江苏省自然科学基金(BK2013247) 作品数:6 被引量:14 H指数:3 相关作者: 张尤历 徐岷 龚爱华 何俊波 蔡菁 更多>> 相关机构: 江苏大学附属医院 江苏大学 更多>> 发文基金: 江苏省自然科学基金 国家自然科学基金 江苏省普通高校研究生科研创新计划项目 更多>> 相关领域: 医药卫生 更多>>
PRMT5对肝癌细胞增殖及凋亡的影响 被引量:6 2015年 该文目的为探讨蛋白质精氨酸甲基转移酶5(protein arginine methyltranserase 5,PRMT5)对肝癌细胞增殖、凋亡的影响。设计PRMT5短发夹核糖核酸(sh RNA)序列,装入p LKO.1-TRC vector质粒,进行慢病毒包装,感染肝癌细胞SMMC-7721和BEL-7402,嘌呤霉素筛选并培养稳定低表达PRMT5细胞株。Western blot、q PCR检测sh RNA干扰效率;CCK-8检测细胞增殖活性;平板克隆法检测细胞克隆形成能力;流式细胞术检测细胞凋亡;Western blot检测细胞增殖、凋亡相关蛋白的影响。结果显示,成功构建慢病毒重组质粒sh-PRMT5并感染肝癌细胞。Western blot、q PCR结果表明,筛选出的稳转细胞株能低表达PRMT5;在肝癌细胞中下调PRMT5的表达,可抑制细胞增殖(P<0.05),降低cyclin B1、cyclin D1、cdc20和cdc25B蛋白质水平(P<0.05),降低细胞克隆形成能力(P<0.05),促进细胞凋亡(P<0.05),同时能诱导Caspase-3表达,降低Bcl-2/Bax的比值(P<0.05)。由此说明,下调PRMT5的表达能抑制肝癌细胞增殖,诱导细胞凋亡,为进一步研究体内PRMT5的作用提供基础。 张尤历 葛璐 陆瑛 胡昌龙 张行行 彭琬昕 何俊波 龚爱华 徐岷关键词:肝癌 增殖 凋亡 LIN28基因对人胰腺癌细胞PANC1和SW1990增殖和迁移的影响 被引量:3 2015年 该文目的为研究LIN28基因对人胰腺癌细胞增殖和迁移的影响,揭示其在胰腺癌发生发展中的作用。实验发现,胰腺癌细胞中LIN28的表达模式与细胞增殖和迁移能力有关,将干扰质粒LIN28 sh RNA转染入LIN28高表达的PANC1细胞,将过表达载体3×Flag-LIN28转染入低表达的SW1990细胞中,采用RT-PCR和Western blot实验验证基因沉默或过表达的效果,并运用CCK-8法分析细胞的增殖能力并绘制细胞生长曲线,Transwell实验检测细胞迁移率。结果显示,下调LIN28后,PANC1细胞中LIN28基因的表达量明显降低,细胞增殖减慢,迁移减少;而上调LIN28后,SW1990细胞中LIN28基因的表达量明显增高,细胞增殖加快,迁移增加。由此说明,沉默LIN28基因可以抑制PANC1细胞增殖和迁移,过表达LIN28基因可以促进SW1990细胞增殖和迁移,这为阐明LIN28在胰腺癌演化过程中的机制奠定了实验基础。 卞石惠 李杰 龚爱华 陈晖 蒋小猛 张尤历 徐岷关键词:胰腺癌 细胞增殖 细胞迁移 上调miR-200a的表达减弱TGF-β1刺激的大鼠胰腺星状细胞活化和胶原合成 2015年 目的探讨miR-200a对转化生长因子β1(TGF-β1)刺激的大鼠胰腺星状细胞(PSCs)活化和胶原蛋白合成的影响。方法用组织块法培养分离PSCs,免疫荧光染色检测结蛋白(desmin)、神经胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达鉴定PSCs;取新鲜培养的第2代PSCs,设空白对照组、TGF-β1组、TGF-β1+miR-NC组、TGF-β1+miR-200a mimic组,Western blot法和细胞免疫荧光染色法检测α-SMA和Ⅰ型胶原蛋白(collagenⅠ)的表达,荧光定量PCR检测α-SMA、collagenⅠmRNA及miR-200a的表达。结果 TGF-β1可刺激大鼠PSCs活化及促进胶原蛋白的合成(P<0.05),且呈时间依赖性;转染miR-200a mimic后,在相同浓度的TGF-β1刺激下,α-SMA和collagenⅠ的蛋白和mRNA表达明显降低(P<0.01)。结论上调miR-200a的表达,可减弱TGF-β1对大鼠PSCs活化和胶原蛋白合成的刺激作用,其可能的机制是抑制TGF-β1的生物学作用。 张尤历 王国英 赵义 李萍 刘鑫 倪鑫 徐岷关键词:TGF-Β1 纤维化 蛋白质精氨酸甲基转移酶1促进胰腺癌细胞的增殖和迁移能力(英文) 2017年 该文探讨了蛋白质精氨酸甲基转移酶1(protein arginine methyltranserase 1,PRMT1)对胰腺癌细胞迁移和增殖的影响。在数据库中分析了PRMT1在正常胰腺组织和胰腺癌组织中的表达。用Western blot和Real-time PCR实验检测不同胰腺癌细胞中PRMT1的基础表达量。在Pa Tu8988和Bx PC3细胞中干扰PRMT1,Western blot、q PCR检测sh RNA干扰效率;CCK-8检测细胞增殖活性;平板克隆法检测细胞克隆形成能力;Transwell迁移实验检测细胞迁移能力;Western blot检测细胞EMT(epithelial-mesenchymal transition)相关蛋白变化。相反,在SW1990细胞中过表达PRMT1,并做上述同样的实验进行检测。结果显示,PRMT1在胰腺癌组织中的表达明显高于正常胰腺组织。在胰腺癌细胞中下调PRMT1的表达,可以抑制细胞的增殖和迁移能力,增高上皮标志物E-钙黏蛋白的水平,降低间质标志物N-cadherin钙黏蛋白的水平。上调PRMT1的表达得到相反的结果。结果表明,PRMT1能促进胰腺癌细胞的增殖和迁移能力,并影响EMT标志物蛋白质水平。该研究为进一步研究体内PRMT1的作用提供基础。 魏虹 张尤历 王珏 周朦 何俊波 周海浪 王大为 周改 冯雯 龚爱华 徐岷关键词:胰腺癌 增殖 迁移 碱性成纤维细胞生长因子对胰腺星状细胞增殖的影响 被引量:1 2014年 目的探讨碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对胰腺星状细胞(PSCs)增殖作用的影响。方法采用组织块分离法培养PSCs,通过免疫荧光检测结蛋白、神经胶质原纤维酸性蛋白、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达鉴别。取培养的第2-3代PSCs,用不同浓度bFGF(5、10、20、25ng/ml)处理72h,CCK8法检测PSCs增殖情况,荧光定量PCR检测Ⅰ型胶原蛋白基因mRNA表达,Western blot方法检测α-SMA表达;其结果与对照组比较。结果 (1)不同浓度bFGF组的细胞增殖率明显高于对照组[(145.17±6.67)%、(152.96±7.50)%、(148.64±8.74)%和(144.83±10.06)%vs.100%](P<0.05)。(2)与对照组比较,bFGF促进Ⅰ型胶原蛋白mRNA表达显著增加(P<0.05)。(3)与对照组比较,bFGF刺激PSCs后引起α-SMA表达显著增加(P<0.05)。结论 bFGF可促进PSCs增殖活化,在一定程度上可促进胰腺纤维化。 徐岷 王国乙 李萍 王国英 蔡菁 周冰洁 赵义 蒋小猛 顾威 张尤历关键词:碱性成纤维细胞生长因子 胰腺星状细胞 纤维化 胰腺纤维化相关转录因子及信号通路的研究进展 被引量:4 2014年 胰腺纤维化是慢性胰腺炎的重要特征,活化的胰腺星状细胞在胰腺纤维化的发生、发展过程中起着关键作用。核因子-κB、Smad、过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)、活化蛋白-1(AP-1)、信号转导及转录激活因子(STAT)等转录因子在胰腺纤维化过程中发挥重要作用,涉及多个重要的信号通路,包括转化生长因子-β(TGF-β)/Smad、丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)、PI3激酶(PI3K)/Akt通路、Wnt/β-catenin、酪氨酸激酶-信号转导与转录激活因子(JAK-STAT)、活性氧(ROS)等。现就胰腺纤维化相关转录因子及信号通路的研究进展作一综述。 蔡菁 张尤历 徐岷关键词:胰腺纤维化 胰腺星状细胞 转录因子 信号转导