42天取材。用血管性血友病因子（VWF）标记血管，免疫组化方法检测骨折处VWF和VEGF的表达，来研究骨折处血管生成的时空特点以及与VEGF表达的关系。结果实验组的骨折愈合率显著高于对照组。时空分布上，在早期（1—7d），实验组血管生成主要在骨外膜和软骨痂中，对照组主要在骨内膜；中期（7-14d）实验组血管随着肉芽组织长入骨折间隙，对照组近骨内膜处血管增加，但是骨折间隙没有血管；后期（14～42d）实验组骨内膜处出现血管，骨折间隙血管大量增加，对照组血管仍然局限在肉芽组织和骨内膜处，骨折间隙没有血管。实验组血管总数始终高于对照组。VEGF出现的时间和空间顺序与血管生成顺序一致，实验组VEGF表达普遍高于对照组。结论在骨折不愈合的治疗中，扩髓可使骨外膜和骨痂血供代偿性增加以及刺激VEGF表达增加，血管总数要高于不扩髓组。VEGF表达时间和分布与血管的生成关系密切，提示治疗骨折不愈合中，VEGF可能起着至关重要的作用，决定着血管形成的时间、部位与数量。
- 黄正冯伟傅文彧肖德常周琦王晋申
- 关键词：血管生成血管内皮生长因子
- 循环静水压力对维持兔软骨细胞表型的影响被引量：13
- 2007年
- 目的:本研究将兔软骨细胞放在静水压力负载装置中培养,并传代,施加不同频率和大小的静水压,观察其对兔软骨细胞表型的影响。方法:用酶消化法获取兔关节软骨细胞,分别在不同的压力和频率下作普通培养瓶贴壁的单层培养,并传代。40 kPa循环静水加压为实验组,40 kPa持续静水加压培养和常压培养作为对照。Ⅰ型胶原和Ⅱ型胶原免疫组化,苏木素套核染色,倒置显微镜观察摄像。以RT-PCR方法检测软骨细胞中蛋白聚糖、聚集蛋白聚糖、Ⅰ型胶原和Ⅱ型胶原mRNA的表达。结果:在循环静水压力下培养,软骨细胞有较高的细胞增殖率,培养至第7代未见明显表型改变,仍然表达Ⅱ型胶原、蛋白聚糖和聚集蛋白聚糖等。常压培养,软骨细胞传代至第5代以后,逐渐失去软骨细胞的特有表型。而持续静水压力培养的软骨细胞传代至第3代以后就开始逐渐失去软骨细胞的特有表型。结论:一定的循环静水压力能维持软骨细胞的合成分泌功能,有助于软骨细胞特有表型的稳定。
- 黄正傅文冯伟张凤华朱雅萍魏立周琦袁石福黄好杜宁
- 关键词：软骨细胞细胞培养技术
- 不同类型静水压对兔软骨细胞表型的影响被引量：6
- 2007年
- 目的:传代和压力负荷都是影响软骨细胞表型的因素。单层培养的关节软骨细胞在培养过程中随着传代逐渐失去了典型软骨细胞的形态学特征,变得像成纤维细胞,而且II型胶原的分泌减少,失去了软骨细胞特异性,即出现了反分化[1]。Lee MS等发现,某些机械应力可诱导软骨细胞凋亡,改变软骨细胞的新陈代谢,也会导致关节软骨的退变[2]。在适当的应力刺激下,软骨细胞可以通过调节基质代谢来适应压力,但在过度或持续的应力下软骨细胞就可能产生各种病理改变[3]。本试验将兔软骨细胞放在静水压力负载装置中培养,并传代,在生理水平的流体静态压力范围内(0.1-15MPa)[4]施加不同大小的循环静水压,以及不同大小的持续静水压,观察其对兔软骨细胞损伤和表型的影响。方法:试验组循环加压组分为0.15MPa、0.5Mpa、1MPa三个小组,对照组为持续加压组(分为0.15MPa,0.5MPa,1MPa三个小组)和常压持续培养组。用酶消化法获取兔关节软骨细胞,在静水压力负载装置中按照上述分组作普通培养瓶贴壁的单层培养,并传代。检测Ⅰ型胶原和II型胶原免疫组化,苏木素套核染色,倒置显微镜观察摄影。以RT-PCR方法检测软骨细胞中Proteoglycan,Aggrecan,Ⅰ型胶原和II型胶原mRNA的表达。结果:在循环静水压力下培养,软骨细胞有较高的细胞增殖率,II型胶原,Proteoglycan和Aggrecan等表达增加。生理水平的循环静水压越高,软骨细胞表型越稳定。常压持续培养在第6代开始出现表型改变;持续静水压力培养的软骨细胞更早失去软骨细胞的特有表型,并且持续静水压力越大,表型改变越早。结论:在生理水平的静水压范围内一定频率和大小的循环静水压力能维持或促进软骨细胞的合成分泌功能,有助于软骨细胞特有表型的稳定。
- 黄正傅文彧冯伟张凤华朱雅萍魏立周琦袁石福杜宁黄好
- 关键词：软骨细胞表型动物实验
