广东省自然科学基金(D07300239)
- 作品数：2 被引量：1H指数：1
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- 相关机构：华南基因组研究中心南方医科大学广州军区广州总医院更多>>
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- HPV病毒检测分型芯片的研制和优化
- 2009年
- 研制和优化寡核苷酸芯片以初步实现对多种常见HPV（Human papillomavirus）病毒的分型检测．应用生物学软件对四型常见HPV病毒（6、11、16、18型）的全基因组序列进行分析，设计具有型特异性、熔解温度（Tm）相近的-60mer寡核苷酸探针，对玻片片基进行优化处理后，点样制备成寡核苷酸基因芯片．将含HPV全长基因序列的质粒作为阳性标准品，利用梯度限制性荧光标记技术对其进行荧光标记，标记好的样品与芯片杂交．结果显示HPV样品与相应的型特异性探针杂交有明显的荧光信号，而与阴性对照探针和空白对照探针没有杂交信号．通过对芯片片基处理和样品荧光标记方法的优化，可以提高芯片检测的杂交特异性和荧光信号强度．
- 危敏马文丽孙朝晖张晋芳李凌郑文岭
- 关键词：寡核苷酸芯片
- 应用DNA芯片鉴定HPV18 E6-siRNA诱导HeLa细胞凋亡的分子机制被引量：1
- 2008年
- 高危型人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)的E6基因在宫颈癌的发生中起关键作用,特异siRNA能有效抑制宫颈癌HeLa细胞内HPV18E6基因的表达,诱导肿瘤细胞凋亡.为进一步探讨HPV18E6-siRNA诱导HeLa细胞凋亡的分子机制,针对HPV18E6基因设计siRNA序列,利用人源U6启动子为模板,经PCR表达框架法体外扩增,转染宫颈癌HeLa细胞抑制HPV18E6基因表达,从而诱导肿瘤细胞凋亡.对转染前后HeLa细胞总RNA样品进行荧光标记后,与Agilent Human1A寡核苷酸芯片杂交、扫描、数据分析及标准化处理,确定表达差异的基因并经荧光定量PCR对部分基因进行验证,结合PANTHER数据分析系统,将这些基因按照生物学功能进行归类,查阅GenBank数据库及相关文献,对其结果进行深入分析及讨论.在检测的18 716个基因和EST中,共筛出差异表达基因359个,其中307个基因表达上调,52个基因表达下调,主要包括细胞周期相关基因CCNG1、p21;凋亡相关基因CASP4、CASP6、IGFBP3、DFFA;泛素蛋白酶解途径相关基因E6-AP、UBE2C;角化细胞分化相关基因KRT4、KRT6E、KRT18;抑癌基因RECK、VHL等.研究结果表明,HPV18E6基因抑制引起的细胞凋亡效应主要是通过P53信号途径和泛素蛋白酶解信号途径调节细胞周期相关基因和凋亡相关基因的表达,从而抑制HeLa细胞增殖、促进细胞凋亡.同时,抑癌基因的激活,角化细胞分化和免疫相关基因的表达上调,都说明了E6抑制后肿瘤细胞恶性转化程度的下降.
- 危敏马文丽李凌郑文岭
- 关键词：HPV18E6基因细胞凋亡
