国家高技术研究发展计划(2006AA02Z462)
- 作品数：5 被引量：9H指数：2
- 相关作者：朱乃硕彭思扬宋玉亮王晨滔崔晓君更多>>
- 相关机构：复旦大学中国人民解放军总医院更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 乙肝表面抗原结合蛋白SBP在毕赤酵母中的表达纯化及功能鉴定被引量：2
- 2009年
- 乙肝表面抗原结合蛋白(HBsAg binding protein,SBP)是本实验室发现的一种人源蛋白,该蛋白与人乙型肝炎病毒HBV表面抗原HBsAg存在特异性的结合能力。此前的研究证实SBP具有增强乙肝疫苗免疫效果的作用。为进一步研究该蛋白的生理功能和作用机制,利用毕赤酵母表达系统进行了SBP的表达菌株构建,筛选得到了SBP的高效表达菌株。发酵产物经过分离纯化,最终得到了大量高纯度的真核来源的目的蛋白。通过SDS-PAGE、高效液相色谱、Western blotting和质谱鉴定,证实所得到的蛋白具有较高的纯度和完整性。通过ELISA方法初步证实了其与乙肝表面抗原具有较好的结合能力。该研究为进一步进行SBP的体内外功能研究及免疫增效研究打下了基础。
- 庞云龚立彭思扬朱乃硕
- 关键词：毕赤酵母
- 体外扩增小鼠CD8^+NK1.1^+NKT细胞的研究
- 2010年
- 目的研究体外扩增小鼠CD8+NK1.1+NKT细胞的表面分子标志、分化途径及细胞属性。方法获取超抗原SEB活化后体外扩增的小鼠效应细胞,用抗CD3-PerCP、CD4-FITC、CD8-PE、NK1.1-APC、TcRVβ8-FITC和CD69-FITC荧光抗体染色后,用流式细胞仪(FCMCalibueBD,USA)鉴定CD8+NK1.1+NKT细胞的表面分子标志和分化途径。用逆转录聚合酶链反应测定细胞内各种细胞因子和Foxp3基因转录水平。结果体外扩增的细胞中91.92%是CD8+T细胞,其中22.75%的细胞是CD8+NN1.1+NKT细胞,高于正常值(0.21±0.19,n=12)108倍以上。19.61%NKT细胞是TcRVβ8+NN1.1+NKT细胞。CD69分子的表达由原始0.11%增加到85.95%。CD4+T、CD3+T细胞亚群和CD4+NKT、CD3+NKT及CD4-CD8-NKT细胞亚群没有增加。扩增细胞TGF-β的mRNA表达呈阳性,不表达Foxp3和细胞因子IL-2、4、5、6、10及IFN-γ。CD8+NKT细胞直接由CD8+T细胞分化而来。结论 CD8+NK1.1+NKT细胞的分子特征为CD69+Foxp3-TcRVβ8+TGF-β+CD8+NK1.1+;它们既不是CD8+T调节细胞(Treg.),也不是CD4+NKT细胞,直接由CD8+T细胞分化而来,带有TCRVβ8受体,应属于T细胞亚群。
- 陈钰郭业磊钟江张世仑
- 关键词：小鼠葡萄球菌肠毒素B免疫耐受
- 敲减XAGE-1b基因表达降低ACCM和A673肿瘤细胞的增殖能力被引量：2
- 2009年
- XAGE是通过生物信息学方法发现的新一类肿瘤-睾丸抗原(cancer/testis antigen,CT抗原)基因,其主要表达亚型为XAGE-1b.已有的研究表明,该基因可能与肿瘤细胞的生长相关.本研究构建了针对XAGE-1b进行RNA干扰的重组腺病毒载体Adv-Sh1和Adv-Sh2.半定量和定量RT-PCR显示,Adv-Sh1比Adv-Sh2对XAGE-1b的干扰效率更高.细胞荧光干扰实验显示,Adv-Sh1对XAGE-1b有显著的干扰作用.在细胞增殖和集落形成实验中,感染Adv-Sh1后的细胞增殖能力显著降低(P<0.01),形成的单克隆集落数也显著减少.研究结果表明,下调XAGE-1b基因表达使ACCM和A673肿瘤细胞的增殖能力均有降低,提示XAGE-1b在肿瘤生长过程中可能发挥重要作用.本研究为进一步深入研究XAGE-1b的功能和致癌机制打下了良好基础.
- 彭思扬宋玉亮王晨滔朱乃硕
- 关键词：腺病毒RNA干扰
- XAGE-1b腺病毒表达载体的构建及其功能研究被引量：4
- 2008年
- XAGE是通过生物信息学方法发现的新一类睾丸—肿瘤抗原(cancer/testis antigen,CT抗原)基因,XAGE-1是其主要成员.当前已获得了XAGE-1在多种肿瘤组织中较为详细的表达谱,并初步揭示了XAGE-1与病理进程及肿瘤亚型的关系,但关于其功能及表达调控机制的研究尚刚刚起步.构建了高效表达XAGE-1b的重组腺病毒载体Adv-1b;在细胞增殖、集落形成实验中,感染Adv-1b后的细胞增殖能力更强(P<0.01,studentt检验),形成的单克隆集落更大;软琼脂集落形成实验中,感染Adv-1b后的细胞集落形成率更高(P<0.01,卡方检验).研究结果初步证实:XAGE-1b对涎腺腺样囊性癌细胞的增殖及转移能力有一定的促进作用,为进一步深入研究XAGE-1b的功能和致癌机制打下了良好基础.
- 宋玉亮彭思扬王晨滔朱乃硕
- 关键词：腺病毒
- eEF1A1基因克隆、原核分泌表达及融合蛋白纯化被引量：2
- 2011年
- eEF1A1作为蛋白合成中的重要翻译延伸因子,可与多种功能性蛋白如F-actin、BPOZ-2结合,并在细胞凋亡、蛋白降解方面起重要作用。以往原核基因工程蛋白表达系统大多为包涵体表达的变性分子,需要复性。为了获得eEF1A1原核分泌性可溶性蛋白分子,克隆了人eEF1A1蛋白编码序列(约1 300 bp),并成功构建pET22b-A原核分泌表达重组质粒,转化到大肠杆菌BL21(DE3)菌株,0.4 mmol/L终浓度IPTG诱导,经不同温度下包涵体与胞浆蛋白组分分析,快速明确蛋白表达情况,即诱导4 h后,37℃表达于包涵体组分,在30℃分泌表达至胞浆组分。通过His-Trap亲和层析纯化柱进行线性洗脱,Bradford法测定蛋白浓度高达620 mg/mL,SDS-PAGE分析纯度约为95%,蛋白大小符合50 kD,Western blotting显示目的蛋白能被eEF1A1抗体识别;质谱分析证实重组蛋白为人eEF1A1蛋白分子。为进一步研究其与重要功能性蛋白的相互作用及在细胞凋亡和蛋白降解中的作用奠定基础。
- 郭艳荣常晓月崔晓君魏勋斌朱乃硕
- 关键词：基因克隆分泌表达融合蛋白蛋白纯化
