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根癌农杆菌介导的香蕉高效遗传转化系统的建立被引量：15: 2010年; 为建立根癌农杆菌介导的香蕉高效遗传转化系统,本研究以雄性花诱导产生的贡蕉胚性悬浮系为转化受体,从潮霉素筛选浓度和筛选方法两方面进行了优化。研究结果表明,贡蕉悬浮系在M2液体培养下潮霉素的适合筛选浓度为5mg/L。将液体共培养7d后的贡蕉胚性悬浮系转接到M2液体筛选培养基进行培养,每10d继代一次。GUS组织染色表明,经过3代抗性筛选的ECS几乎全为转化细胞。经过3个月的胚诱导培养获得成熟抗性体细胞胚,平均抗性体细胞胚得率为4580个/mLPCV。同时,转化苗的PCR检测结果表明,gus基因已整合到贡蕉基因组中。本研究表明液体筛选系统有利于转化胚性悬浮细胞的增殖,大大地提高了香蕉转基因的转化效率。; 胡春华魏岳荣易干军黄秉智黄永红; 关键词：香蕉

利用SSH技术鉴定香蕉体细胞胚发生相关基因被引量：1: 2011年; 本研究以野生蕉胚性悬浮系为材料,将胚性细胞增殖培养基上的香蕉胚性悬浮系作为对照,体胚诱导培养基上的培养材料为处理,利用抑制性消减杂交(suppression subtractive hybridization,SSH)技术,构建野生蕉胚性悬浮系激素诱导的胚胎发育差异表达cDNA文库,随机挑选阳性克隆并进行生物信息学分析。结果显示,聚类得到62条非冗余EST。经Blast比对后发现其中18条没有对应功能的相似序列,46条在GenBank中有同源序列,其中12条为功能未知的基因。在文库中功能已知的ESTs中,这些基因涉及基础代谢(primary metabolism)、蛋白结合(protein binding)、转录(transport)细胞分化(cell differentiation)等功能。文库中发现了一些可能与体细胞胚胎发育相关的基因如TPD1基因、热激蛋白基因、谷胱甘肽-S-转移酶基因、锌指蛋白基因以及细胞壁富含羟脯氨酸糖蛋白基因等。试验结果为获得香蕉体细胞胚胎发育相关基因全长并验证这些基因的功能提供依据。; 胡春华魏岳荣易干军; 关键词：香蕉抑制性消减杂交体细胞胚

东莞大蕉超表达拟南芥CBF1基因及其抗寒性检测被引量：6: 2012年; 【目的】研究超表达拟南芥CBF1基因(AtCBF1)对大蕉抗寒性的影响,为从大蕉克隆抗寒相关基因奠定基础。【方法】采用农杆菌介导法转化东莞大蕉的胚性细胞悬浮系,获得转AtCBF1基因的大蕉植株;利用GUS组织染色、PCR、RT-PCR以及RT-qPCR对转基因植株进行鉴定;比较低温处理后的转基因株系和对照的冷害特征以及超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量等生理生化指标,鉴定转基因大蕉植株的抗寒能力。【结果】试验共获得6个抗性再生转化系。GUS组织染色结果表明,除T1外,其余均为阳性;PCR鉴定结果表明,AtCBF1在6个抗性再生转化系均为阳性,而GUS基因在T1转化系中没有检测出;RT-PCR结果表明,AtCBF1在6个转化系均得到表达,对T1、T2和T3 3个转化系进行RT-qPCR检测发现,AtCBF1基因在3个转基因株系表达水平存在差异;在低温处理下,转基因植株的叶片相对电导率、MDA的累积都低于非转基因植株,而SOD总活性高于对照;低温处理条件下,转基因植株叶片的冷害症状明显轻于对照。【结论】AtCBF1在大蕉中超表达,具有增强大蕉SOD活性,降低因低温导致的MDA含量和离子渗漏率,缓解质膜过氧程度,进而改善大蕉植株抗低温胁迫的能力。; 刘凯胡春华杜发秀张玉娥魏岳荣易干军; 关键词：转基因抗寒性

几丁质酶基因克隆及其野生蕉转化被引量：9: 2010年; 本研究根据GenBank公布的木霉几丁质酶基因(chitinase)序列设计一对引物,采用RT-PCR方法从木霉(Trichoderma spp.)中克隆获得了几丁质酶基因全序列,编码区共1275bp,推测其编码424个氨基酸,该基因与哈茨木霉(Trichoderma harzianum)的内切几丁质酶基因chit42(GenBank accession No.L14614)具有99%的同源性。在此基础上,将获得的几丁质酶基因从pGEM-T载体中用XbaⅠ和BamHⅠ切下,克隆到pBI121植物表达载体的XbaⅠ和BamHⅠ位点,构建了植物表达载体pBI-chit并将其转入根癌农杆菌菌株EHA105。该菌株转化野生蕉(Musa itinerans Cheesm.)胚性细胞悬浮系,经过抗性筛选、胚的诱导和萌发,获得成熟体细胞胚和再生苗。通过GUS组织化学法检测和PCR方法鉴定,结果表明外源基因已经成功转入到野生蕉中。本研究为下一阶段转化香蕉栽培品种和筛选抗香蕉枯萎病新种质奠定一定的基础。; 胡春华魏岳荣刘凯易干军黄秉智黄永红; 关键词：野生蕉几丁质酶基因克隆转基因

农杆菌介导GUS基因转化贡蕉的研究: 以贡蕉‘Pisang Mas’(AA)胚性悬浮细胞系为转化受体,通过农杆菌介导gusA基因的转化,优化和完善农杆菌介导的香蕉遗传转化体系,为更多外源目的基因转入香蕉奠定基础。建立贡蕉胚性悬浮细胞系(embryogenic...; 胡春华魏岳荣易干军黄永红; 关键词：香蕉基因; 文献传递

拟南芥CBF1基因植物表达载体构建及其对野生蕉的遗传转化被引量：2: 2011年; 从拟南芥中克隆CBF1基因,转入到植物表达载体pBI121的XbaI和SacI位点,得到中间重组质粒pBI121-CBF1,用EcoRI和HindⅢ将35S启动子与CBF1基因从pBI121-CBF1切下,转入到植物表达载体pCAMBIA1301中,构建植物表达载体p1301-CBF1。将构建的植物表达载体转入农杆菌EHA105,采用农杆菌介导法转化野生蕉胚性悬浮细胞,经GUS组织化学染色和PCR鉴定,证明CBF1基因已转入野生蕉中。; 刘凯胡春华魏岳荣易干军邵秀红; 关键词：拟南芥 CBF1基因野生蕉胚性悬浮细胞

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广东省农科院院长基金(20090104)