国家教育部博士点基金(20124503120008)
- 作品数：5 被引量：17H指数：3
- 相关作者：阳洁陈军泽刘冰王翰林骆敏更多>>
- 相关机构：广西医科大学广西医科大学第一附属医院广东药学院更多>>
- 发文基金：国家教育部博士点基金国家自然科学基金广西教育厅高等学校科研项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 慢病毒介导shRNA靶向下调Cx26表达对人高侵袭性肝癌细胞上皮间质转化及侵袭的影响被引量：2
- 2014年
- 目的探讨慢病毒介导shRNA靶向下调缝隙连接蛋白26(Cx26)表达对人高侵袭性肝癌细胞上皮间质转化(EMT)及侵袭的影响。方法用慢病毒介导Cx26-shRNA感染SK-Hep-1细胞并用嘌呤霉素筛选稳转细胞。荧光定量PCR和Western blot检测干扰效率。光镜观察细胞形态改变。Western blot检测EMT上皮标志物E-cadherin、间质标志物vimentin的蛋白表达水平。Transwell侵袭实验检测细胞侵袭能力变化。结果成功建立稳定下调Cx26表达的SK-Hep-1细胞(shRNA-Cx26组),与感染EGFP空载体(shRNA-control组)及未感染的SK-Hep-1细胞(blank-control组)比较,其Cx26 mRNA和蛋白表达均明显降低(P<0.01),间质细胞形态转变为上皮细胞形态,E-cadherin蛋白表达明显增多、vimentin蛋白表达明显减少(P<0.01),体外侵袭能力也显著降低(P<0.01)。结论靶向下调Cx26表达能抑制人高侵袭性肝癌SK-Hep-1细胞的EMT和体外侵袭。
- 阳洁覃贵慧陈军泽
- 关键词：上皮间质转化CONNEXIN26
- 辛伐他汀对人非小细胞肺癌A549细胞凋亡及caspase-9、caspase-3活性的影响被引量：5
- 2013年
- 目的:观察辛伐他汀对非小细胞肺癌(NSCLC)细胞凋亡的影响并探讨其机制。方法:辛伐他汀10,20,30μmol/L作用于NSCLC的A549细胞48,72h后,Hoechst 33 258荧光染色法观察细胞形态学改变,流式细胞仪Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡,分光光度法检测caspase-3、caspase-9活性。结果:不同浓度辛伐他汀作用于A549细胞48,72h后,细胞出现典型的凋亡表现,凋亡率明显增高,呈浓度依赖性,且辛伐他汀10,20μmol/L作用72h后,诱导细胞凋亡的作用更显著。同时,辛伐他汀呈浓度依赖性地增强caspase-3、caspase-9活性;其增强caspase-9活性的作用在72h更显著。结论:辛伐他汀能诱导A549细胞凋亡,该作用与其上调caspase-9、caspase-3活性有关。
- 刘冰阳洁
- 关键词：辛伐他汀非小细胞肺癌细胞凋亡CASPASE-9CASPASE-3
- 慢病毒靶向干扰Cx26抑制人高转移性肝癌HCCLM3细胞增殖及迁移被引量：6
- 2014年
- 目的探讨缝隙连接蛋白26(connexin 26,Cx26)对人高转移性肝癌HCCLM3细胞增殖、凋亡、迁移能力的影响。方法构建Cx26干扰慢病毒载体感染HCCLM3细胞,用嘌呤霉素筛选稳定干扰Cx26表达的靶细胞,通过Realtime PCR和Western blot鉴定Cx26的mRNA和蛋白表达情况;用"parachute"荧光示踪法检测细胞缝隙连接(gap junction,GJ)功能;用MTT法、流式细胞术、Transwell迁移实验分别检测干扰Cx26对HCCLM3细胞增殖、凋亡、迁移能力的影响。结果 LV-Cx26组的Cx26 mRNA和蛋白表达明显低于LV-NC组和野生组细胞(P<0.01),并且LV-Cx26组的GJ功能也较LV-NC组和野生组明显减弱(P<0.01)。干扰Cx26可明显抑制HCCLM3细胞增殖(P<0.01),促进HCCLM3细胞凋亡(P<0.01),降低其体外迁移能力(P<0.01)。结论慢病毒靶向干扰Cx26表达可明显减弱其GJ功能,并抑制高转移性肝癌HCCLM3细胞增殖、迁移能力,促进凋亡,降低其恶性生物学特性。
- 阳洁覃贵慧陈军泽
- 关键词：肝癌迁移
- 缝隙连接蛋白43对人非小细胞肺癌HCC827细胞吉非替尼获得性耐药机制的初步研究被引量：4
- 2016年
- 目的探讨缝隙连接蛋白43(connexin 43,Cx43)与非小细胞肺癌(NSCLC)细胞产生吉非替尼(Gefitinib)获得性耐药的关系。方法在Gefitinib敏感细胞株HCC827上,通过逐步递增Gefitinib浓度诱导获得Gefitinib耐药细胞株HCC827 GR;MTT法检测Gefitinib对HCC827/GR细胞的IC_(50);RT-PCR检测Cx43的mRNA水平;Western blot检测Cx43和磷酸化Akt(p-Akt)的蛋白水平;parachute荧光示踪法检测细胞缝隙连接功能(gap junction intercellular communication,GJIC);免疫荧光技术检测Cx43的细胞定位。结果Gefitinib作用于HCC827和HCC827 GR的IC_(50)分别为(0.07±0.019)μmol·L^(-1)、(10.84±0.021)μmol·L^(-1)(P<0.01);HCC827 GR中Cx43的mRNA和蛋白水平较HCC827明显降低(P<0.05),但p-Akt蛋白水平明显升高(P<0.05)。在HCC827 GR细胞上加PI3K的特异性抑制剂LY294002(25μmol·L^(-1),24 h)后,p-Akt蛋白水平明显下降(P<0.01),且Cx43的蛋白水平明显升高(P<0.01)。HCC827及HCC827 GR均未检测到GJIC,用GJIC增强剂RA(retinoic acid)处理(10μmol·L^(-1),24 h)上述细胞,亦未检测到荧光传递,免疫荧光结果显示Cx43表达在细胞胞质。结论胞质中Cx43的下调可能促进NSCLC细胞对Gefitinib的获得性耐药,其机制可能与Cx43非GJIC依赖的PI3K/Akt信号通路激活有关。
- 骆敏罗燕妹覃贵慧滕翠芳王翰林阳洁
- 关键词：非小细胞肺癌缝隙连接蛋白43吉非替尼获得性耐药PI3K/AKT
- Connexin 43对非小细胞肺癌细胞吉非替尼原发性耐药的影响
- 2017年
- 目的:探讨缝隙连接蛋白43(connexin 43,Cx43)对非小细胞肺癌(non-small-cell lung cancer,NSCLC)吉非替尼原发性耐药的影响。方法:MTT法测定吉非替尼对3株非突变型EGFR(WT-EGFR)NSCLC细胞系A549、H1299、Calu3细胞的半数抑制浓度(IC50);Western blot观察Cx43、磷酸化Akt(phospho-Akt,p-Akt)蛋白在上述细胞系中的表达水平;"Parachute"法检测细胞缝隙连接功能(gap junction intercellular communication,GJIC);免疫荧光法检测Cx43蛋白在细胞中的定位。结果:吉非替尼作用于Calu3、A549、H1299细胞的IC50分别为(0.064±0.011)μmol/L、(13.64±0.015)μmol/L、(20.054±0.012)μmol/L,即A549、H1299细胞对吉非替尼原发性耐药;A549、H1299细胞中Cx43、p-Akt蛋白水平显著高于Calu3细胞(P<0.01);A549、H1299细胞有荧光传递现象,且Cx43蛋白定位在A549、H1299细胞膜上,而Calu3细胞无荧光传递现象,且Cx43主要表达于细胞质上。结论:NSCLC细胞膜上调的Cx43及其组成的GJIC可促进细胞对吉非替尼的原发性耐药,其机制可能与其激活PI3K/Akt信号通路有关。
- 罗燕妹骆敏滕翠芳黄国林覃贵慧阳洁
- 关键词：缝隙连接蛋白43非小细胞肺癌P13K/AKT吉非替尼原发性耐药
