天津市自然科学基金(07JCZDJC07500)
- 作品数：5 被引量：8H指数：2
- 相关作者：王宝利李晓霞郑纺邱明才郭善一更多>>
- 相关机构：天津医科大学天津医科大学代谢病医院天津医科大学总医院更多>>
- 发文基金：天津市自然科学基金天津市高等学校科技发展基金计划项目国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 适用于shRNA表达研究的克隆载体构建
- 2008年
- 目的:建立一种适用于shRNA表达研究的克隆载体。方法:通过PCR扩增一段含有自杀基因ccdB和卡那霉素抗性基因的DNA序列,将其双酶切后克隆至shRNA表达载体pSilencer3.1-H1neo中,得到重组体pSilencer3.1-ccdB。运用此重组体构建荧光素酶的shRNA表达载体并设立对照进行非重组背景的结果比较。结果:成功建立了pSilencer3.1-ccdB克隆载体。应用此载体构建荧光素酶的shRNA的表达载体,结果显示完全消除了非重组背景。结论:建立了适用于shRNA表达研究的克隆载体,为进一步研究siRNA的基因功能奠定了基础。
- 焦艳丽李晓霞孙紫阳王宝利郭善一
- 关键词：SHRNA
- BMP2与BMP7嵌合表达产物可诱导成骨细胞分化被引量：4
- 2009年
- 目的:构建骨形态发生蛋白(BMP)2与BMP7嵌合表达的分泌型基因载体pcDNA3-BMP2/7,检测表达产物的成骨诱导活性。方法:聚合酶链反应(PCR)扩增BMP2与BMP7的成熟肽编码基因,利用重叠延伸PCR以柔性肽(Gly4Ser)3编码序列使两者嵌合并克隆到质粒pcDNA3/sec上,转染CHO-K1细胞筛选得到稳定克隆,以其条件培养基处理鼠胚胎成纤维细胞C3H10T1/2,通过RT-PCR研究BMP2/7嵌合表达产物的活性。结果:BMP2/7嵌合表达产物可以明显提高C3H10T1/2细胞碱性磷酸酶(Alkalinephos phatase,ALP)、骨钙素(Osteocalcin,Oc)成骨细胞表型基因以及特异性转录因子Runx2(runt-related transcription factor2)mRNA的表达(P<0.01)。结论:制备的BMP2/7嵌合表达产物能够形成异源二聚体,诱导非骨源性细胞向成骨细胞分化。
- 胡丽玲李晓霞张镜宇王宝利
- 关键词：骨形态发生蛋白质类成骨细胞细胞分化
- 前列腺素E2调节大鼠成骨细胞OCIL基因表达的信号通路研究被引量：2
- 2011年
- 探讨前列腺素E2（PGE2）对大鼠成骨细胞破骨细胞抑制性凝集素（osteoclast inhibitory lectin OCIL）mRNA表达的调节及其信号转导机制。培养大鼠原代成骨细胞和UMR106成骨细胞样细胞，采用不同浓度的PGE2和不同的信号通路调节剂干预细胞后，提取细胞总RNA，采用实时荧光定量PCR检测OCIL mRNA的表达水平。PGE2、蛋白激酶A（PKA）激动剂福司可林、db—cAMP和钙离子载体A23187均促进OCIL mRNA表达，OCIL mRNA最大上调幅度分别为对照组的2．38倍、4．2倍、4．5倍和5．1倍（均P〈0．01）。蛋白激酶c（PKC）激动剂PMA下调OCIL mRNA表达约50％（P〈0．01）。PKA抑制剂KT-5720、钙通道阻断剂维拉帕米、钙调蛋白抑制剂W7和丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）阻断剂PD98059分别下调PGE，诱导的OCIL mRNA表达约56％、40％、65％和60％（均P〈0．01）。PKC抑制剂白屈菜红碱促进PGE2诱导的OCIL mRNA表达约30％（P〈0．05）。PKA、MAPK和Ca^2＋／钙调蛋白信号通路介导了PGE2诱导的大鼠成骨细胞OCIL基因表达。
- 权金星王宝利郑纺邱明才
- 关键词：前列腺素E2信号通路成骨细胞
- 乳腺癌细胞通过PTHrP调节成骨细胞MCP-1基因表达被引量：1
- 2010年
- 目的:探讨乳腺癌细胞分泌的甲状旁腺激素相关蛋白(PTHrP)对成骨细胞单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)基因表达的调节作用。方法:首先将10-8mol/L剂量的PTHrP(1-34)作用于成骨细胞UMR106,同时设立对照组,半定量RT-PCR法分析对不同时间成骨细胞的MCP-1mRNA表达;之后构建PTHrP受体(PTH1R)的shRNA重组质粒PTH1R/pRNAT,将其转染至成骨细胞UMR106,建立稳定表达的细胞系PTH1R/UMR106;将乳腺癌细胞MDA-MB231条件培养基(CM)分别作用于UMR106和PTH1R/UMR106,半定量RT-PCR法测定MCP-1的mRNA表达。结果:PTHrP可以促进成骨细胞MCP-1的表达,起始于3h,6h到达高峰(P<0.05)。乳腺癌细胞CM作用UMR106成骨细胞6h后,MCP-1表达水平也较未处理组明显升高(分别为1.2381±0.1155和0.5984±0.0364,P<0.05),而采用RNA干扰技术敲减PTH1R表达后,乳腺癌细胞CM对成骨细胞MCP-1表达的作用明显减弱(降低至0.8672±0.0457,P<0.05)。结论:乳腺癌细胞可通过PTHrP调节成骨细胞MCP-1。
- 张珊珊李晓霞王宝利
- 关键词：甲状旁腺素蛋白质类成骨细胞
- 破骨细胞抑制性凝集素胞外段可抑制骨髓干细胞向破骨细胞分化被引量：1
- 2010年
- 目的:在大肠杆菌中表达人破骨细胞抑制性凝集素(OCIL)胞外段重组蛋白,体外检测表达的重组蛋白活性。方法:通过修改OCIL胞外段编码的碱基序列和重组PCR方法得到连续DNA片段;将表达载体pMAL-c2x/hOCIL转化入BL21(DE3)plysS宿主菌,IPTG诱导表达。利用直链淀粉亲和层析柱分离纯化,Western blotting鉴定重组蛋白。体外培养小鼠股骨骨髓细胞,在巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)和核因子κB受体活化因子配基(RANKL)诱导骨髓细胞向破骨细胞分化的基础上,加入不同浓度的重组蛋白,观察其对破骨细胞样细胞生成的影响。结果:重组菌中确有融合蛋白MBP-hOCIL表达,其中目的蛋白占纯化液总蛋白的91.36%,纯化后重组融合蛋白产率为24.3mg/L培养基;所制备的重组蛋白对小鼠骨髓破骨细胞样细胞的形成有抑制作用。结论:本研究通过基因工程的方法成功获得了hOCIL胞外段重组蛋白,此蛋白在体外可以明显抑制破骨细胞样细胞的形成。
- 刘瑞戴晨琳郑纺郭善一王宝利邱明才
- 关键词：破骨细胞重组蛋白质类巨噬细胞集落刺激因子核因子ΚB受体活化因子
