国家自然科学基金(30271186)
- 作品数：9 被引量：20H指数：3
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- 相关机构：第四军医大学第四军医大学西京医院西北大学更多>>
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- 抗人IgG单克隆抗体的制备及鉴定被引量：4
- 2006年
- 目的:制备高效价的抗人IgG单克隆抗体(mAb),并用于肾脏免疫性疾病的免疫荧光诊断。方法:以人IgG全长分子免疫BALB/c小鼠,按常规方法进行细胞融合,经筛选及克隆化,建立可稳定分泌抗IgGmAb的杂交瘤细胞株。用ELISA及Westernblot鉴定mAb的特性(效价、Ig亚类、特异性及相对亲和力)。以纯化的mAb建立免疫荧光染色法,并用于肾小球肾炎的诊断。结果:筛选到1株可稳定分泌抗人IgGmAb的细胞株,腹水效价为1×10-6,Ig亚类为IgG2a(κ),相对亲和力达到1×10-5,Westernblot显示在相对分子质量(Mr)为53×103处出现特异性的条带,说明mAb能与IgG的γ链特异性结合。免疫荧光染色的结果显示,IgG分子在肾小球肾炎的活检组织中表达。结论:获得1株能特异性识别人IgG的mAb,可用于肾脏免疫性疾病的病理诊断。
- 段春光杨守京余璐吴艺舟刘彦仿
- 关键词：IGG单克隆抗体肾小球肾炎
- 汉坦病毒诱导人脐静脉内皮细胞HSP70的表达及意义被引量：7
- 2005年
- 目的: 研究人脐静脉内皮细胞 (HUVEC)感染汉坦病毒(Hantavirus, HTV)后应激反应的规律及意义。方法: 采用免疫细胞化学染色法和核酸分子原位杂交, 检测热休克蛋白 70(HSP70)的表达; 用RT --PCR观察HSP70mRNA水平变化的规律。结果: HTV感染HUVEC后, 免疫细胞化学染色法可检出HSP70呈高表达, 原位杂交发现细胞质内有HSP7mRNA的阳性信号。感染后不同时间点RT- PCR的结果表明与对照组相比较, HSP70mRNA的水平在感染后迅速升高并持续高表达 (P<0. 05 )。结论: HTV可诱导HUVEC高表达HSP70。HSP70可能具有抑制病毒复制和保护内皮细胞的作用。
- 余璐马恒刘彦仿杨守京
- 关键词：汉坦病毒人脐静脉内皮细胞热休克蛋白70
- Hsp70与汉滩病毒S基因融合蛋白的原核表达及免疫小鼠的初步研究被引量：1
- 2006年
- 本文构建了hsp70与S基因的原核融合表达载体pGEX-4T-1/hsp70-S,在大肠杆菌中表达,并通过GSTrapFF柱进行了纯化。同时制备了NP和Hsp70两种纯化蛋白。分别用这三种纯化蛋白免疫BALB/c小鼠,结果表明纯化的NP和Hsp70-NP两种蛋白均可同时诱导产生抗汉滩病毒核蛋白(NP)抗体,且后者刺激产生的抗体效价明显高于前者。淋巴细胞增殖实验表明,两组免疫小鼠的脾细胞均能够对体外抗原刺激产生增殖反应,而Hsp70-NP组免疫小鼠脾细胞对NP的增殖指数明显高于NP组免疫组。结果显示,与单独用NP免疫小鼠相比,Hsp70-NP纯化蛋白可以刺激机体产生更强的抗汉滩病毒体液免疫应答和特异性淋巴细胞增殖反应。
- 李静叶正旭杨守京高娟刘彦仿
- 关键词：热休克蛋白原核表达
- 抗人免疫球蛋白G多克隆荧光抗体的制备及在肾活检中的应用
- 2005年
- 目的:制备抗人免疫球蛋白G(IgG)多克隆荧光抗体,并用于肾病的病理诊断。方法:以免疫新西兰兔制备多克隆抗体,用亲和层析的方法纯化抗体,并用ELISA法双向琼脂扩散,W esten-b lot和免疫组化等方法对多克隆抗体进行测定。纯化的抗体标记荧光素,用免疫组化的方法鉴定并用于临床肾病的辅助诊断。结果:获得的抗体琼脂双扩滴度为1∶32。ELISA法测定效价为1∶128 000,W esten-b lot证实抗体特异性识别人IgG。纯化后抗体效价仍有1∶56 000,灰度分析证实纯化后的抗体纯度达80%。间接法免疫组化检测抗体滴度为1∶800。标记荧光后效价无明显下降,免疫组化鉴定在临床病例中该荧光抗体能特异性识别人IgG。结论:得到纯化后的抗人IgG抗体有良好的特异性和亲和性,抗体的结合力较高,标记荧光后得到的多克隆荧光抗体对具有IgG阳性的肾组织反应特异性强,与商品化的抗人IgG抗体比较,效价及特异性均无显著差异,可用于肾病的临床诊断。
- 段春光刘彦仿杨守京王彩云余璐
- 关键词：多克隆抗体荧光抗体病理诊断
- 人热休克蛋白70的原核高效表达
- 2004年
- 将人热休克蛋白基因hsp70片段克隆到高效原核表达载体pMAL-c2X中,酶切鉴定并进行DNA测序。将该重组表达载体转化大肠杆菌DH5α,用IPTG在不同温度及时间下进行诱导表达。收集细菌,菌体裂解后进行SDS-PAGE及West-ernblot检测,并以凝胶薄层扫描分析表达水平。结果表明,成功地构建了含人hsp70基因的表达载体pMAL-c2X/hsp70,该载体能在大肠杆菌中表达相对分子质量为110000并具有抗原活性的融合蛋白;改变诱导温度和时间,目的蛋白表达总量及可溶性部分所占比例不同。对人hsp70基因的克隆、表达,并对其进行表达条件的优化,为研究HSP70的结构、功能与临床应用提供了必要条件。
- 高娟杨守京付勇刘彦仿
- 关键词：基因HSP70克隆原核表达
- 汉滩病毒体外诱导热休克蛋白70的表达
- 2006年
- 目的定量研究汉滩病毒(HTNV)体外诱导细胞热休克蛋白70(HSP70)及HSP70 mRNA的表达规律。方法以HTNV敏感细胞株Vero-E6为对象,体外实验性感染Hantaan 76-118。采用原位杂交、免疫细胞化学染色法及逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)观察感染后72 h内HSP70的表达并加以定量分析。结果与模拟感染组相比,Hantaan 76-118感染Vero-E6细胞后0．5 h．HSP70 mRNA开始升高,于感染后12 h达高峰,并持续高表达至72 h(P＜0．05)。Hantaan 76-118感染后2 h可检测到HSP70蛋白表达增加,于感染后12 h达高峰,并持续高表达至72 h(P＜0．05)。结论体外感染HTNV可诱导Vero-E6细胞产生热休克反应并表达HSP70,这种快速、持久的应激反应,可能对HSP70持续发挥其细胞保护作用具有重要意义。
- 余璐马恒段春光孙玉静杨守京
- 关键词：汉滩病毒热休克蛋白质70热休克反应
- 汉滩病毒结构蛋白与该病毒感染诱导表达的多种热休克蛋白的研究被引量：6
- 2004年
- 目的研究汉滩病毒(HTNV)感染乳鼠诱导其脑组织表达热休克蛋白(HSPs)及其与病毒结构蛋白的相互关系。方法选出生2～3d的昆明乳鼠实验性感染HTNV,取感染后8d的乳鼠脑组织制成组织匀浆液,用双特异性抗体夹心酶联免疫吸附法(ELISA)及免疫共沉淀方法分析病毒核衣壳蛋白(HTNVNP)和囊膜糖蛋白G2(HTNVG2)与94000葡萄糖调节蛋白(GRP94)、HSP70、HSP27三种HSPs的关系。结果HTNV感染乳鼠诱导其脑组织表达GRP94、HSP70;HTNVNP同时与GRP94、HSP70、HSP27相互作用,呈复合物形式存在;HTNVG2也与HTNVNP和HSP27存在相互作用,形成HTNVG2NPHSP27非共价复合物。结论HTNV感染可诱导表达多种HSPs,这些HSPs同时与病毒结构蛋白发生相互作用形成非共价复合物,表明在病毒感染和病毒结构蛋白的合成、转运等过程中有多种HSPs伴侣分子的参与,其相互作用机制有待进一步研究。
- 高娟杨守京刘彦仿
- 关键词：汉滩病毒结构蛋白病毒感染
- Hsp70-NP融合蛋白增强诱导HTNVNP特异性CTL的实验研究被引量：1
- 2006年
- 本文采用纯化蛋白Hsp70-NP,NP,Hsp70分别免疫C57/BL6小鼠,取各组小鼠脾淋巴细胞进行淋巴细胞增殖试验和细胞毒试验。此外,为了获得细胞毒实验的靶细胞,本文还采用脂质体介导质粒pcDNA3.1/S转染黑色素瘤细胞B16,通过G418筛选稳定克隆,并用RT-PCR,Westernblots以及免疫荧光染色证实N蛋白在胞浆中表达。淋巴细胞增殖实验表明,Hsp70-NP,NP组小鼠脾淋巴细胞均能够对体外抗原刺激产生增殖反应,而Hsp70-NP组的增殖指数明显高于NP免疫组。细胞毒实验结果表明,LDH的释放具有效应细胞依赖性,Hsp70-NP,NP免疫组脾淋巴细胞均可以特异性杀伤靶细胞B16-N,而Hsp70-NP免疫组的杀伤率显著高于NP免疫组。实验结果显示,Hsp70可以增强NP诱导产生特异性CTL的能力。本研究结果为进一步设计基于NP的合成肽疫苗或基因疫苗提供了重要实验依据。
- 李静叶正旭杨守京李铠男高娟刘彦仿
- 关键词：汉滩病毒核蛋白细胞毒性T淋巴细胞
- 胸膜外肉瘤样恶性间皮瘤临床病理学观察被引量：2
- 2017年
- 目的 探讨胸膜外肉瘤样恶性间皮瘤临床病理特点、诊断及鉴别诊断.方法 收集6例发生于胸膜外的肉瘤样恶性间皮瘤病例,分析其临床资料、组织学特征及免疫组织化学结果,进行电镜观察,并对所有病例进行随访.结果 患者男3例,女3例;年龄41~75岁,平均年龄60岁,均无石棉接触史和胸膜病变.肿瘤分别发生在腹腔（3例）、骨（2例）和颈部（1例）.光镜检查显示,肿瘤细胞呈梭形或多形性,呈束状排列,形态类似于纤维瘤病、纤维肉瘤或恶性纤维组织细胞瘤.瘤细胞异型性明显,核分裂象易见.免疫组织化学结果显示,肿瘤细胞呈广谱细胞角蛋白（6/6）、calretinin （5/6）、podoplanin （6/6）、D2-40 （4/6）、波形蛋白（6/6）、WT1 （4/6）、CD10 （3/6）和平滑肌肌动蛋白（4/6） 阳性,Ki-67阳性指数25%~55%,平均〉40%,而其他标志物均阴性.电镜观察：瘤细胞呈梭形、椭圆形、多边形,胞质中含有丰富的粗面内质网、细胞内管腔和更罕见的胞质内纤毛,偶尔的肿瘤细胞内出现少量的张力中间丝,肿瘤细胞间具有小的细胞间连接和从肿瘤细胞表面突出的钝小流产微绒毛.该组病例随访9个月,有1例复发,4例转移,均死亡.结论 胸膜外肉瘤样恶性间皮瘤极为少见,易与其他类型肉瘤混淆,需借助于免疫组织化学进行诊断与鉴别诊断.
- 卫关辰杨守京
- 关键词：免疫组织化学
