南通市科技局社会发展科技计划项目(S2010018)
- 作品数：2 被引量：4H指数：1
- 相关作者：冯新陈莉曹一鑫王建力更多>>
- 相关机构：海门市皮肤病防治医院南通大学更多>>
- 发文基金：南通市科技局社会发展科技计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 靶向VEGF的shRNA对皮肤鳞癌A431细胞的作用被引量：1
- 2012年
- 目的在皮肤鳞癌细胞(A431)中下调VEGF mRNA和VEGF蛋白的表达,观察其对A431细胞增殖、迁移和黏附的影响。方法构建psVEGF-shRNA真核表达质粒(psilencer-VEGF1-shRNA,VEGF-s1;psilencer-VEGF2-shR-NA,VEGF-s2)干预A431细胞,同时构建含随机靶序列的阴性对照表达质粒(psilencer-Target-off-shRNA,T-off)。RT-QPCR,Western blot和ELISA检测细胞内VEGFmRNA和蛋白表达;CCK-8法检测细胞活性;流式细胞仪检测细胞周期百分比与细胞凋亡;划痕试验和Transwell小室试验检测细胞二维、三维空间的迁移能力;FN黏附试验检测细胞黏附潜能。结果 A431细胞转染psVEGF-shRNA后活性降低,细胞周期发生阻滞,与对照组相比细胞比率显著增加,在G1期明显降低,在S期伴细胞调亡增加。细胞内VEGFmRNA和VEGF蛋白表达下降,细胞迁移和黏附潜能力均受到抑制(P<0.05)。结论 VEGF是人皮肤鳞癌A431细胞生长相关的重要基因,干扰VEGF基因能有效抑制A431细胞的增殖、迁移和黏附。
- 曹一鑫冯新王建力陈莉
- 关键词：VEGF
- 荷人皮肤鳞状细胞癌裸鼠移植瘤模型中干扰血管内皮生长因子的实验研究被引量：3
- 2012年
- 目的在沉默血管内皮生长因子（VEGF）的荷人裸鼠皮肤鳞状细胞癌（鳞癌）移植瘤中观察肿瘤生长，探讨靶向VEGF小发夹核酸（shRNA）的作用。方法生物合成靶向人VEGF基因的shRNA干扰真核表达质粒（psilencer-VEGFl-shRNA、VEGF-sl；psilencer-VEGF2-shRNA、VEGF-s2），同时合成含随机靶序列的阴性对照表达质粒（psilencer-Target-off-shrank，T-off）。将构建的质粒分别转染于筛选的人皮肤鳞癌细胞株（A431），获得稳转细胞株。实时荧光定量逆转录一聚合酶链反应、双抗体夹心酶联免疫吸附法分别检测稳转细胞株中VEGFmRNA和VEGF蛋白的表达。用稳转细胞株制备荷人皮肤鳞癌裸鼠移植瘤模型，观察裸鼠体内肿瘤生长，6周后（20d）处死裸鼠进行肿瘤病理学研究，免疫组化染色检测瘤组织VEGF、增殖细胞核抗原（PCNA）和CD34蛋白的表达。应用stata7．0统计学软件进行统计学处理。组间比较采用t检验。结果转染VEGF-sl和VEGF-s2的A431细胞中VEGFmRNA表达分别为27．85±3．95和24．69±2．83，表达量显著低于未转染组（54．06±6．38，￡值分别为6．05和7．29，P值均〈0．01）；VEGF蛋白表达分别为32．67±2．52和29．27±1．10，亦显著低于未转染组（52．85±2．23，t值分别为8．04和11．53，P值均〈0．01）。用转染VEGF-sl和VEGF-s2的A431细胞制备荷人皮肤鳞癌裸鼠移植瘤模型，裸鼠肿瘤体积分别为（192．50±10．90）mm^3和（203．67±3．21）mm^3，明显小于未转染组（272．00±21．07mm^3，t值分别为5．80和5．55，P值均〈0．01）；裸鼠肿瘤重量分别为（0．05±0．03）g和（0．13±0．04）g，与未转染组（0．25±0．02g）比较明显减轻（t值分别为9．60和4．64，P值均〈0．01）；裸鼠肿瘤细胞中VEGF蛋白表达率分别为52．00％±2．00％和56．67％±3．06％，PCNA阳性率分另0为37．01％±2．41％和33．94％±3．25％，CD34阳性血管数分别
- 曹一鑫冯新王建力陈莉
- 关键词：RNA干扰血管内皮生长因子类
