安徽省教育厅重点项目(2006KJ087A)
- 作品数：6 被引量：22H指数：4
- 相关作者：黄蓓任艳敏谭阳胡玲王永中更多>>
- 相关机构：安徽大学中国科学院安徽医科大学附属省立医院更多>>
- 发文基金：安徽省教育厅重点项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 藻蓝蛋白亚基脂质体制备及其光动力学抗肿瘤作用实验被引量：10
- 2008年
- 本研究建立了藻蓝蛋白亚基脂质体的制备方法，检测其对肿瘤细胞转染及光动力杀伤作用（PDT）效果。采用薄膜水合．超声分散法制备藻蓝蛋白亚基脂质体，测定其粒径大小及分布，荧光显微镜观察藻蓝蛋白亚基（PCS）及其脂质体（PCS—lip）的细胞转染率，M1T法检测藻蓝蛋白亚基及其脂质体对肿瘤细胞光动力杀伤效果。结果显示脂质体的粒径为80～160nm，包封率为42．3％；在质量浓度为100ug·mL^1时，藻蓝蛋白亚基脂质体对小鼠肉瘤细胞S180转染率在2h达到（18．5±0．8）％，4h为（23．1±0．9）％，5～6h转染率不再上升。肿瘤细胞光动力杀伤实验表明，在0～200ug·mL^-1内，光照剂量为22J·cm^-2时，随着藻蓝蛋白亚基及其脂质体浓度的增加，对胃癌细胞BGC-823和S180的光敏作用也随之增强；在200ug·mL^-1时PCS—lip对两种细胞生存率分别降低为（45±5．2）％和（36±5．5）％，PCS—lip—PDT组与PCS—PDT组对细胞生存率影响有显著性差异（P〈0．05）。研究结果表明，藻蓝蛋白亚基脂质体可很好地保持藻蓝蛋白亚基的生物活性，在相同蛋白浓度时藻蓝蛋白亚基脂质体比藻蓝蛋白亚基更快地转染进肿瘤细胞，药物作用的最佳时间为4h。在相同浓度及光照剂量的情况下，藻蓝蛋白亚基脂质体对肿瘤细胞的光动力学作用略强于藻蓝蛋白亚基。
- 郭瑞勇黄蓓左漫漫王永中胡玲
- 关键词：脂质体细胞转染光动力学疗法
- LKB1(Thr336)磷酸化多克隆抗体的制备及其应用被引量：4
- 2008年
- 目的制备LKB1(Thr336)磷酸化多克隆抗体,并以其检测细胞中LKB1的表达。方法用生物信息学方法选取LKB1Thr336位点附近10个氨基酸,且使Thr336位点磷酸化,并铰链到BSA上。以此为抗原免疫家兔,制备抗血清,纯化后通过ELISA法检测抗体效价,Westernblot法检测抗体特异性,并用LKB1抗体和p-LKB1(Thr336)抗体分别检测正常细胞及肿瘤细胞中LKB1的表达。结果纯化后的p-LKB1(Thr336)抗体效价为1∶1000;LKB1抗体不仅识别His-LKB1蛋白,而且识别p-LKB1(Thr336)抗原,而p-LKB1(Thr336)抗体仅识别p-LKB1(Thr336)抗原;在正常细胞HL7702和HEK293中,LKB1表达较多,而在HeLa细胞中,LKB1基本没有表达;在这3种细胞中,p-LKB1(Thr336)基本没有表达;在肿瘤细胞S180、COS-7和Caco2中,LKB1和p-LKB1(Thr336)均有表达,p-LKB1表达相对较多。结论已制备了特异性的p-LKB1(Thr336)多克隆抗体,LKB1-Thr336位点的磷酸化可能是某些肿瘤发生的特征,有望成为肿瘤诊断的指标之一。
- 任艳敏黄蓓魏浩赖柳静
- 关键词：磷酸化多克隆抗体生物信息学肿瘤细胞
- 藻胆蛋白色素肽与癌光啉光敏作用的比较实验被引量：7
- 2006年
- 目的:比较藻胆蛋白色素肽与癌光啉photofrinⅡ的光动力学疗法(photodynam ic therapy,PDT)效果与日光光敏作用。方法:分析藻胆蛋白酶解产物藻红蛋白R-PEβ亚基、藻蓝蛋白的CCP1、CCP3片段与photofrinⅡ的光谱特性,用MTT等方法检测其对小鼠S180细胞、小鼠移植瘤的PDT杀伤作用及对小鼠骨髓细胞、水蚤的日光光毒性。结果:photofrinⅡ在250 nm-650 nm区间有多个吸收峰,在紫外光区有很强的吸收峰,而三种蛋白酶解产物的光谱较单一,其中R-PEβ亚基、CCP1在可见光区有1~2较强的吸收峰;当光敏剂在瘤体旁注射量为50μg/个(瘤体),He-Ne激光照射剂量为120 J/cm2,瘤体大小在直径为0.5 cm^0.7 cm,phofofrinⅡ、CCP1、CCP3在照射后7天的抑瘤率分别为61%、46%及81%;用广谱性碘钨灯为光源,当光敏剂的浓度为100μg/mL,光照剂量为45 J/cm2,photofrinⅡ对小鼠S180细胞及骨髓细胞的光敏杀伤作用分别为20%及33%,而R-PEβ亚基则分别为68%及95%;如果用100μg/mL的CCP1、CCP3、photofrinⅡ及不同照射剂量的碘钨灯为激发光源处理水蚤,结果发现,光毒性对水蚤生存率长短的影响具时间积累效应,在相同光照强度条件下,photofrinⅡ的光毒性最大,CCP3次之,CCP1最弱。结论:藻胆蛋白酶解产物R-PEβ亚基、CCP1、CCP3光谱单一、PDT作用效果良好、毒副作用弱且具一定的荧光活性可作为新一代光敏剂选择的对象。
- 黄蓓张平孙兆奇王广策
- 14-3-3 zeta蛋白C-端多肽抗体的制备与鉴定
- 2007年
- 目的制备14-3-3 zeta蛋白C-端多肽多克隆抗体,并鉴定其特异性。方法用生物信息学分析14-3-3 zeta蛋白的同源性、亲水性和抗原性,设计并合成zeta蛋白C-端特异性的氨基酸序列,将其与牛血清白蛋白铰链;分别转化14-3-3的7个亚型质粒于大肠杆菌BL21(DE3)中,经IPTG诱导表达,并分离纯化His-zeta融合蛋白;分别以zeta C-端多肽及zeta融合蛋白为抗原,免疫新西兰大耳白兔,制备多克隆抗体;用Western blot分析zeta蛋白C-端多肽抗体亚型特异性,并用该特异性抗体检测zeta蛋白在COS-7细胞中的分布规律。结果在14-3-3的7个亚型蛋白存在的条件下,zeta蛋白C-端多肽抗体仅识别zeta亚型蛋白,而zeta融合蛋白抗体可以识别gamma、zeta、tau3种亚型;14-3-3zeta蛋白主要分布在COS-7细胞质一侧。结论已获得了亚型特异性的14-3-3zeta多克隆抗体,该抗体可用于14-3-3zeta免疫细胞化学等分析。
- 吴东明黄蓓谭阳谭振
- 关键词：多克隆抗体生物信息学特异性
- Photofrin Ⅱ介导的光动力对骨肉瘤细胞的抑制作用
- 2009年
- 目的 研究光敏剂PhotofrinⅡ对骨肉瘤细胞株的抑制作用及相关光照条件参数。方法不同浓度梯度的Phot—ofrinⅡ孵育骨肉瘤细胞，He—Ne激光器照射后，使用MTT法测定骨肉瘤细胞的生存率。结果PhotofrinⅡ光动力作用于骨肉瘤细胞后，在浓度25μg／ml时可明显抑制细胞生长。结论PhotofrinⅡ产生的光动力作用可以有效抑制骨肉瘤细胞的生长，从而为临床运用光动力治疗骨肉瘤提供实验基础。
- 夏睿黄蓓周桃孔荣方诗元李守民
- 关键词：PHOTOFRIN
- 藻蓝蛋白亚基细胞渗透性及对肿瘤细胞光敏作用的研究被引量：8
- 2007年
- 目的:研究藻蓝蛋白亚基对SP2/0、S180、COS7、C6的最佳渗透条件及由其介导的PDT对肿瘤细胞的抑制作用。方法:采用柱层析方法从藻蓝蛋白样品中分离得到藻蓝蛋白亚基,通过荧光显微镜观察其在细胞内的渗透特性,并以He-Ne激光器为激发光源,MTT法检测藻蓝蛋白亚基光敏作用对肿瘤细胞生长的抑制作用。结果:藻蓝蛋白α、α/β亚基在75μg/mL浓度下可以在4 h时充分地进入细胞,并可以在细胞内稳定2 h以上;藻蓝蛋白中的α,β亚基稳定性和作用不相同,β亚基荧光性强但易于降解,由α亚基介导的PDT作用比α/βPDT作用强;100μg/mLα亚基介导的PDT对SP2/0和S180两种悬浮细胞的抑制率可分别达到78.6%和39.8%,强于贴壁细胞C6和COS7的29.2%和17.8%。结论:藻蓝蛋白α亚基在合适的渗透条件下表现出较强的光动力学抗肿瘤效果,且PDT效果与光敏剂浓度、照射剂量及细胞类型相关。
- 谭阳黄蓓任艳敏刘康武
- 关键词：PDT肿瘤抑制
