黑龙江省青年科学基金(QC04C17)
- 作品数：2 被引量：0H指数：0
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- 人凝血因子Ⅷ cDNA在鼠体内的转染与表达
- 2010年
- 目的逆转录病毒载体介导的人凝血因子Ⅷ(FⅧ)鼠肝细胞BRL-3A,通过门静脉途径输入后,观察其在鼠体内的表达。方法将一B区缺失(760～1639aa)的人FⅧcDNA(FⅧBDcDNA)克隆至逆转录病毒载体pLNCX2,构建重组表达载体pLNCX2-FⅧBD,感染BRL-3A细胞。将转染后的靶细胞经门静脉输注到大鼠体内,通过免疫组化法和ELISA法检测人FⅧ在大鼠体内的表达。结果在输注后第1天可检测到人FⅧ抗原,平均为7.2ng/mL大鼠血浆,可持续表达20天;输注的细胞主要分布在肝、脾,在第30天细胞的数目没有明显减少。结论 pLNCX2-FⅧBD转染BRL-3A细胞输注Buffalo大鼠体内后,获得短暂的人FⅧ的生理水平表达,可持续20天左右,为基因治疗血友病A奠定了基础。
- 刘昶纪艳超潘尚哈
- 关键词：基因表达
- 逆转录病毒载体介导人凝血因子Ⅷ在肝细胞中的表达
- 2010年
- 目的建立逆转录病毒载体介导的人凝血因子Ⅷ（FⅧ）鼠肝细胞BRL-3A。方法将一B区缺失（760~1 639 aa）的人FⅧcDNA（FⅧBD cDNA）克隆至逆转录病毒载体pLNCX2,构建重组表达载体pLNCX2-FⅧBD。感染BRL-3A细胞,分别采用一期法、ELISA法检测细胞培养上清中人FⅧ的凝血活性（FⅧ：C）和抗原含量（FⅧ：Ag）。结果 pLNCX2-FⅧBD在鼠肝细胞BRL-3A细胞中获得良好表达,在24 h内每毫升中106细胞表达FⅧ：C为1.12 U,FⅧ：Ag为350 ng。结论逆转录病毒载体能够介导人FⅧ在肝细胞中的表达,为血友病A的基因治疗奠定了基础。
- 刘昶纪艳超潘尚哈
- 关键词：血友病A逆转录病毒基因表达
