江苏省卫生厅资助项目(Z200705)
- 作品数：4 被引量：10H指数：2
- 相关作者：金培生陶常波张爱君李雪阳沈才齐更多>>
- 相关机构：徐州医学院附属医院更多>>
- 发文基金：江苏省卫生厅资助项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 特异性siRNA的筛选及CTGF—shRNA质粒的构建
- 2012年
- 目的构建结缔组织生长因子（connectivetissuegrowthfactor，CTGF）短发夹RNA（shorthairpinRNA，shRNA）重组质粒，研究其在人皮肤瘢痕成纤维细胞中对CTGF基因表达的沉默效果，为探讨病理性瘢痕的基因治疗奠定基础。方法设计针对人CTGF基因特异性的3条siRNAoligo，通RT—PCR及Westernblot检测其在瘢痕成纤维细胞中的干扰效果，从中筛选出一条最佳片段。根据所筛选出的最佳片段序列设计并构建CTGF—shR—NA质粒，通过单酶切和测序鉴定该质粒。结果3条siRNAoligo中c3序列干扰效果最佳。酶切鉴定和测序分析证实重组质粒构建成功。结论成功构建CTGF—shRNA质粒，为进一步探索CTGF对人皮肤病理性瘢痕形成的作用奠定了基础。
- 金培生沈才齐李雪阳张爱君陶常波李强马志兵
- 关键词：结缔组织生长因子成纤维细胞RNA干扰短发夹RNA
- shRNA-CTGF重组质粒对瘢痕疙瘩Ⅰ型胶原蛋白表达的影响被引量：2
- 2014年
- 目的 构建pGPU6/GFP/Neo-shRNA-CTGF重组质粒（简称shRNA-CTGF）,通过RNA干扰（RNAi）技术对结缔组织生长因子（connective tissue growth factor,CTGF）进行体内、体外干预,分析其对瘢痕疙瘩Ⅰ型胶原蛋白（collagen-Ⅰ,COL-Ⅰ）表达的影响.方法 设计并构建特异性shRNA-CTGF重组质粒,RNAi转染体外培养瘢痕疙瘩成纤维细胞（keloid fibroblast,KFB）,检测CTGF基因沉默情况及KFB分泌的COL Ⅰ量;将shRNA-CTGF重组质粒对构建的裸鼠瘢痕疙瘩动物模型进行体内转染,检测CTGF基因沉默情况及COL-Ⅰ基因、蛋白表达水平.结果 成功构建了CTGF重组质粒,其在体内、体外环境下均可成功沉默CTGF表达,其抑制率为86.8％和54.1％;RNA体外干扰KFB定向沉默CTGF的同时可显著抑制COL-Ⅰ表达,其mRNA、蛋白水平抑制率分别为76.8％和65.6％;RNA体内干预实验也可显著降低COL-Ⅰ表达,其mRNA、蛋白水抑制率分别为52.7％和48.0％.结论 shRNA-CTGF重组质粒在体外及体内环境下均可成功沉默CTGF基因表达,沉默CTGF能显著降低瘢痕疙瘩中COL-Ⅰ蛋白含量,提示CTGF基因是病理性瘢痕治疗的潜在靶点.
- 沈才齐金培生李雪阳张爱君陶常波李强马志兵
- 关键词：瘢痕疙瘩结缔组织生长因子CONNECTIVE
- 结缔组织生长因子在病理性瘢痕中的表达被引量：8
- 2009年
- 目的探讨结缔组织生长因子(CTGF)在病理性瘢痕形成中的作用。方法采用半定量逆转录聚合酶链反应技术(RT-PCR)检测10例瘢痕疙瘩(瘢痕疙瘩组)和10例增生性瘢痕(增生性瘢痕组)中的CTGF mRNA的表达,并以8例正常皮肤(正常皮肤组)作为对照。结果病理性瘢痕中CTGF mRNA表达均明显高于正常皮肤组(P<0.05),而瘢痕疙瘩组又高于增生瘢痕组(P<0.05)。结论CTGF在病理性瘢痕的形成过程中起到重要作用。
- 陶常波金培生张爱君李雪阳
- 关键词：瘢痕疙瘩增生性瘢痕结缔组织生长因子
- 人皮肤瘢痕成纤维细胞原代培养及其生长曲线的研究
- 2011年
- 目的 建立可靠的人皮肤瘢痕成纤维细胞培养方法,探索细胞的生长规律,为皮肤瘢痕体外研究提供平台.方法 采用组织块贴壁法原代培养瘢痕成纤维细胞,波形蛋白免疫细胞化学法鉴定成纤维细胞,CCK-8测定细胞生长曲线.结果 人皮肤瘢痕原代成纤维细胞培养成功,细胞形态为长梭形,波形蛋白表达阳性,16～18天可传第1代,以后每7～8天可传1代,传代后5～6天时为活跃期,第7天进入停滞期.结论 培养出的人皮肤瘢痕成纤维细胞在传代后第5～6天最适于于体外实验研究.
- 沈才齐金培生李雪阳张爱君陶常波
- 关键词：原代培养瘢痕成纤维细胞
