国家高技术研究发展计划(2006AA02Z420)
- 作品数：6 被引量：40H指数：4
- 相关作者：祝秉东张颖雒彧姜雯雯于红娟更多>>
- 相关机构：兰州大学兰州生物制品研究所约翰·霍普金斯大学更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划甘肃省自然科学基金教育部“新世纪优秀人才支持计划”更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 结核疫苗研究的历史与现状被引量：17
- 2007年
- 由于结核病缺乏有效的疫苗保护，发病率持续增高，成为人类传染病中继艾滋病之后的第二大杀手。减毒牛型结核分枝杆菌——卡介苗是目前许多国家批准应用于人体的惟一结核病疫苗。然而，卡介苗对成人肺结核的保护效率很低，研制新型结核病疫苗迫在眉睫。多种类型的新型疫苗，包括重组卡介苗疫苗、营养缺陷型结核分枝杆菌疫苗、蛋白质多肽疫苗、DNA疫苗、以病毒为载体的结核分枝杆菌亚单位疫苗等被广泛研究。至2005年，已有120种以上的疫苗进行了动物实验研究，至少有5个疫苗已进入Ⅰ期临床试验。
- 祝秉东王洪海
- 关键词：结核疫苗结核病疫苗重组卡介苗成人肺结核
- 结核融合蛋白AMM亚单位疫苗强化BCG初始免疫的免疫效应被引量：2
- 2009年
- 目的研究结核融合蛋白Ag85B—Mpt64190-198-Mtb8．4（AMM）和佐剂二甲基三十六烷基铵（DDA）、卡介苗多糖核酸（BCG—PSN）构建的亚单位疫苗强化BCG初始免疫的免疫效应。方法将融合蛋白AMM、佐剂DDA和BCG—PSN混合构建AMM亚单位疫苗。实验1组BCG初免后第10周用AMM亚单位疫苗加强免疫小鼠一次；实验2组BCG初免后分别于第8周、第10周用AMM亚单位疫苗加强免疫小鼠一次。同时设立生理盐水及仅BCG免疫两个对照组。BCG初免后第14周、第22周，应用ELISPOT、ELISA检测免疫小鼠的细胞及体液免疫反应。同时在第22周用BCG活菌攻击被免疫小鼠，间隔4周后用流式细胞术和ELISA技术检测T细胞分型及体液免疫反应。结果（1）IFN-γ水平：BCG初免后14周，特异性抗原Ag85B刺激后实验2组分泌IFN-γ的细胞数（135±14）明显高于仅BCG免疫组（19±16），t=10．98，P〈0．01；BCG初免后22周，实验2组（208±11）同样高于仅BCG免疫组（57±18），t=6．43，P〈0．01。（2）体液免疫应答水平：实验2组的IgG1抗体滴度明显高于实验1组，而作为反映Th1型免疫反应指标的IgG2a／IgG1比值，强化免疫两次组低于强化一次组。（3）BCG模拟攻击被免疫小鼠后，CD4^＋CD25^＋调节性T细胞含量：实验1、2组均高于仅BCG免疫组（t1=3．08，t2=3．16，P〈0．05）。结论BCG免疫-AMM亚单位疫苗加强免疫两次能够引起较强的细胞及体液免疫反应，同时激活调节性免疫反应。
- 姜雯雯景涛于红娟李青易娟雒彧宋楠楠张颖祝秉东
- 关键词：亚单位疫苗融合蛋白BCG免疫策略加强免疫
- 分枝杆菌所致家兔皮肤液化病理模型研究被引量：10
- 2008年
- 目的建立卡介苗(BCG)、H37Ra和耻垢分枝杆菌感染的新西兰兔皮肤模型,为肺结核干酪样坏死和继而发生的液化提供研究模型。方法新西兰兔皮内分别注射BCG、H37Ra和耻垢分枝杆菌的5×106CFU、5×104CFU、5×102CFU/ml菌液,6周后在病灶周围再次以相同剂量皮内注射,14d后病变明显时取材,制作切片,行HE染色,显微镜下观察。结果新西兰兔分别经皮内接种BCG、H37Ra或耻垢分枝杆菌后,高剂量组观察到明显的炎症反应和脓肿液化、破溃等改变。再次免疫可观察到郭霍现象。引起病变的严重程度依次为BCG强于H37Ra,后者又强于耻垢分枝杆菌。显微改变可具典型的结核结节样病灶。皮肤模型处取材,行细菌抗酸染色,结果阳性。BCG中、低剂量组再次免疫可诱导小结节样病变,但不发生液化溃疡,其余中剂量组及低剂量组没有观察到明显改变。结论BCG、H37Ra和耻垢分枝杆菌均可引起皮肤干酪样坏死和液化,病理损伤与感染细菌剂量密切相关,5×106CFU/ml浓度的分枝杆菌可有效诱导液化和坏死,其中BCG引起的病理改变最明显。
- 王明珠史大中杨爱军焦志刚祝秉东张颖
- 关键词：结核病分枝杆菌病理新西兰兔
- 二甲基三十六烷基铵及卡介苗多糖核酸佐剂在结核亚单位疫苗加强BCG免疫中的效应研究被引量：6
- 2010年
- 目的 探讨二甲基三十六烷基铵（dimo-thylidioctyl ammonium bromide,DDA）和卡介苗多糖核酸（BCC-PSN）佐剂在结核融合蛋白疫苗加强卡介苗（BCG）免疫中的不同免疫辅助效应.方法 选择DDA、BCG-PSN作为融合蛋白AMM（Ag85B-MPT64190-198-Mtb8.4）的佐剂,在BCG初免小鼠后,AMM疫苗加强免疫两次,其中一组联合使用两种佐剂（DDA/BCG-PSN）,另一组单独以DDA作为佐剂,同时设立BCG或磷酸缓冲液（PBS）免疫组为对照.应用ELISA及ELISPOT检测免疫小鼠的体液与细胞免疫反应,最后一次加强免疫后第12周,以H37Rv尾静脉攻毒并检测小鼠肺脾组织细菌载量和病理改变,评价不同佐剂疫苗的保护效果.结果 在BCG初免基础上,联合佐剂组（AMM/DDA/BCG-PSN）和单独佐剂组（AMM/DDA）加强免疫两次后,脾脏淋巴细胞经抗原Ag85B和PPD（purified protein derivative）刺激后,皆可产生分泌较BCG组高的IFN-γ.毒力株攻击后菌落形成单位（colony-forming unit,CFU）计数显示,联合佐剂组（AMM/DDA/BCG-PSN）脾脏荷菌量少于PBS组和BCG组（P〈0.05）;而单独佐剂组（AMM/DDA）肺部荷菌量少于PBS组和BCG组（P〈0.05）.组织病理分析结果 表明AMM/DDA/BCG-PSN组肺组织病理损伤较轻,而AMM/DDA组病理损伤个体差异较大.结论 DDA是较为理想的结核亚单位疫苗佐剂,能诱导较强的细胞免疫和免疫保护作用;BCG-PSN可能具有免疫调节作用,可以减轻免疫病理损伤.
- 达泽蛟胡丽娜王秉翔姜雯雯傅林锋于红娟雒彧祝秉东
- 关键词：结核分枝杆菌亚单位疫苗佐剂
- 结核分枝杆菌融合蛋白亚单位疫苗对BCG初始免疫的加强效应及保护效力被引量：1
- 2010年
- 目的探讨结核分枝杆菌融合蛋白亚单位疫苗对BCG初始免疫的加强效应及保护效力。方法将Ag85B、Ag85B-Mpt64190-198-HspX(AMH)、Ag85B-Mpt64190-198-Mtb8.4(AMM)以及AMH+AMM蛋白分别与佐剂二甲基三十六烷基铵(DDA)和卡介苗多糖核酸(BCG-PSN)混合,制备亚单位疫苗。第0周用BCG皮下免疫C57BL/6小鼠,第8、10周分别用各蛋白疫苗皮下加强免疫,以PBS和BCG(仅免疫1次)作为对照。末次免疫后4周,采血检测血清抗体水平,并分离脾淋巴细胞,检测分泌IFNγ的水平;末次免疫后12周,经尾静脉注射H37Rv株,6周后取肺,进行菌落计数,抗酸及HE染色观察。结果各亚单位疫苗加强组诱导产生的特异性抗Ag85BIgG抗体水平均明显高于BCG组;融合蛋白疫苗加强组免疫小鼠脾细胞经Ag85B和PPD刺激后,产生分泌IFNγ的淋巴细胞数明显多于BCG组;融合蛋白加强组免疫小鼠肺组织结核结节面积与BCG组比较,差异无统计学意义;仅AMM+AMH加强组免疫小鼠肺组织菌落计数明显低于BCG组,其抗酸染色阳性细菌数明显低于PBS、BCG及AMH、Ag85B加强组。结论AMH和AMM疫苗联合加强BCG免疫,能诱导小鼠特异性的细胞免疫和体液免疫应答,具有较强的免疫原性,可增强BCG的保护效力。
- 李青傅林锋王秉翔姜雯雯于红娟雒彧张颖祝秉东
- 关键词：结核分枝杆菌融合蛋白亚单位疫苗
- 细粒棘球绦虫Eg95重组非分泌型和分泌型分枝杆菌疫苗的构建被引量：4
- 2008年
- 目的分别构建细粒棘球绦虫Eg95重组非分泌型和分泌型卡介苗及耻垢分枝杆菌疫苗。方法分别以卡介苗(BCG)基因组DNA和PGEX-4T-Eg95为模板,PCR扩增获120bp的BCG抗原85B信号肽序列和423bp的Eg95基因序列。先将Eg95基因序列定向克隆至大肠埃希菌-分枝杆菌穿梭质粒pMV261,构建非分泌型重组质粒pMEg95。再将BCG-Ag85B信号肽序列定向克隆至pMEg95,构建分泌型重组质粒pSMEg95。电穿孔法将两型重组质粒分别导入BCG菌及耻垢分枝杆菌。结果双酶切、PCR扩增及测序鉴定证实,克隆基因Eg95序列和Ag85B信号肽序列正确插入载体PMV261,细粒棘球绦虫Eg95重组非分泌型和分泌型分枝杆菌疫苗构建成功。结论构建了含有Eg95基因序列和BCG-Ag85B信号肽序列的细粒棘球绦虫Eg95重组非分泌型和分泌型分枝杆菌疫苗。
- 刘小荣景涛李苗宋楠楠王明珠祝秉东
- 关键词：细粒棘球绦虫EG95卡介苗耻垢分枝杆菌
