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沙培林联合肿瘤冻融抗原刺激的小鼠骨髓源性树突状细胞瘤苗的抗胃癌效应被引量：1: 2010年; 目的：观察沙培林（OK-432）对小鼠骨髓源性树突状细胞（DCs）功能的影响,及由此产生的DCs对荷胃癌小鼠的抗癌效应.方法：OK-432联合肿瘤冻融抗原诱导小鼠骨髓源性DCs,ELISA法检测DCs分泌白介素12（IL-12）水平.建立荷胃癌小鼠模型,尾静脉注射DCs,观察其对肿瘤生长的抑制作用,RT-PCR法检测移植瘤IL-12mRNA表达情况,ELISA法检测移植瘤IL-12蛋白表达情况,免疫组织化学法检测移植瘤血管内皮生长因子（VEGF）蛋白表达情况.结果：OK-432联合肿瘤冻融抗原促进DCs分泌IL-12.OK-432联合肿瘤冻融抗原刺激的DCs抑制移植瘤生长,促进移植瘤IL-12mRNA和IL-12蛋白表达,抑制移植瘤VEGF蛋白表达.结论：OK-432联合肿瘤冻融抗原刺激能有效增强DCs瘤苗的抑瘤效应,其机制可能与纠正肿瘤组织免疫缺陷,促进肿瘤组织表达IL-12和抑制肿瘤组织表达VEGF有关.; 倪秀雄袁明洲刘丽燕曾真; 关键词：树突状细胞骨髓白介素12

MyD88在OK-432诱导树突状细胞成熟中的作用被引量：2: 2010年; 目的探讨小鼠骨髓树突状细胞(DCs)髓性分化蛋白88(MyD88)在OK-432诱导DCs成熟中的作用机制。方法分离小鼠骨髓单核细胞(BMMCs),在含10%胎牛血清、重组小鼠粒-巨噬细胞集落刺激因子(rmGM-CSF)、重组小鼠白细胞介素-4(rmIL-4)的培养体系中诱导培养,所得的细胞即为DCs。于培养的第5天,将细胞分为3组:对照组不加OK-432和MyD88 si RNA;OK-432组加入终浓度为5μg/mL的OK-432;RNA干扰组加入MyD88 si RNA12 h后,再加入5μg/mL OK-432刺激。半定量RT-PCR法检测DCs中MyD88的表达;ELISA法检测各组DCs分泌肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和IL-12的能力;MTT法检测DCs体外刺激同种混合淋巴细胞增殖的免疫活性。结果OK-432组DCs的MyD88高表达、TNF-α和IL-12释放明显增加并能诱导较强混合淋巴细胞反应,而用MyD88 si RNA干扰后以上效应均降低(P<0.05)。结论靶向MyD88 si RNA可明显抑制小鼠DCs中MyD88的表达和OK-432诱导的DCs成熟,表明MyD88介导OK-432诱导的DCs成熟。; 倪秀雄刘丽燕刘永建曾真袁明洲陈玄; 关键词：小分子干扰免疫耐受

OK-432增强脐血树突状细胞瘤苗抗胃癌作用的实验研究被引量：1: 2008年; 目的:用脐血浆代替胎牛血清,观察OK-432对脐血来源的树突状细胞(DCs)功能的影响,探讨制备高效抗肿瘤DCs疫苗的优化方案。方法:分离脐血单个核细胞并在含10%同源脐血浆、GM-CSF和IL-4的培养体系中诱导培养,部分加入肿瘤冻融抗原和/或OK-432冲击,MTT法检测DCs体外刺激同种混合淋巴细胞增殖的免疫活性,LDH法检测DCs诱导的CTL对不同靶细胞的细胞毒作用。结果:收集第9 d的各组DCs,肿瘤冻融抗原冲击后的DCs呈成熟形态,能呈递胃癌相关抗原给淋巴细胞刺激其增殖并诱导对胃癌细胞株特异的CTL毒性。OK-432联合肿瘤冻融抗原冲击能增强其抗原呈递功能,诱导更强的混合淋巴细胞增殖反应及针对胃癌细胞株的强烈CTL杀伤效应。结论:该DCs培养方案具有培养时间短、细胞因子消耗少、试剂简单等优点,可用于制备DCs肿瘤疫苗,有临床应用价值。; 倪秀雄陈玄张文豪; 关键词：树突细胞胎血 OK-432

OK-432联合聚肌胞诱导小鼠树突状细胞成熟及其抗损伤作用: 2021年; 目的比较体外单独或联合应用TLR配体-沙培林(OK-432)、聚肌胞对树突状细胞(DCs)成熟状态的影响,并将DCs与小鼠前胃癌细胞上清液共培养,检测DCs存活率,探讨OK-432联合聚肌胞对小鼠前胃癌细胞上清液诱导树突状细胞损伤的保护作用及机制。方法采用重组小鼠粒-巨噬细胞集落刺激因子(rmGM-CFS)联合重组小鼠白细胞介素-4(rmIL-4),诱导小鼠骨髓源性的单个核细胞分化为未成熟的DCs(imDCs),分别经OK-432、聚肌胞或OK-432联合聚肌胞诱导DCs成熟,未成熟或成熟的DCs分别与不同浓度的小鼠前胃癌细胞上清液共培养24 h。电镜及光镜观察DCs的细胞形态变化,流式细胞仪检测DCs CD83和CD86的表达情况,ELISA法测定上清液中IL-12的分泌水平,MTT法测定DCs体外刺激同种混合淋巴细胞增殖的免疫活性以及DCs与不同浓度小鼠前胃癌细胞上清液共培养24 h后的活性,免疫组化法检测DCs锌指蛋白A20(A20)的表达水平。结果联合刺激组DCs的形态学,表面抗原CD83和CD86的表达率,IL-12的分泌量及刺激淋巴细胞增殖的能力均显著高于其它处理组;小鼠前胃癌细胞上清液能损伤DCs,联合刺激组DCs的成活率均高于其它处理组,且其成活率与A20蛋白的表达量成正比。结论OK-432联合聚肌胞能有效诱导DCs成熟;OK-432联合聚肌胞对小鼠前胃癌细胞上清液诱导树突状细胞的损伤有保护作用,其机制与上调A20蛋白表达增高有关。; 王静倪秀雄林岷姚琦曾真陈炜; 关键词：树突状细胞 OK-432 聚肌胞锌指蛋白A20 小鼠前胃癌

溶血性链球菌制剂OK432联合肿瘤冻融抗原诱导小鼠骨髓树突状细胞的成熟被引量：6: 2008年; 目的探讨溶血性链球菌制剂(OK432)联合肿瘤冻融抗原诱导小鼠骨髓树突状细胞(DCs)成熟的作用,改进体外诱导DCs成熟的方案,为后期制备临床使用的抗肿瘤DCs疫苗提供新的技术路线。方法分离小鼠骨髓单核细胞(BMMCs),并在含10%胎牛血清(FCS)、重组小鼠粒-巨噬细胞集落刺激因子(rmGM-CSF)、重组小鼠白细胞介素-4(rmIL-4)的培养体系中诱导培养,部分加入OK432和/或肿瘤冻融抗原冲击,光镜和透射电镜下观察细胞形态,流式细胞仪检测细胞表面分子CD83和CD86的表达情况。结果经OK432联合肿瘤细胞冻融抗原冲击的DCs形态学特征典型。肿瘤冻融抗原冲击后,DCs表面CD83和CD86的表达上调,OK432进一步刺激后,CD83和CD86的表达率显著升高。结论采用OK432联合肿瘤冻融抗原诱导DCs成熟的方案相对简便;OK432能有效促进肿瘤冻融抗原冲击后的骨髓DCs进一步成熟。; 曾真倪秀雄袁明洲; 关键词：树突细胞骨髓

溶血性链球菌制剂OK-432联合肿瘤冻融抗原诱导的树突状细胞瘤苗对小鼠前胃癌的抑瘤作用: 2010年; 目的观察溶血性链球菌制剂(OK-432)联合肿瘤冻融抗原诱导的树突状细胞(DCs)瘤苗对小鼠前胃癌的体内抑瘤作用。方法分离小鼠骨髓单个核细胞(BMMCs),并在含10%胎牛血清、重组小鼠粒-巨噬细胞集落刺激因子(rmGM-CSF)、重组小鼠白细胞介素-4(rmIL-4)的培养体系中诱导培养,部分加入肿瘤冻融抗原和/或OK-432冲击,透射电镜下观察细胞形态,流式细胞仪检测细胞表面抗原CD83和CD86的表达情况。建立小鼠前胃癌移植瘤模型,随机分4组,分别从小鼠尾静脉注射磷酸盐缓冲液(PBS对照组)、未经肿瘤冻融抗原刺激的DCs(BM-DCs组)、经肿瘤冻融抗原刺激的DCs(TL-DCs组)和经OK-432联合肿瘤冻融抗原诱导的DCs(OK-DCs组),观察各组小鼠肿瘤体积及质量,并计算抑瘤率。结果于培养的第7天收集各组的DCs,OK-DCs呈典型成熟形态,其表面CD83和CD86的表达率高于BMMCs、BM-DCs、TL-DCs。体内实验显示,OK-DCs组移植瘤生长缓慢,瘤体积和质量均显著小于PBS对照组、BM-DCs组、TL-DCs组,体内抑瘤率为55.32%。结论 OK-432联合肿瘤冻融抗原诱导DCs成熟的方案制备的DCs瘤苗可明显抑制荷瘤小鼠前胃癌的生长。; 倪秀雄曾真袁明洲张文豪刘丽燕; 关键词：癌症疫苗

沙培林诱导脐血树突状细胞的成熟被引量：7: 2006年; 目的改进体外诱导脐血树突状细胞(DC)成熟的方案,为后期制备临床使用的抗肿瘤DC疫苗提供新的技术路线。方法分离脐血单个核细胞(CBMC)并在含10%同源脐血浆、重组人粒-巨噬细胞集落刺激因子(rhGM-CSF)和重组人白细胞介素-4(rhIL-4)的培养体系中诱导培养,部分加入肿瘤冻融抗原和/或沙培林(OK-432)冲击,光镜和电镜下观察细胞形态,流式细胞仪检测培养前后各组细胞表面抗原CD1a和CD83的表达情况。结果培养过程中,细胞形态发生明显变化,呈现典型的DC形态。收集第9天各组DC,细胞表面均高度表达CD1a和CD83,与贴壁分离的CBMC比较有统计学意义,肿瘤冻融抗原冲击后,DC表面CD1a和CD83的表达上调,沙培林进一步刺激后,CD1a和CD83表达率显著升高。结论诱导脐带血来源的前体细胞分化为未成熟DC的途径相对简便;沙培林能促进肿瘤冻融抗原冲击后的脐血DC进一步成熟。; 倪秀雄陈玄张文豪; 关键词：树突细胞胎血

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福建省自然科学基金(C0410020)

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