博士后科研启动基金(200703)
- 作品数：6 被引量：21H指数：2
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- 相关机构：沈阳农业大学辽宁省农业科学院更多>>
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- 黄瓜细菌性白枯病菌ELISA检测方法的建立被引量：2
- 2012年
- 以黄瓜细菌性白枯病菌胞内蛋白为免疫原,制备抗体,建立黄瓜细菌性白枯病菌ELISA检测方法。结果表明:测定纯化后抗体的效价为1∶4000,与黄瓜细菌性角斑病菌等26个菌株无交叉反应,特异性强;方阵试验测定抗原的最佳包被浓度为107cfu.mL-1,抗体的工作浓度为1∶2000;优化ELISA检测条件,确定抗体4℃过夜包被效果最好,选择5%的胎牛血清作为抗体的封闭液,抗体的最佳封闭时间为1.5h,抗体的最佳孵育时间为1.5h,最佳底物作用时间为10min;建立ELISA标准工作曲线,表明抗体的灵敏度为105cfu.mL-1。ELISA检测田间采集的白枯病病叶显示,抗体可与病叶提取液发生特异性反应,而与健康叶提取液呈阴性反应,由此可确定白枯病菌的存在与否。本方法可用于田间黄瓜细菌性白枯病快速检测,以及时指导病害防治。
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- 关键词：抗体酶联免疫吸附分析
- 植物病原细菌快速检测技术研究进展被引量：1
- 2012年
- 综述了近年来出现的植物病原细菌免疫和分子检测技术,简要介绍并比较了它们的原理、特点及其应用。免疫和分子检测技术具有特异性强、灵敏度高、简便、快速等优点,在植物病原细菌的检测中有着广泛的应用前景。
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- 关键词：植物病原细菌
- 快速检测黄瓜细菌性角斑病菌的间接ELISA法优化被引量：2
- 2014年
- 采用黄瓜细菌性角斑病菌作为包被抗原,对反应条件进行优化,建立较优黄瓜细菌性角斑病菌间接酶联免疫吸附分析(ELISA)检测方法。通过对抗原包被浓度和抗体稀释浓度、封闭液和封闭时间、抗体温育时间等的优化,确定ELISA法最低检测限。结果表明:抗原的较优包被浓度为106cfu·mL-1,抗体的较优工作浓度为1∶4000,以5%胎牛血清作为封闭液,在37℃下封闭1.5h,加入抗体温育1.5h是间接ELISA法的较优反应条件,方法的检测限为105cfu·mL-1。对田间采集的病叶进行检测表明,该方法可准确检测出黄瓜细菌性角斑病菌,可用于田间黄瓜细菌性角斑病的快速诊断。
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- 关键词：酶联免疫吸附分析抗体
- 免疫胶体金试纸条快速检测黄瓜细菌性白枯病菌
- 黄瓜细菌性白枯病是近年来在辽宁、山东、黑龙江等省保护地黄瓜上出现的一种为害较重的细菌性新病害，调查结果表明，该病害发病率一般达10％ ～20％，严重地块达40％以上。该病主要为害叶片，田间症状为病斑圆形或近圆形，中间白色...
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- 关键词：胶体金试纸条
- 黄瓜细菌性白枯病病菌检测试纸条的研制被引量：2
- 2014年
- 应用胶体金免疫层析技术研制了黄瓜细菌性白枯病病菌[Pseudomonas viridiflava（Burkholder 1930）Dowson1939]检测试纸条。采用柠檬酸三钠法还原氯金酸制备胶体金,标记黄瓜细菌性白枯病病菌多克隆抗体,将金标抗体喷涂在结合垫上,将黄瓜细菌性白枯病病菌抗体和羊抗兔二抗包被在硝酸纤维素膜上作检测线和质控线,组装制成黄瓜细菌性白枯病病菌检测试纸条。用试纸条检测黄瓜细菌性白枯病病菌的结果表明,制备的试纸条特异性好,与其他常见植物病原细菌等无交叉反应,对黄瓜叶片中黄瓜细菌性白枯病病菌的最低检测限为106cfu/m L,能在5~15 min内快速检测出黄瓜细菌性白枯病病菌,适合田间现场快速检测黄瓜细菌性白枯病病菌。
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- 关键词：胶体金免疫层析技术
- 疫胶体金试纸条快速检测黄瓜细菌性白枯病菌
- 黄瓜细菌性白枯病是近年来在辽宁、山东、黑龙江等省保护地黄瓜上出现的一种为害较重的细菌性新病害，调查结果表明，该病害发病率一般达10％ ～ 20％，严重地块达40％以上。该病主要为害叶片，田间症状为病斑圆形或近圆形，中间白...
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- 关键词：胶体金试纸条
- 黄瓜细菌性白枯病菌特异性抗体制备及其ELISA检测方法的建立被引量：3
- 2011年
- 目的:制备黄瓜细菌性白枯病菌特异性抗体,建立其酶联免疫吸附分析(ELISA)的检测方法。方法:分别以黄瓜细菌性白枯病菌胞内蛋白和菌体为免疫原,制备两种抗体,优化间接ELISA检测条件。结果:间接ELISA法测定两种纯化的菌体抗体(J4)和胞内蛋白抗体(P2)效价分别为1∶32 000和1∶4 000,二抗的最佳稀释度为1∶3 000,方阵试验表明J4的工作浓度为1∶16 000,抗原的最佳包被浓度为106 cfu/ml,P2的工作浓度为1∶2 000,抗原的最佳包被浓度为107 cfu/ml,两种抗体的灵敏度均为105cfu/ml,与黄瓜细菌性角斑病菌等26个菌株无交叉反应,特异性强。结论:成功制备了黄瓜细菌性白枯病菌特异性抗体,建立了ELISA检测方法。
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- 关键词：抗体制备效价酶联免疫吸附分析
- 黄瓜细菌性角斑病免疫胶体金检测试纸条的研制被引量：14
- 2011年
- 应用免疫胶体金技术进行黄瓜细菌性角斑病(Pseudomonas syringae pv.lachrymans)的快速检测研究。为了研制黄瓜细菌性角斑病的免疫胶体金检测试纸条,通过柠檬酸三钠还原法制备胶体金,选择25 nm胶体金标记黄瓜细菌性角斑病菌多克隆抗体(CMb)。采用双抗夹心法,将CMb-胶体金复合物包被在胶体金结合垫上,将羊抗兔二抗和CMb包被在硝酸纤维素膜上,分别作为质控线(C)和检测线(T),组装成试纸条。该试纸条检测灵敏度为106 cfu/mL,与唐菖蒲疮痂病菌(Pseudomonas fluorescens biovarⅡ)等26个菌株无交叉反应,特异性强,检测时间为15 min。稳定性试验表明试纸条在37℃条件下放置15 d可保持检测结果的可靠性。用试纸条对田间采集的病叶进行检测,C线和T线清晰可见,缓冲液对照呈阴性反应。本试纸条可应用于生产上黄瓜细菌性角斑病早期快速检测,进而指导病害防治。
- 孙艳秋赵奎华曹远银刘长远梁春浩
- 关键词：黄瓜细菌性角斑病胶体金试纸条
