国家高技术研究发展计划(2006AA02Z415)
- 作品数：7 被引量：4H指数：1
- 相关作者：管晓虹仇镇宁李玉华冯振卿顾春艳更多>>
- 相关机构：南京医科大学中国人民解放军南京军区军事医学研究所中国疾病预防控制中心更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学更多>>
- 抗日本血吸虫单克隆抗体NP11-4人／鼠嵌合Fab抗体片段的制备及功能鉴定被引量：2
- 2009年
- 目的:构建日本血吸虫单克隆抗体NP11-4的人/鼠嵌合Fab(cFab)抗体片段,并对cFab抗体片段结合活性进行鉴定。方法:用抗体框架区的通用引物PCR扩增抗日本血吸虫单克隆抗体NP11-4的VH及VL基因,测序分析其核苷酸序列。将测序正确的鼠源VH、VL分别与人IgG1的CH1、CL通过Overlap PCR扩增Fd及全长L,再利用Overlap PCR以Fd和全长L基因为模板扩增cFab基因。将cFab基因片段克隆至载体pComb3XSS中构建表达载体pComb3XSS-Fab,经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导进行蛋白可溶性表达。通过Westernblot和ELISA方法对cFab抗体片段进行检测。结果:构建出抗日本血吸虫单克隆抗体NP11-4 cFab表达载体,Westernblot结果证实在大肠杆菌Top10F′中表达出cFab可溶性抗体片段,ELISA结果显示cFab抗体片段与可溶性虫卵抗原(SEA)有较好的结合活性。结论:表达、纯化了抗日本血吸虫单克隆抗体NP11-4cFab抗体片段,cFab抗体片段具有与亲本抗体相同的抗原结合能力,为制备抗日本血吸虫人源化免疫毒素提供了技术贮备。
- 顾春艳李红任勇亚许静朱晓娟李玉华仇镇宁王祝鸣朱进戚晓红管晓虹冯振卿
- 关键词：日本血吸虫可变区基因
- 血吸虫病治疗性抗体的研发
- 2013年
- 血吸虫病仍是影响我国人民群众身体健康和社会经济发展的重大公共卫生问题。随着大型水利工程造成生态环境的改变及流动人口的剧增，将可能导致钉螺面积回升和人、畜感染机会增加，我国血吸虫病防治工作面临严峻的挑战。
- 关键词：血吸虫病治疗性抗体大型水利工程公共卫生身体健康人民群众
- 可溶性虫卵抗原对小鼠骨髓源性树突状细胞表型及Th17细胞分化的影响
- 2012年
- 目的 :探讨日本血吸虫可溶性虫卵抗原(soluble egg antigen,SEA)致敏小鼠骨髓源性树突状细胞(dendritic cells,DCs)后对其细胞表型及Th17细胞分化的影响。方法 :收集BALB/c小鼠骨髓细胞,应用粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(granulocyte-macrophage colony stimulating factor,GM-CSF)、白介素(interleukin,IL)-4定向诱导小鼠骨髓细胞向DCs分化;流式细胞仪检测SEA刺激培养后DCs表面分子的表达情况;流式细胞术检测DCs分泌IL-6、IL-23的水平,ELISA法检测DCs分泌转化生长因子-β(transforming growth factor-β,TGF-β)的水平;SEA刺激DCs与CD4+T细胞共培养后检测培养上清中IL-6、TGF-β、IL-23和IL-17细胞因子水平。结果:诱导培养出可供实验用的高纯度DCs;SEA刺激DCs能表达较高水平的CD80、CD86、CD40、组织相容性复合体(major histocompatibility complex,MHC)-Ⅱ类分子;SEA刺激DCs产生IL-6和TGF-β明显增多;SEA刺激的共培养细胞上清中IL-17水平增高。结论:SEA能够促进DCs成熟,并诱导CD4+T细胞向Th17细胞分化。
- 薛冰徐璐周亮仇镇宁唐奇李玉华王祝鸣朱进冯振卿管晓虹
- 关键词：日本血吸虫可溶性虫卵抗原树突状细胞TH17细胞
- 日本血吸虫抗独特型抗体NP30对急性血吸虫病的免疫治疗作用被引量：1
- 2009年
- 目的探讨日本血吸虫抗独特型抗体NP30对急性血吸虫病的免疫治疗作用。方法根据L9(34)正交表设计动物实验,日本血吸虫尾蚴感染C57BL/6小鼠后注射抗独特型抗体NP30,观察不同治疗方案各组小鼠的存活时间并计算不同时间段的生存率,取小鼠肝脏石蜡切片,HE染色,测量小鼠单个虫卵肉芽肿的直径及面积。结果各实验组小鼠的生存中位数为45～78d,其中第4组生存中位数为71d,比同样感染40条尾蚴的对照组2(53d)延长了33.96%。Cox回归分析显示小鼠存活时间主要与尾蚴感染水平、抗体注射途径有关(P均<0.05)。各实验组小鼠单个虫卵肉芽肿平均直径为179.07～226.86μm,平均面积为(32.11～51.37)×103μm2;对照组各组小鼠单个虫卵肉芽肿平均直径为205.89～239.86μm,平均面积为(44.61～57.24)×103μm2。极差分析及方差分析均显示抗独特型抗体NP30的注射方式和注射剂量是影响虫卵肉芽肿平均直径和面积的主效应因素。NP30的最佳免疫治疗方案为感染尾蚴28d后,以每鼠每只20μg的剂量连续3次肌肉注射。结论抗独特型抗体NP30可改善血吸虫感染小鼠的生存状况,降低血吸虫对宿主造成的免疫病理损害,具有治疗急性血吸虫病的潜能。
- 许静朱晓娟顾春艳李红戴洋李玉华仇镇宁管晓虹朱荫昌冯振卿
- 关键词：日本血吸虫急性血吸虫病抗独特型抗体正交设计
- 日本血吸虫单克隆抗独特型抗体NP30单特异性双链抗体的构建 表达与初步鉴定
- 2009年
- 目的构建和表达日本血吸虫单克隆抗独特型抗体NP30单特异性双链抗体,初步鉴定表达产物的活性。方法用overlap PCR法扩增双链抗体基因VH-GGGGS-VL,将双链抗体基因重组入原核表达载体pBAD/gⅢ。表达质粒转化E.coli TOP10F′,左旋阿拉伯糖诱导表达。对表达产物进行分离纯化,ELISA检测纯化蛋白与血吸虫病人血清抗体的结合活性。结果测序证实双链抗体基因正确,构建了双链抗体的原核表达系统,双链抗体在细菌超声上清和沉淀内均有表达,分子量约为34kD。纯化产物经ELISA鉴定,结果表明NP30单特异性双链抗体可与血吸虫病人血清抗体特异性结合。结论构建和表达的日本血吸虫单克隆抗独特型抗体NP30单特异性双链抗体具有与亲本单抗相同的结合活性。
- 朱晓娟许静李红顾春艳唐奇李玉华仇镇宁王祝鸣朱进冯振卿管晓虹
- 关键词：日本血吸虫抗独特型抗体蛋白表达
- NP30/抗体检测试剂盒在云南大山区型血吸虫病流行区的现场应用
- 2008年
- 吴玉龙仇镇宁管晓虹
- 关键词：血吸虫病免疫诊断
- 抗日本血吸虫单链抗体免疫毒素的构建 表达及生物学活性鉴定被引量：1
- 2010年
- 目的构建抗日本血吸虫单克隆抗体NP11-4单链抗体和绿脓杆菌外毒素衍生物PE38KDEL的原核融合表达载体,并对其表达产物进行生物学活性鉴定。方法应用PCR方法体外扩增NP11-4VH、VL、scFv和PE38KDEL基因,经测序后将scFv及PE38KDEL基因通过限制性内切酶双酶切及连接反应,构建原核表达载体pBAD/gIIIA-scFv-PE38KDEL,转化E.coliTop10F′,L-阿拉伯糖诱导表达,表达产物经Western blot及ELISA鉴定其活性。结果构建了重组免疫毒素表达载体pBAD/gIIIA-scFv-PE38KDEL,诱导表达产物主要以包涵体形式存在,分子量约为70kD;经变性、复性后的重组免疫毒素与血吸虫可溶性虫卵抗原有较好的结合活性。结论构建及表达了抗日本血吸虫单链抗体免疫毒素,为血吸虫病治疗提供了一条新思路。
- 李红朱晓娟顾春艳任勇亚许静王忠灿李玉华仇镇宁朱进冯振卿管晓虹
- 关键词：日本血吸虫SCFVPE38KDEL重组免疫毒素
