国家自然科学基金(30770079)
- 作品数：4 被引量：2H指数：1
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- 相关机构：复旦大学桂林医学院更多>>
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- 相关领域：生物学农业科学医药卫生更多>>
- 核衣壳蛋白VP39融合TAT转导肽对杆状病毒转导哺乳动物细胞的影响被引量：1
- 2009年
- 为了提高昆虫杆状病毒在哺乳动物细胞中转导基因的效率,构建了重组杆状病毒AcRed-tat和AcRed。两者都能在哺乳动物细胞内表达红色荧光蛋白作为报告基因。同时,AcRed-tat带有HIV-1Tat转导肽、病毒主要衣壳蛋白基因vp39及增强型绿色荧光蛋白(egfp)三者的融合基因,并由杆状病毒多角体启动子表达,能够在昆虫细胞中表达该Tat融合蛋白,并掺入子代病毒粒子。而AcRed作为相应的对照病毒,带有多角体启动子表达vp39和egfp的融合基因。2株病毒分别转导哺乳动物细胞后,利用流式细胞仪检测报告基因的表达水平,发现在CHO和Vero细胞中AcRed-Tat介导的报告基因表达水平明显高于AcRed,而在HEK293细胞中2株病毒介导的报告基因表达水平差异不显著。结果表明Tat转导肽可以提高杆状病毒对一部分哺乳动物细胞的转导效率,为改进杆状病毒-哺乳动物细胞转导载体提供了新的思路。
- 李俪王鑫尹隽钟江
- 关键词：杆状病毒哺乳动物细胞转导
- 鸡染色质绝缘子HS4的不同区域对杆状病毒表达egfp基因的影响
- 2013年
- 染色质绝缘子是一种具有保护目的基因免受周围基因调控影响,保证基因稳定表达的DNA元件.前期的研究表明,当鸡染色质绝缘子HS4被置于目的基因表达框下游时,可以显著提高杆状病毒介导的基因的表达水平.为了进一步认识HS4作用的机制,构建了携带HS4绝缘子不同区域的6种重组病毒,比较了它们对报告基因egfp表达的影响.结果发现,相比对照病毒,插入HS4全长片段的重组病毒vBG-HS4-1200,以及同时插入250bp核心区域和400bp连接片段的重组病毒vBG-HS4-650在感染Sf9细胞后报告基因egfp的表达水平明显提高.这个结果与前人在哺乳细胞表达系统中所得出的结果基本相符,从而进一步证实HS4在裂解型病毒中同样可以通过表观遗传学修饰调控基因的表达.
- 胡樱虹钟江
- 关键词：杆状病毒绝缘子
- 鼠IL-2基因的克隆及其杆状病毒表达载体的构建
- 2011年
- 目的构建携带鼠IL-2基因的重组杆状病毒表达载体。方法将目的基因鼠IL-2克隆入杆状病毒表达载体pFastBacDual中,构建重组质粒pFB-CMV-IL-2并予酶切和PCR鉴定;将pFB-CMV-IL-2转化到含杆状病毒穿梭载体Bacmid的DH10Bac感受态菌中,筛选阳性克隆,获得重组杆状病毒载体Bacmid-pFB-CMV-IL-2,抽提质粒;用脂质体转染法将Bacmid-pFB-CMV-IL-2转染Sf9昆虫细胞包装病毒;收获完整重组杆状病毒,反复感染Sf9细胞扩增病毒,提取杆状病毒基因组,用PCR验证重组杆状病毒的正确性。结果成功构建鼠IL-2基因杆状病毒表达载体。结论本试验为进一步在哺乳细胞中表达鼠IL-2基因、开发研究IL-2奠定了基础,同时亦为其他蛋白质的真核细胞表达提供了方法参考。
- 黄大林袁桂峰王鑫李彬彬钟江
- 关键词：白细胞介素2质粒小鼠
- 果蝇SCS'绝缘子对杆状病毒在哺乳动物细胞中介导基因表达的影响被引量：1
- 2012年
- 将果蝇SCS'绝缘子以不同方向置于CMV启动子和报告基因egfp表达框的上下游,构建了包括对照病毒在内的9个重组杆状病毒.比较了这些病毒转导CHO,BHK和CNE细胞后报告基因表达的情况.结果显示:各株重组病毒的复制没有明显差异,但报告基因的表达水平有明显不同.当SCS'绝缘子位于表达框的上游,并与报告基因同向时,基因的表达水平显著提高.在CHO中,转导后24hEGFP表达量比对照病毒提高近3倍,egfp mRNA水平也比对照病毒高4倍多.当在表达框上、下游各有一个SCS',且分别与CMV启动子方向一致和相反时,EGFP表达量降低到只有对照病毒的1/3,其mRNA水平也仅是对照病毒的1/6～1/5.丁酸钠和TSA等组蛋白脱乙酰基酶抑制剂处理可以使该病毒介导EGFP表达大幅上升,甚至超过对照病毒.这些结果揭示了杆状病毒在哺乳动物细胞介导基因表达时受到细胞染色质调节机制的影响,也为优化杆状病毒哺乳动物细胞系基因表达系统提供了新的方法.
- 陆俊峰尹隽钟江
- 关键词：杆状病毒绿色荧光蛋白
